Вирусологическая диагностика натуральной оспы

Вирус натуральной оспы (Variola virus) относится к семейству Poxviridae, роду Orthopoxvirus, который включает вирусы натуральной оспы, осповакцины, а также вирусы оспы животных (коров, буй­волов, верблюдов, овец, обезьян, кроликов и мышей). Этот антропонозный вирус вызывает у человека острую инфекцию с явлениями тяжелой общей интоксикации, лихорадкой и появлением характерной папулезно-пустулезной сыпи на коже и слизистых обо­лочках. Натуральная оспа является особо-опасной, карантинной инфекцией. В 20 веке оспа была ликвидирована, однако существует угроза применения этого вируса как средства биологического терроризма. Человек может также заразиться вирусом оспы обезьян, при этом клинические проявления сходны с таковыми при натуральной оспе, однако человек, зараженный вирусом оспы обезьян, неопасен для окружающих

Материалом для исследования при натуральной оспе - соскоб с элементов сыпи - макул и папул, содержимое везикул и пустул, корочки оспенных пустул, слюна, носоглоточные смывы, трупный материал, кровь. Исследование на вирус натуральной оспы проводят в специальных лабораториях. Применяются следующие методы лабораторной диагностики.

Экспресс-диагностика - прямое исследование материала от больного с помощью электронной микроскопии, РИФ, РОПГА, РПГ, ИФА.

Сущность РОПГА состоит во взаимодействии антигена, находящегося в исследуемом материале, с бараньими эритроцитами, на поверхности которых фиксированы противооспенные антитела (антительный диагностикум), что приводит к агглютинации эритроцитов.

Вирусологический метод заключается в заражении на ХАО 10-12-дневных РКЭ с последующей их инкубацией в течение 3-5 дней при температуре 35⁰ С. Вирус натуральной оспы образует на ХАО мелкие белые бляшки. Для выделения вируса используют также первично-трипсинизированные и перевиваемые культуры ткани.

Индикацию и идентификацию оспенных вирусов в РКЭ обычно проводят с помощью РН, а в зараженных клеточных куль­турах - с помощью РИФ, РОПГА, РПГадс. Дифференциация оспенных вирусов от сходных с ними герпесвирусов основывается на обнаружении в клетках, пораженных герпесвирусами, внутриядерных включений, характерного цитопатического действия при отсутствии феномена гемадсорбции.

Серологический метод - постановка РТГА, РСК, РН на куриных эмбрионах и в культурах кле­ток с парными сыворотками крови больных с целью констатации нарастания титра антител. Учет РН в культуре ткани проводится по ЦПД и РГадс, а на куриных эмбрионах - по образованию бляшек на ХАО и накоплению гемагглютининов, выявляемых с помощью РГА.

Вирусологическая диагностика герпеса

Герпес относится к распространенным рецидивирующим инфекциям с характерными пузырь­ковыми высыпаниями на коже и слизистых оболочках. Представители семейства Herpesviridae (табл. 22) способны также вызывать врожденные уродства, поражения различных органов и систем (не­рвной системы, органов дыхания, печени, слизистой оболочки полости рта и половых органов, глазного яблока), онкологические заболевания. Рецидивы герпеса возникают на фоне снижения антиинфекционной резистентности при простуде, гриппе, ОРВИ, других острых инфекционных заболеваниях и т.д..

Материалом для исследования являются содержимое элементов сыпи, короч­ки, слюна, спинномозговая жидкость, трупный материал (кусочки головного и спинного мозга, печени, лим­фатические узлы), кровь и др. Лабораторная диагностика герпетической инфекции включает экспресс-методы, вирусологическое и серологическое исследова­ние (схема 20).

Вирусологический метод – заражение РКЭ на ХАО, культур ткани (почек кролика, фибробластов эмбриона человека или кур, HeLa и др.). При наличии цитомегаловируса в клеточных

культурах через 4-7 дней появляются многоядерные гигантские клетки с признаками дегенерации и внутриядерными включениями, на ХАО РКЭ герпесвирусы вызывают появление характерных бляшек. Вирус ветряной оспы или опоясывающего лишая вызывает на 6-13 сутки очаговое ЦПД с появлением в клетках цитоплазматических и внутриядерных включений.

Таблица 22. Герпесвирусы и вызываемые ими заболевания

Представители	Заболевания
α-герпесвирусы Вирус простого герпеса 1 типа (ВПГ-1)	Лабиальный герпес, герпес кожи и слизистых оболочек, офтальмогерпес, генитальный герпес, герпетические менингиты и энцефалиты
Вирус простого герпеса 2 типа (ВПГ-2)	Генитальный и неонатальный (микроцефалия) герпес
Вирус опоясывающего лишая	Ветряная оспа у детей, опоясывающий лишай у взрослых
β-герпесвирусы Цитомегаловирус (ЦМВ)	Врожденные поражения ц.н.с., ретинопатии, пневмонии, гепатиты
γ-герпесвирусы Вирус Эпштейна-Барр (ЭБВ)	Инфекционный мононуклеоз,назофарингеальная карцинома, лимфома Беркитта
Нетипируемые герпесвирусы Вирус герпеса 6 и 7 типов (ВГ-6, ВГ-7)	В-клеточная лимфома, лимфома Ходжкина,синдром хронической усталости
Вирус герпеса 8 типа (ВГ-8)	Саркома Капоши

Схема 20. Вирусологическая диагностика герпеса

Материал для исследования:содержимое элементов сыпи, короч­ки, слюна, спинномозговая жидкость, трупный материал (кусочки головного и спинного мозга, печени, лим­фатические узлы), кровь и др.

Экспресс-диагностика - электронная микроскопия, РИФ, ИФА - обнаружение вируса герпеса или его антигенов в исследуемом материале

Вирусологический метод – заражение РКЭ на ХАО, культур ткани. Индикация вируса по ЦПД, идентификация с помощью РН на мышах, куриных эмбрионах, в куль­туре клеток

Биопроба: заражение лабораторных животных. Индикация вируса в мазках-отпечатках с помощью РИФ, выделение - на культуре ткани или на ХАО куриного эмбриона

Серологический метод - вы­явление нарастания титров антител в парных сыворотках больных с помощью РН, РСК, ИФА, РНГА, РТГадс

Генодиагностика: ПЦР

Идентификацию ВПГ проводят с помощью РН на мышах, куриных эмбрионах, в куль­туре клеток.

Серологический метод - вы­явление нарастания титров антител в парных сыворотках больных с помощью РН, РСК, ИФА (реже РНГА, РТГадс) с дифференциацией антител по классам иммуноглобулинов. Первичная герпетическая ин­фекция характеризуется появлением антител класса IgM.

Биопроба. С целью выделения вируса герпеса производится заражение лабораторных животных (новорожденных грызунов, белых мышей, кроликов, морских свинок, хомяков, хлопковых крыс - обычно в мозг), которые через несколько дней погибают. Вирус от павших животных можно обнаружить в мазках-отпечатках с помощью РИФ, а также выделить на культуре ткани или на ХАО куриного эмбриона.

Генодиагностика. Разработана и широко применяется ПЦР, позволяющая в течение от 4 до 48 часов определить несколько вирусов герпеса.