Работа № 15 определение витамина в2 (рибофламина) в драже или таблетках флуориметрическим методом

Витамин В₂, рибофлавин, содержится в мясе, рыбе, печени, молоке, яичном желтке и в растительных продуктах.

В организме человека витамин В₂ участвует в углеводном и жировом обмене.

В аналитической химии используют рибофлавин в качестве абсорбционного флуоресцентного индикатора, наряду с эозином и флуоресцеином.

При восстановлении раствора рибофлавина гидросульфитом натрия происходит химическое гашение флуоресценции из-за превращения рибофлавина в бесцветное соединение.

Гашение флуоресценции при восстановлении рибофлавина используется при анализе его растворов, содержащих флуоресцеирующие примеси. Вначале измеряют суммарную интенсивность флуоресценции раствора, и после гашения свечения рибофлавина восстановлением NaHSO₃ измеряют остаточное свечение примесей; по разности общего и остаточного свечения определяют свечение рибофлавина.

Количественное определение витамина В₂ заключается в построении с помощью стандартных растворов градуировочной кривой в координатах: содержание рибофлавина в мкг (ось абсцисс) - интенсивность флуоресценции (ось ординат).

После определения по графику содержания рибофлавина в исследуемом растворе его проверяют на присутствие примесей путем гашения свечения рибофлавина гидросульфитом натрия и измерение остаточной флуоресценции.

Y

С

Используемый в Концентрационное

анализе диапазон гашение

концентраций флуоресценции

от 10^-4 до 10^-7

(при больших

концентрациях)

Рис. 14

Кривая зависимости интенсивности

флуоресценции от концентрации вещества.

Выполнение работы

Построение градуировочной кривой

Приготовление стандартных растворов

1. Отбирают мерной пипеткой 20 см³ раствора № 1, содержащего 20 мкг рибофлавина в 1 см³, помещают в мерную колбу на 100 см³, доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Исходный раствор № 2 содержит 4 мкг/см³ рибофлавина.

2. Для приготовления стандартных растворов в 4 мерные колбы на 100 см³ бюреткой отмеривают порции раствора №2 и доводят до метки дистиллированной водой:

№ колбы	Раствор в см3	Содержание рибофлавина в мкг/см3
1	5,0	0,2
2	10,0	0,4
3	15,0	0,6
4	20,0	0,8
5 контрольный раствор	х	х выдает преподаватель

3. Растворы перемешивают, переливают в измерительные пробирки и ставят в гнезде ящика для защиты от света.

4. Приготовляют раствор рибофлавина из таблетки, полученной от лаборанта. Для этого помещают таблетку в мерную колбу на 100 см³,добавляют горячей (70-80° C) дистиллированной воды до 2/3 объема и растворяют таблетку. Охлаждают колбу до комнатной температуры и заполняют дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Отбирают пипеткой 3 см³ этого раствора в мерную колбу на 100 см³ № 6, добавляют дистиллированной воды до метки и перемешивают. Из колбы № 6 раствор переливают в пробирку № 6 и ставят в гнездо ящика.