Бактериологический метод

1 день.Посевна ВСА и в среды накопления (маг­ниевую, селенитовую). Пересев из сред накопления через 6— 10 ч на ВСА. Культивирование сутки при 37⁰ С.

2 день. Пересев колоний черного цвета с ВСА на среду Олькеницкого (или Ресселя) для накопления чистой культуры.

3-й день. Учет характера роста на средах Ресселя или Олькеницкого, проверка чистоты выделенной культуры, пересев выделенной чистой культуры в сре­ды «пестрого» ряда, постановка ОРА с поливалентными и групповыми (А, В, С, Д, Е) адсорбированными сальмонеллезными сыворотками. При положительном результате с одной из групп сывороток, проводят РА с адсорбированными О-сыворотками, характерными для данной группы, а затем с монорецепторными Н-сыворотками (неспецифической и специфической фазами) для определения серогруппы и серовара сальмонеллы в соответствии со схемой Ка­уфмана-Уайта.

4-й день. Учет изменений в средах «пестрого» ряда. Формулировка ответа.

Серологический метод

Постановка РНГА с парными сыворотками крови больных, взятыми с интервалом в 7-10 дней и сальмонеллезными поливалентными и группо­выми (групп А, В, С, Д, Е) диагностикумами с целью выявления антител.

Биопроба. Материалом от больного производят пероральное заражение белых мы­шей, которые через 1-2 дня погибают от септицемии. При посеве крови из сердца и материала из внутренних органов выделяется культура сальмонелл.

Серологическое исследование - исследование с помощью РНГА парных сывороток крови больных, взятых с интервалом в 7-10 дней с сальмонеллезными поливалентными и группо­выми (группы А, В, С, Д, Е) диагностикумами. Диагностическое зна­чение имеет повышение титра антител в четыре и более раз.

Самостоятельная работа студентов

Изучить основные этапы бактериологического исследования метода диагностики сальмонеллёзов.

1. Учет посевов сальмонелл на среде Левина и Олькеницкого (демонстра­ция).

2. Контроль чистоты наделенной культуры сальмонелл (со среды Олькеницкого приготовлен мазок, окрашен его по Граму). Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные микропрепараты возбудителей сальмонеллёзов S.enterica spp. enterica ser. enteritidis, typhimurium, choleraesuis. Возбудители сальмонеллёзов — идентичные по морфоло­гии грамотрицательные палочки с закругленными концами.

3. Идентификация выделенной культуры возбудителя:

- по антигенным свойствам – учет ориентировочной реакции агглютинации на стекле с диагностическими монорецепторными сальмонеллезными агглютинирующими О- и Н сыворотками в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта;

- по биохимическим свойствам - определение биохимической активности изучаемой культуры по "пестрому" ряду Гисса или Пешкова (демонстрация). Обратить внимание на расщеп­ление глюкозы, отсутствие расщепления лактозы и сахарозы.

- по фаголизабельности (учет пробы с фагом - демонстрация)

4. Определение чувствительности выделенной культуры к ан­тибиотикам методом бумажных дисков (демонстрация).

Педиатрические аспекты темы

Постановка реакции типа Видаля при пищевых токсикоинфекциях имеет важное диагностическое значение у детей раннего возраста, т.к. процент положительных гемокультур и выделения возбудителя из испражнений невысок. Диагностическим титром яв­ляется положительная реакция с разведением сыворотки 1:100.

Тема 6. Микробиология бактериальных кишечных инфекций: патогенные кишечные палочки, иерсинии, кампилобактерии, хеликобактерии Микробиологическая диагностика эшерихиозов

Среди видов Escherichia coli семейства Enterobacteriaceae, наряду с непатогенными кишечны­ми палочками - представителями нормальной микрофлоры кишечника, имеются их патогенные варианты, в том числе:

• энтерогеморрагические кишечные палочки (ЭГКП) - возбудители энтерогеморрагического эшерихиоза с гемолитико-уремическим синдромом);

• энтероинвазивные (ЭИКП), вызывающие заболева­ния, сходные с дизентерией;

• энтеротоксигенные (ЭТКП), вызывающие холероподобный эшерихиоз или диарею путешественников;

• ЭПКП (энтеропатогенные) - возбудители детских колиэнтеритов и других кишечных инфекций, а также уропатогенные эшерихии, поражающие мочевыводящие пути.

Наиболее часто встречающиеся серовары патогенных эшерихий, входящих в состав перечисленных групп, представлены в таблице 11.

Таблица 11. Серовары наиболее часто встречающихся патогенных эшерихий.

Энтеротоксигенные	Энтеропатогенные	Энтероинвазивные	Энтерогеморрагические
О6, О8, О15, О20, О25, О27, О63, О78, О80, О85, О115, О128, О139, О148, О153, О159, О168	О18, О44, О55, О111, О112, О114, О119, О125-128, О142	О28, О29, О124, О136, О143, О144, О152, О164, О167	О157, О126, О111

Часть эшерихий относится к условно-патогенным микроорганизмам, способных вызывать оппортуни­стические инфекции (пневмонии, нагноения ран и полостей, ме­нингиты, сепсис и т.д.). При накоплении в пищевых продуктах эшерихии могут стать причиной пищевого отравления. Методы микробиологической диагностики эшерихиозов отражены в схеме 11.

Бактериоскопический метод в диа­гностике эшерихиозов в практике бактериологических лабораторий не применяется из-за сходства морфологических и тинкториальных свойств патогенных и условно-патогенных энтеробактерий.

Бактериологический метод является основным методом диагностики эшерихиозов. Для выделения эшерихий используют среды Эндо, Левина и среду Мак-Конки с сорбитом для выделения Escherichia coli 0157 : HI из группы ЭГКП.

С

Материал для исследования:испражнения, слизь с ректального тампона

Бактериологический метод

1 день.Посев материала на средуЭндо, Левина и Мак-Конки с сорбитом Культивирование в течение суток при 37⁰ С.

2 день. Учет характера роста на средахЭндо, Левина (гладкие, выпуклые, с ровными краями колонии, окрашенные в результате разложения лактозы, с характерным металлическим блеском) и Мак-Конки (бесцветные колонии). Постановка ОРА со смесью специфических эшерихиозных ОК- сывороток и содержимого 10 лактозоположительных колоний. Пересев оставшейся части колонии уколом в столбик и штрихом на поверхность скошенной части среды на полуско­шенную среду Ресселя (или Олькенцикого) с целью накопления культуры.

3-й день. Учет характера роста на средах Ресселя или Олькеницкого (пожелтение и разрывы столбика среды в результате ферментации глюкозы в анаэробных условиях, пожелтение скошенной части среды в результате фер­ментации лактозы и сахарозы). Проверка чистоты выделенной культуры, постановка ОРА с поливалентной ОК-сывороткой, а затем — развернутой РА с адсорбированными групповыми сы­воротками для определения ОК-серогруппы. Определение антигенов выделенной культуры по результатам постановки развернутой РА с ОК сывороткой (или диагностическим иммуноглобулином) и жи­вой культурой (типирование по К-антигену), а также развернутой РА с ОК сывороткой и гретой (кипяченой в течение 1-2 ч) культурой с целью определения специфического О-антигена. Постановка развернутой РА, пересев в среды «пестрого» ряда для изучения биохимических свойств, посев для определения фаголизабильности, фаговара, колициногеновара.

4-й день. Учет результатов развернутой РА, изменений в средах «пестрого» ряда, фаголизабильности, фаговара, колициногеновара. Формулировка ответа при наличии положительной РА с кипяченой культурой (наличие специфического О-антигена)

хема 11. Микробиологическая диагностика эшерихиозов

Экспресс-методы (индикация патогенной E.coli или ее продуктов в исследуемом материале)

ДНК-зонды или ПЦР для выявления специфического фрагмента ДНК патогенной E.coli

РИФ