1.1. Ферменты, участвующие в расщеплении жиров в желудочно-кишечном тракте относятся к классу …

А. лиазы

Б. трансферазы

В. гидролазы

Г. оксидоредуктазы

Д. лигазы

1.2. Высшие жирные кислоты образуются из всех перечисленных соединений, кроме:

А. триглицериды

Б. холестерин

В. эфир холестерина

Г. ацетил-КоА

Вид 2.

0. 2.1. Установить соответствие:

процесс 1. β-окисление 2. синтез жирных кислот

регуляторный фермент, ингибитор А. ацетил-КоА-карбоксилаза Б. карнитинацетилтрансфераза В. цитрат Г. малонил-КоА

2.2. Установить соответствие:

процесс 1.синтез кетоновых тел (ткань) 2.синтез пальмитиновой кислоты (в клетке) 3.окисление ЖК (в клетке) 4.синтез ЛПОНП (преимущественно) 5.синтез хиломикронов 6.окисление кетоновых тел (ткань)

локализация А. эндоплазматический ретикулум Б. печень В. митохондриальный матрикс Г. слизистая кишечника Д. миокард

2.3. Жирная кислота- источник

1. пальмитиновая (16:0) 2. стеариновая (18:0) 3. линолевая (18:2 (9,12)) 4. линоленовая (18:3 (9,12,15)) 5. орахидоновая (20:4 (5,8,11,14)) 6. лигноцериновая (24:0)

А. только пища Б. элонгазная система ЭПР и митохондрий В. синтетаза жирных кислот Г. система элонгации – десатурации ЭПР

Вид 3.

3.1. При бета-окислении жирных кислот с нечетным количеством углеродных атомов образуются …

А. пропионил-КоА

Б. мевалоновая кислота

В. ацетил-КоА

Г. ацетоацетил-КоА

Д. β-окси-β-метилглутарил-КоА

3.2. Переваривание и всасывание липидов нарушается при дефиците:

1. панкреатической липазы

1. гликохолата натрия

2. фосфолипаз

3. фосфодиэстераз

Вид 4.

4.1.При закупорке желчевыводящих путей нарушается переваривание жиров, потому что желчь содержит холестерин.

4.2. Для синтеза жирных кислот необходимы витамины никотинамид (РP), пантотеновая кислота (В₃), потому что указанные витамины включаются в структуру мультиферментного комплекса.

Примеры ситуационных задач

Задача 1.

У пациентов со сниженной секрецией бикарбонатов поджелудочной железой даже при нормальной продукции липазы и колипазы развивается стеаторея - выделение непереваренного жира с калом. Чем объясняется стеаторея у больных со сниженной секрецией бикарбонатов?

Задача 2.

Больные с наследственным дефектом ацил – СоА- дегидрогеназы страдают от приступов гипогликемии и гипокетонемии, которые случаются после 6-7 часового голодания. Объясните происхождение этих симптомов у этихбольных.

Задача 3.

Два взрослых здоровых человека (А и Б) за один прием пищи получили (в граммах):

Белки Жиры Углеводы

А. 50 - 300

Б. 50 50 300

Как изменился липопротеидный спектр плазмы крови испытуемых через 2,5 часа после еды?

Самостоятельная работа студентов

Кратко выпишите принцип метода и порядок проведения работ, выполняемых на занятии, оставляя места для расчета и вывода.

Работа 1. Количественное определение глюкозы в крови

глюкозооксидазным методом

Для количественного определения глюкозы в крови используются следующие методы:

1. Редуктометрические – они основаны на свойстве сахаров восстанавливать соли тяжёлых металлов в щелочной среде (титрометрический метод Хагедорна-Йенсена). Недостаток этих методов состоит в том, что они неспецифичны, так как присутствующие в крови редуцирующие вещества, не являющиеся углеводами, также обладают восстанавливающими свойствами, и полученные результаты включают всю сумму восстанавливающих соединений в крови.

2. Колориметрические - основаны на определении степени интенсивности окраски соединений, образующихся при взаимодействии глюкозы с определенным веществом (ортотолуидиновый метод). Метод специфичен и точен.

3. Энзиматические методы основаны на действии фермента глюкозооксидазы, окисляющей глюкозу до глюконовой кислоты кислородом воздуха (глюкозооксидазный метод). Этот метод специфичен и широко применяется в клинико-диагностических лабораториях.

Принцип глюкозооксидазного метода. Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, при разрушении которой под влиянием пероксидазы происходит конденсация фенола и p-аминоантипирина в окрашенное соединение. Реакция протекает по схеме:

глюкозооксидаза

Глюкоза + О₂ + Н₂О  глюконат + Н₂О₂

пероксидаза

2Н₂О₂ + фенол + 4-аминоантипирин  4(n-бензохинонмино-имино)феназон+4Н₂О

(n-аминофеназон) (цветной хиноимин)

Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в крови.

Ход определения. Определение проводят по схеме:

Отмерить, мл	Опыт	Стандарт	Контрольная проба
Сыворотка крови	0,02	-	-
Стандартный раствор глюкозы	-	0,02	-
Дистиллированная вода	-	-	0,02
Реактив для определения глюкозы	3,0	3,0	3,0

Пробы перемешивают и инкубируют 30 мин. при 37^оС. Измеряют оптическую плотность опытной (Е₁) и стандартной пробы (Е₂) против контрольной пробы при длине волны 480-520 нм в кювете 0,5 см.

Расчёт произвести по формуле: С глюкозы (моль/л)= Е₁/Е₂×10. В норме содержание глюкозы в крови составляет 3,33-5,55 мМоль или 0,6-1,0 г/л. Гипергликемия наблюдается после приема пищи, содержащей большое количество сахара (алиментарная гипергликемия), а также при клинически выраженной форме сахарного диабета. Гипогликемия наблюдается после инъекций инсулина и при некоторых формах гликогенозов.

Работа 2. Определение глюкозы в крови по цветной реакции

с орто-толуидином.

Принцип метода. Белки крови осаждаются трихлоруксусной кислотой и отделяются центрифугированием. Центрифугат обрабатывается орто-толуидиновым реактивом.

Глюкоза при нагревании с о-толуидином в кислой среде дает зеленое окрашивание, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации глюкозы в крови и определяется колориметрически на ФЭКе.

Ход определения. В центрифужную пробирку налить 0,9 мл 3% раствора трихлоруксусной кислоты и выдуть на стенку пробирки 0,1 мл крови, взятой из пальца. Содержимое пробирки взболтать и центрифугировать 5-7 мин. при 1500 об/мин.

Взять две пробирки. В первую (опыт) прилить 0,5 мл центрифугата, во вторую (контроль) - 0,5 мл 3% раствора трихлоруксусной кислоты и в обе пробирки добавить по 4,5 мл о-толуидинового реактива. Пробирки поместить на 8 мин. (точно!) в кипящую водяную баню и сразу охладить под водопроводной водой до комнатной температуры.

Опытную пробу колориметрировать против контроля или дистиллированной воды на ФЭКе в кювете толщиной слоя 10 мм при красном (600-650 нм) или желтом (595 нм) светофильтре.

Расчет произвести по калибровочному графику или с применением стандартного раствора глюкозы.

Стандартная проба. Стандартную пробу проводят как опытную, но вместо крови используют стандартный раствор глюкозы с концентрацией 5,55 мМ (1,0 г/л), а в случае высокого содержания сахара в крови 16,65 мМ (3,0 г/л) или 27,75 мМ (5,0 г/л).

Расчет произвести по формуле:

С_оп^:= (С_сг х Е_оп) / Е_ст = мМоль глюкозы или г/л глюкозы, где

С_оп - концентрация глюкозы в опытной пробе,

С_ст - концентрация глюкозы в стандартной пробе в мМ или г/л,

Е_оп - оптическая плотность опытной пробы,

Е_ст - оптическая плотность стандартного раствора глюкозы.

В норме содержание глюкозы в крови составляет 3,33-5,55 мМоль или 0,6-1,0 г/л. Гипергликемия наблюдается после приема пищи, содержащей большое количество сахара (алиментарная гипергликемия), а также при клинически выраженной форме сахарного диабета. Гипогликемия наблюдается после инъекций инсулина и при некоторых формах гликогенозов.

Работа 3. Определение активности альфа-амилазы

в сыворотке крови и моче.

Принцип метода. Альфа-амилаза катализирует гидролиз нерастворимого цветного крахмального субстрата с образованием синего растворимого в воде красителя. Количество освобожденного красителя пропорционально активности фермента.

Ход определения. Для определения активности альфа-амилазы в сыворотке крови или моче готовят параллельно опытную и контрольную пробы и анализируют в следующей последовательности:

Компоненты	Пробы крови, мл		Пробы мочи, мл
	опытная	контрольная	опытная	контрольная
Суспензия субстрата	1	1	1	1
	Инкубация в течение 5 мин. при + 37оС
Сыворотка крови	0,10	-	-	-
Моча	-	-	0,05	-
Дистиллированная вода	-	0,10	-	0,05
	Инкубация в течение 15 мин. при + 37оС
Осаждающий раствор	2	2	2	2
Активность амилазы		Норма: 130-150 Е/л		Норма 1,00-2,00 Е/мл

Пробы перемешивают, оставляют стоять на 15 мин, центрифугируют при 3000 об/мин, в течение 5 мин. Затем измеряют оптическую плотность опытной против контрольной на ФЭКе при длине волны 590 нм в кюветах с толщиной слоя 5,0 мм.

Активность фермента находят по калибровочному графику.

У человека альфа-амилаза секретируется поджелудочной и слюнными железами, небольшая ее активность обнаруживается в ткани печени и скелетной мускулатуры. Молекулярная масса фермента относительно низка (48000), поэтому он фильтруется в клубочках почек и содержится в моче.

У здоровых людей в сыворотке активность фермента от 140 до 350 Е/л, в моче - от 1000 до 2000 Е/л. Активность амилазы увеличивается, главным образом, при заболеваниях поджелудочной железы (при остром панкреатите). К повышению активности альфа-амилазы сыворотки крови приводят заболевания слюнных желез, хронические заболевания почек.

Работа 4. Влияние адреналина на содержание глюкозы в крови.

Ход определения. У кролика из краевой вены уха или у крысы из хвостовой вены набирают 0,1 мл крови и определят о-толуидиновым методом содержание глюкозы в крови.

Затем у животного выстригают на боку шерсть, протирают кожу спиртом и вводят подкожно 0,1% раствор адреналина из расчета 0,1 мл на 1 кг веса и через 30 минут повторно определяют содержание глюкозы в крови.

Работа 5. Влияние инсулина на содержание глюкозы в крови.

Ход определения. У другого кролика из краевой вены уха или у крысы из хвостовой вены взять 0,1 мл крови и определить содержание глюкозы в крови.

У животного выстричь шерсть на боку, обработать спиртом и ввести подкожно инсулин из расчета 1,5 международных единиц на кг веса. Через час повторно определить содержание глюкозы в крови. Ввести животному подкожно 5% раствор глюкозы для предотвращения инсулинового шока: кролику - 10 мл, крысе - 1 мл.

Результаты 3-й и 4-й работ внести в таблицу и сделать выводы.

Гормон	Глюкоза крови до опыта	Количество введенного гормона	Глюкоза крови в конце опыта
Адреналин
Инсулин
Выводы:

Работа 5. Количественное определение суммарных липидов в сыво ротке крови

Принцип метода. Продукты распада ненасыщенных липидов образуют с реактивом, состоящим из серной, ортофосфорной кислот и ванилина, соединение, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию общих липидов в сыворотке крови. Определение содержания липидов в сыворотке крови проводится для изучения состояния липидного обмена в организме. Нормальное содержание общих липидов в сыворотке крови (нормолипемия) колеблется от 4,0-8,0 г/л. При физиологических условиях увеличение содержания липидов в крови (гиперлипемия) наблюдается через 1-4 часа после принятия богатой жирами пищи. Натощак уровень общих липидов снижается (гиполипемия). Гиперлипемия проявляется при многих патологических состояниях: у больных сахарным диабетом отмечается резко выраженная гиперлипемия (до 20,0 г/л), при заболеваниях почек (липоидном нефрозе), при поражении печени (циррозе печени и остром гепатите), при ожирении, при врожденной гиперлипемии, атеросклерозе и у лиц, злоупотреблении алкоголем.

Ход работы. В две пробирки (опытная и контрольная) наливают соответственно 0,1 мл сыворотки крови и 0,2 мл воды. В опытную пробирку вносят 2,9 мл, в контрольную 5,8 мл концентрированной серной кислоты (ОСТОРОЖНО!). Содержимое обеих пробирок тщательно перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 10 минут (при нагревании обращаться с пробирками осторожно). После нагревания обе пробирки вынимают и быстро охлаждают под струей холодной воды до комнатной температуры. Затем отбирают из опытной – 0,2 мл, а из контрольной – 0,4 мл охлажденного раствора и переносят его в чистые пробирки, в которых предварительно налито в опытную пробирку 3 мл, а в контрольную пробирку – 6 мл фосфорнованилинового реактива (наслаивать осторожно). После тщательного перемешивания пробы оставляют на 45 мин. в темноте при комнатной температуре. После развития окраски оптическую плотность опытного раствора (А) против контроля измеряют на ФЭКе при длине волны в 530 нм ( светофильтр зеленый) с кюветой 5 мм.

Расчёт содержания общих липидов в сыворотке крови проводят по калибровочному графику.

Работа 6. Количественное определение содержания лецитина

в сыворотке крови.

Содержание лецитина в сыворотке крови здорового человека зависит от возраста, составляя в среднем 1,5-2,7 г/л. Изменение содержания лецитина в крови наблюдается при ряде заболеваний (атеросклероз, сахарный диабет, микседема и др.).

Принцип метода. Лецитин извлекается из сыворотки крови горячим спиртом; после минерализации в экстракте колориметрическим методом определяется неорганический фосфор, содержащийся в составе лецитинов. Количество лецитина определяется по стандартной кривой.

Ход работы. В пробирку налить 1 мл сыворотки крови и 2,5 мл спирта. Содержимое пробирки перемешать стеклянной палочкой. Пробирку неплотно закрыть резиновой пробкой и поместить на 10 минут в водяную баню при температуре 80°С. Параллельно поставить контрольную пробу с 2,5 мл смеси Блюра. Содержимое обеих пробирок охладить, профильтровать через обезжиренный фильтр в сухие пробирки. Для полноты извлечения содержимое пробирки сполоснуть 1-1,5 мл смеси Блюра и вылить на фильтр.

Полученные фильтраты (опыт и контроль) осторожно выпарить, добавить в каждую пробирку по 5 капель концентрированной серной кислоты и сжечь на слабом пламени спиртовки до появления бурой окраски и тяжелых белых паров. Пробирки охладить на воздухе, добавить по 5-6 капель пергидроля и содержимое пробирок вновь сжечь до обесцвечивания жидкости. После охлаждения в каждую пробирку добавить по 2 мл бидистиллированной воды, нейтрализовать содержимое пробирок 6-7 каплями 33% раствора едкого натра, после чего добавить по 2,5 мл ацетатного буфера (рН - 4,0), 0,5 мл 2% раствора молибденово-кислого аммония и 1 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты. Содержимое пробирок тщательно перемешать и через 10 минут колориметрировать па ФЭКе с красным светофильтром (опыт против контроля). Содержание лецитина в сыворотке крови в г/л рассчитать по калибровочному графику.

Работа 7. Количественное определение холестерина в сыворотке крови по методу Илька

Принцип метода. Холестерин, содержащийся в сыворотке крови, обрабатывается реактивом Либермана-Бурхарда (смесь уксусного ангидрида, ледяной уксусной кислоты и концентрированной Н₂SО₄). При этом холестерин теряет воду и превращается в непредельный углеводород, который с уксусным ангидридом образует зеленое окрашивание. Интенсивность полученной окраски определяется на ФЭКе.

Ход работы. В сухую (!) пробирку поместить 2,1 мл реактива Либермана-Бурхарда и осторожно по стенке пробирки добавить 0,1 мл негемолизированной сыворотки крови. Пробирку тотчас же встряхнуть энергичными движениями 8-10 раз и поместить в термостат при температуре 30°С на 20-25 минут в темноте. Полученную зеленую окраску колориметрировать на ФЭКе при красном светофильтре против дистиллированной воды в кюветах с толщиной слоя 5 мм.

По найденной экстинции определить количество холестерина в г/л по стандартной кривой.

Содержание холестерина в сыворотке крови у человека зависит от возраста. В сыворотке крови здорового взрослого человека содержится 1,5-2,4 г/л холестерина, у детей - 1,0-1,3 г/л, юношей - 1,3-1,8 г/л, у людей пожилого возраста выше 2,4 г/л. Обмен холестерина часто нарушается при различных заболеваниях (атеросклероз, гипертоническая болезнь и др.).

Эталоны ответов на тестовые задания по теме «Обмен углеводов»

Вид1:1.1.- А, 1.2 – Б; 1.3 - Г.

Вид 2:2.1. - Д ; 2.2.- 1. Б, 2. В, 3. А, 4.Д, 5. Г; 2.3.- 1.Б, 2.В, 3.А, 4.Г, 5.Б, 6.Г

Вид 3: 3.1.- 1,2,3; 3.2.- 1,2,3; 3.3.- 2, 4

Вид ;: 4.1.- С (верно, не верно, не верно);4.2.- А (верно, верно, связь есть)

Вид 5.1 – 1,4,5,6,3,8,7,2.

Эталоны ответов к тестам по теме «Обмен липидов»

Вид 1: 1.1– В; 1.2 – Б; 1.3 - Б,Г.

Вид 2.1. А,В; 2.1 – 1. Б; 2. А. 3. В, 4. Б; 5. Г, 6. Д; 2.2.- 1. В: 2. Б; 3.А,4.А,5.Г; 6. Б;

Вид 3: 3.1.- 2,4; 3.2.- 1,2,3.

Вид4: 4.1.- Д (неверно, верно, неверно),4.2. –А (верно, верно, верно)