1.1 Серотонин синтезируется из…

А. гистидина

Б. тирозина

В. триптофана

Г. пролина

1.2. В состав коферментов аминотрансфераз входит витамин…

А. В₁

Б. В₂

В. В_С

Г. В₅

Д. В₆

Е. В₁₂

1.3. Нуклеотиды расщепляются ферментами :

А – нуклеазами;

Б – нуклеозидазами;

В – пептидазами;

Г – нуклеотидазами;

Д – нуклеозидфосфорилазами

Вид 2. 2.1. Установить соответствие:

1.кетогенные аминокислоты-… А. аланин

2.глюкогенные аминокислоты-… Б. триптофан

3.одновременно и кетогенные и В. лейцин

глюкогенные аминокислоты-… Г. треонин

Д. фенилаланин

Е. лизин

2.2 Установление соответствия:

1. механизм репликации ДНК 2. укажите этап процессинга м-РНК 3. что такое рилизинг-факторы 4. что такое интрон? 5. что такое экзон?

А. сплайсинг Б. факторы терминации трансляции В. полуконсервативный Г. кодирующий участок гена Д. некодирующий участок гена

2.3. Установить соответствие:

реакция тип превращения

1) УМФ → ЦМФ а) фосфорилирование;

2) дТМФ → дТДФ б) метилирование

3) дУМФ → дТМФ в) восстановление;

4) ЦДФ → дЦДФ г) аминирование

Вид 3. 3.1. Ксантиноксидаза катализирует реакции:

1) окисления мочевой кислоты;

2) окисления гипоксантина;

3) гидролиза аллантоина;

4) окисления ксантина.

3.2. Для биосинтеза РНК необходимы…

1. рибонуклеозидтрифосфаты

2. репрессор

3. ДНК-матрица

4. праймер

5. ионы кальция

3.3.Ингибиторами трансляции являются…

1. линкомицин

2. тетрациклины

3. стрептомицин

4. альфа-аматидин

Вид4.1. 1.Незаменимые аминокислоты могут синтезироваться в организме, потому что их синтезирует флора кишечника.

2.При шизофрении нарушен обмен серотонина, потому что снижена активность ДОФА-декарбоксилазы.

3. Для лечения гиперурикемии применяют препарат аллопуринол потому, что аллопуринол является конкурентным ингибитором фермента ксантиноксидазы.

Примеры ситуационных задач.

Задача 1.

Аминокислота метионин используется как лекарственный препарат с липотропным эффектом (удаляет из печени избыток жира) при циррозе, токсических поражениях печени, хроническом алкоголизме. Введение метионина при атеросклерозе вызывает снижение содержания в крови холестерина и повышения фосфолипидов. Объясните терапевтические эффекты метионина.

Для этого: А. перечислите его биологические функции

Б. напишите реакцию его активации

В. напишите схему его участия в синтезе сложных липидов.

Кратко выпишите принцип метода и порядок проведения работ, выполняемых на занятии, оставляя места для расчета и вывода.

Задача 2.

Больного беспокоят боли в области желудка после приема пищи. Отрыжка с неприятным запахом тухлых яиц.

Ответьте:

1. Чем вызваны такие нарушения?

2. Какие процессы могут быть причиной появления такого запаха?

3.Какие обследования требуются провести больному?

4. Что рекомендуется больному для процесса нормализации пищеварения

Задача 2.

Структурный аналог тимина – 5-фторурацил оказывает сильное цитотоксическое действие и часто используется в химиотерапии опухолей. Для объяснения действия 5-фторурацила:

1.Напишите схему реакции, которую ингибирует этот препарат.

2.Укажите, синтез какой нуклеиновой кислоты нарушается в присутствии этого препарата и почему.

Самостоятельная работа студентов

Работа 1. Колориметрический метод определения активности аспартат- и аланин-аминотрансфераз в сыворотке крови.

Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови имеет важ­ное значение для диагностики болезней печени (гепатитов). Аланинаминотрансфераза повышается весьма рано. При затяжном течении болезни наблю­дается длительная гиперферментемия. При инфаркте миокарда в 95% случаях в сыворотке повышается активность аспартатаминотрансферазы. Изменения аминотрансфераз наблюдаются и при некоторых других заболеваниях.

В сыворотке здоровых людей содержание аспартатаминотрансферазы (АсАТ) колеблется в пределах 0,028-0,139 мкмоль • С^-1 • Л^-1, а содержание аланинаминотрансферазы (АлАТ) - в преде-лах 0,028-0,196 мкмоль- С^-1• Л^-1.

Принцип метода. В результате переаминирования, происходящего под действием АсАТ и АлАТ, образуются соответственно щавелевоуксусная (ЩУК, оксалоацетат) и пировиноградная (ПВК) кислоты:

СООН СООН СООН СООН

   

СН-NН₂ + С=О  С=О + СН-NН₂

  АсАт  

СН₂ (СН₂)₂ СН₂ (СН₂)₂

   

СООН СООН СООН СООН

аспартат -кетоглутарат оксалоацетат глутамат

СООН СООН СООН СООН

   

СН-NН₂ + С=О  С=О + СН-NН₂

  АлАт  

СН₃ (СН₂)₂ СН₃ (СН₂)₂

 

СООН СООН

аланин -кетоглутарат пируват глутамат

В процессе другой ферментативной реакции (декарбоксилирования) ЩУК превращается в ПВК. При добавлении кислого 2,4-динитрофенилгидразина энзиматический процесс останав-ливается и образуется гидразон пировиноградной кислоты. Последний в щелочной среде дает окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоты и опре

деляется с помощью фотоэлектроколориметра.

Ход определения. Определение АсАТ.

Одновременно готовят опытную и контрольную пробы.

Опытная проба. В пробирку вносят 0,5 мл субстратного раствора (29,2 мг а-кетоглутаровой кислоты и 2,66 г D,L-аспарагиновой кислоты в 100 мл 0,1 М фосфатного буфера, рН 7,4), добавляют 0,1 мл сыворотки и пробирку помещают в термостат при температуре 37° С на 1 час. Затем прибавляют 0,5 мл динитрофенилгидразинового раствора (19,8 мг 2,4-динитро-фенилгидразина в 100 мл 1 н. раствора НС1) и пробу выдерживают 20 мин при комнатной температуре для развития реакции. Затем приливают 5 мл 0,4 н NаОН, тщательно перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 мин для развития окраски. Оптическую плотность измеряют на ФЭКе с зеленым светофильтром в кювете на 10 мм против контроля.

Контрольная проба. Содержит все ингредиенты опытной пробы за исключением сыворотки крови. Вместо нее берут 0,1 мл дистиллированной воды и инкубируют в тех же условиях, что и опытную.

Определение АлАТ.

Одновременно готовят опытную и контрольную пробы.

Опытная проба. В пробирку вносят 0,5 мл субстратного раствора для определения АлАТ (29,2 мг -кетоглутаровой кислоты и 1,78 г D,L-аланина в 100 мл 0,1 М фосфатного буфера, рН 7,4), затем добавляют 0,1 мл испытуемой сыворотки и помещают в термостат на 30 мин при 37° С. Дальнейший ход анализа такой же, как при определении АсАТ.

Контрольная проба. В контрольную пробу вместо сыворотки крови берут 0,1 мл дистиллированной воды.

Расчет активности ферментов производят по калибровочному графику, показывающему зависимость оптической плотности от содержания ПВК с учетом времени инкубации.

Работа 2. Определение содержания мочевины в сыворотке крови

ферментативным методом.

Принцип метода. Уреаза гидролизует мочевину с образованием аммиака и двуокиси углерода. Аммиак реагирует с производными фенола и щелочным раствором гипохлорита с образованием цветного соединения, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию мочевины в анализируемой пробе.

Реактивы. Рабочий раствор - уреаза, нитропруссид натрия+буферно-субстратный раствор рН 6,5. Реактив 3 - раствор гипохлорита натрия и гидроокиси натрия.

Ход определения.

	Опытная проба	Холостая проба
Сыворотка крови, мл	0,02	-
Рабочий раствор, мл	2,0	2,0
Перемешать и инкубировать 10 мин при 370 С
Реактив 3, мл	2,0	2,0

Перемешать, выдержать 15 мин при комнатной температуре. Инкубационную смесь следует предохранять от воздействия прямого света. После инкубации измеряют оптическую плотность опытной (А) пробы против холостой пробы в кюветах на 10 мм при длине волны 670 нм на ФЭКе.

Расчет концентрации мочевины в опытной пробе проводят по формуле:

С = (А/0,21)10 ммоль/л.

Норма 3,5-9,0 ммоль/л.

Работа 4. Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови фосфорновольфрамовым методом.

Принцип метода. Мочевая кислота восстанавливает фосфорновольфрамовый реактив (реактив Фолина) с образованием комплекса голубого цвета. Интенсивность окраски раствора, фотометрируемого при красном светофильтре (590-700 нм), пропорциональна содержанию в анализируемой жидкости мочевой кислоты.

В норме содержание мочевой кислоты в сыворотке крови составляет 0,2 – 0,5 ммоль/л (0,24 – 0,5 ммоль/л – у мужчин, 0,16 – 0,4 ммоль/л – у женщин). Повышение содержания мочевой кислоты в крови (гиперурикемия) и моче наблюдается при многих патологических состояниях, связанных с усиленным распадом нуклеопротеидов (лейкозах, лучевой болезни, сахарном диабете и др.), при нарушении ее выделения из организма (заболевания почек). Резко увеличивается концентрация мочевой кислоты при подагре, это сопровождается отложением ее солей в суставах и различных тканях организма.

Снижение концентрации мочевой кислоты в сыворотке крови наблюдается после применения АКТГ, салицилатов, при анемии, миеломной болезни, ксантинурии.

Ход определения. В пробирку вносят 8,0мл дистиллированной воды, 1,0 мл сыворотки крови, 0,5 мл раствора H₂SO₄ и содержимое пробирки перемешивают, затем добавляют 0,5 мл раствора Na₂WO₄ и после тщательного перемешивания через 5 – 10 мин смесь фильтруют посредством бумажного

фильтра. 3,0 мл полученного фильтрата используют для анализа.

В две другие пробирки отмеривают 3,0 мл дистиллированной воды (холостая проба) и 3,0 мл стандартного раствора мочевой кислоты.

В каждую пробирку вливают 1,5 мл раствора Na₂CO₃, содержимое пробирки перемешивают и вносят в нее 1,0 мл реактива Фолина. Раствор взбалтывают. Через 30 мин измеряют его оптическую плотность в кювете с шириной слоя 10мм при длине 590 – 700 нм (красный светофильтр ФЭКа). Показатели экстинкции опытной и стандартной проб сопоставляют с оптической плотностью с холостой (контрольной) пробы.

Расчет ведут по формулам:

Мочевая кислота (мг/100мл) = ( Е_оп × С_ст×10) /Е_ст = (Е_оп×5) /Е_ст

Мочевая кислота (моль/л) = ((Е_оп× С_ст×10) /Е_ст) ×0,059 = ((Е_оп × 5) Е_ст) × 0,059, где Е_оп – экстинкция опытной пробы; Е_ст – экстинкция стандартной пробы (за вычетом оптической плотности контрольной пробы); С_ст - концетрация стандартного раствора ) ×5 мг/100 мл; 0,059 – коэффициент пересчета в единицы СИ; 10 – коэффициент пересчета на сыворотку крови.

Работа 5. Количественное определение билирубина в сыворотке крови по методу Йендрашека.

В основе метода Йендрашека лежит реакция Ван ден Берга, описавшего способность билирубина давать розово–фиолетовое окрашивание с диазореактивоп Эрлиха. Интенсивность образующейся окраски прямо пропорциональна концентрации билирубина в растворе.

Разрушение билирубин–альбуминового комплекса (свободный или непрямой билирубин) осуществляется кофеиновым реактивом, который одновременно переводит билирубин в растворимое диссоциированное состояние. Интенсивность образующейся окраски измеряется на ФЭКе при зеленом светофильтре (563нм), а количество билирубина определяется по калибровочному графику.

Ход работы. В 3 пробирки отмерить указанные в таблице реактивы и колориметрировать через 5–10 мин. На ФЭКе в кювете 10 мм против контроля в зеленом светофильтре.

Реактивы	Пробирки
	1-я	2-я	3-я
Сыворотка крови	1мл	1мл	1мл
Кофеиновый реактив	3,5 мл	3,5 мл	-
Диазореактив	0,5 мл	-	0,5 мл
Физраствор	-	0,5 мл	3,5 мл
Типы билирубина	общий	контроль	прямой (связанный)

По калибровочному графику определите содержание общего и связанного билирубина. Вычитая из уровня общего билирубина количество прямого, рассчитайте содержание непрямого (свободного) билирубина.

Сопоставьте с нормой содержания у здоровых людей и сделайте вывод.

Эталоны ответов на тесты

Вид 1. 1.1. –Д; 1.2 – Д; 1.3 –Г;

Вид 2. 2.1- 1-В, Е; 2-А, Г; 3-Б, Д; 2.2: 4:1-В; 2-А; 3-Б; 4-Д; 5-Г; 2.3: 1-Г; 2-А; 3-Б; 4-В;

Вид 3. 3.1- 2,4; 3.2.- 1,3; 3.3.-1,2,3.

0. Вид 4. 1.-Е(---),2.- С(+--); 3.- В(++-