- •Раздел I. Методические указания и контрольные работы…………… 7
- •Раздел II.Самостоятельная работа студентов в период лабораторно-
- •РАздел I. Методические указания и контрольные работы по биологической химии
- •Распределение материала по контрольным работам Контрольная работа №1
- •Контрольная работа №2
- •Контрольная работа №3
- •Литература Основная:
- •1.Обмен руклеопротеинов
- •2.Обмен хромопротеинов
- •1.Введение в фармацевтическую биохимию. Микросомальное окисление
- •2.Конъюгация ксенобиотиков
- •Распределение вопросов контрольных работ по вариантам
- •Раздел II. Самостоятельная работа студентов в период лабораторНо – экзаменационной сессИи Модуль 1. Белки. Ферменты. Цель занятия:
- •План занятия
- •1.1. Белки
- •1.2. Ферменты
- •1.1. Дан трипептид гли – ала – вал
- •Примеры тестов для контроля исходного уровня знаний по теме «Ферменты»
- •Примеры ситуационных задач по теме «Белки»
- •Работа № 2. Количественное определение белка сыворотки крови биуретовым методом.
- •Фотоэлектроколориметр
- •Работа №3. Высаливание белков сыворотки крови сернокислым аммонием
- •Эталоны ответов к тестовым заданиям по теме «Белки»
- •План занятия
- •1.1. Наиболее токсичен при гипервитаминозе…
- •1.2Витамина в12 …
- •2.1.Фермент – кофермент – функция.
- •2.2. Витамин – антивитамин
- •1.3.Минуя стадию образования пирувата, в ацетил-КоА превращаются…
- •3.1. В состав пируватдегидрогеназного комплекса входят…
- •3.2. Примерами субстратного фосфорилирования являются реакции
- •3.3. Скорость окисления ацетата в цтк снижают…
- •2.1. Анилиновая проба на витамин д.
- •2.2. Реакция с серной кислотой.
- •5.1. Реакция с гидросульфитом натрия.
- •5.2. Реакция с раствором уксусно-кислой меди.
- •1. Обмен углеводов. Сахар крови. Регуляция сахара крови
- •1.1. В пентозный путь катаболизма вовлекается сразу … молекул глюкозо-6-фосфата
- •1.1. Ферменты, участвующие в расщеплении жиров в желудочно-кишечном тракте относятся к классу …
- •Эталоны ответов на ситуационные задачи по теме «Обмен углеводов» Задача 1.
- •1.1 Серотонин синтезируется из…
- •2.2 Установление соответствия:
- •Задача 1.
- •Эталоны ответов на ситуационные задачи Задача 1.
- •1.3 Развитие метгемоглобинемии может быть обусловлено:
- •3.2. В реакциях инактивации активных форм кислорода участвуют:
- •3.3. В основе детоксикации ядовитых веществ в печени лежат процессы:
- •Задача 1.
- •1. Реакция с хлорным железом.
- •2. Реакция с йодатом калия.
- •Ответы на ситуационные задачи
- •Контрольные вопросы
- •1.2. Первая фаза биотрансформации включает все перечисленные реакции,
- •1.3. Биотрансформация сульфаниламидов осуществляется с участием:
- •2.2. Установление локализации реакции биотрансформации:
- •3.2. Фармацевтическая биохимия изучает:
- •Примеры ситуационных задач
- •Задача 2
- •Некоторые биохимические показатели жидких сред организма
Работа № 2. Количественное определение белка сыворотки крови биуретовым методом.
Сыворотка крови содержит смесь белков, различных по физиологическому значению, структуре и физико-химическому свойству. Нормальное содержание белка в сыворотке крови 65-80 г/л, у детей до 6 месяцев 48-56 г/л.
Изменение содержания белка в сыворотке крови может свидетельствовать о различных нарушениях. Снижение содержания белка (гипопротеинемия) может наблюдаться при потерях белка, при белковом голодании или при снижении процессов биосинтеза белка в результате различных заболеваний (интоксикации, злокачественных новообразований, хронических заболеваний). Повышенное содержание белка (гиперпротеинемия) бывает редко, это может быть при сгущении крови из-за значительной потери жидкости (длительная рвота, ожоговая болезнь), при наследственных заболеваниях - парапротеинемиях.
Одним из методов количественного определения суммарного белка сыворотки крови является биуретовый метод, который основан на способности белков, содержащих пептидные связи, образовывать с ионами меди в щелочной среде комплексные соединения фиолетового цвета. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию белка в растворе.
Техника выполнения работы. В пробирку налить 0,1 мл исследуемой сыворотки, в другую (контрольную) пробирку–0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия. В обе пробирки добавить по 5,0 мл биуретового реактива (ионы Сu++ в щелочной среде). Содержимое обеих пробирок перемешать. Через 30 мин. измерить экстинцию исследуемого раствора на ФЭКе в кювете толщиной 1 см при длине волны 540-560 нм (зеленый светофильтр) против контрольного раствора.
Содержание белка в сыворотке крови (в г/л) найти по калибровочному графику, который построен с заранее известными концентрациями стандартного белка и выражает зависимость между количеством белка в крови и оптической плотностью (экстинкцией) окрашенного раствора.
Построение калибровочного графика.
Для этого применяют стандартный белок – альбумин сыворотки крови. Из 10% стандартного раствора альбумина в 4 пробирках готовят растворы белка (см. таблицу).
№ пробирки |
Стандартный 10% р-р альбумина, мл |
0,9% раствор хлорида натрия, мл |
Концентрация белка, г/л |
1 |
0,4 |
0,6 |
40 |
2 |
0,6 |
0,4 |
60 |
3 |
0,8 |
0,2 |
80 |
4 |
1,0 |
– |
100 |
Из каждой пробирки берут по 0,1 мл раствора, добавляют к нему 5,0 мл биуретового реактива. Через 30 мин. измеряют экстинкцию на ФЭКе против контрольного раствора (0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия и 5 мл биуретового реактива).
Полученные значения откладывают на оси ординат, а концентрацию белка (в г/л) на оси абсцисс.
Фотоэлектроколориметр
Для измерения оптической плотности или светопропускания жидких растворов по отношению к растворителю или стандартному раствору предназначен фотоэлектрический колориметр (ФЭК).
В основу работы этого прибора положен принцип уравнения интенсивности двух световых пучков, проходящих через оптические среды, при помощи переменной щелевой диафрагмы. Световые лучи от лампы, отразившись от зеркал, проходят через светофильтры, кюветы и попадают на фотоэлементы, которые подключены к гальванометру. Так что при равенстве интенсивности падающих на фотоэлементы световых пучков стрелка гальванометра стоит на нуле. При вращении барабана диафрагма, связанная с ним, меняет свою ширину и тем самым величину светового потока, падающего на фотоэлемент.Фотометрически нейтральный клин служит для ослабления светового потока, падающего на фотоэлемент.
Способ измерения.
1.В пучок света помещают кюветы с контрольным раствором.
2.Вращением ручки круговых фотометрических клиньев устанавливают стрелку гальванометра на нуль.
3.Затем в пучок света вводится кювета с исследуемым раствором, при этом стрелка гальванометра отклоняется от нулевого положения. Снимается показание.
4.Прибор после окончания работы выключить. Осторожно промыть кюветы.