Вирусологическая диагностика эпидемического паротита.

Возбудитель эпидемического паротита относится к роду Paramyxoviruses семейства Paramyxoviridae и вызывает преимущественно у детей в возрасте 5-15 лет поражение околоушных слюнных желез, иногда орхит, тиреоидит, панкреатит. Диагностика эпидемического паротита основывается на данных характерной клинической картины, поэтому лабораторная диагностика проводится при наличии осложнений и в сложных диагностических ситуациях для дифференциации эпидемического паротита с другими заболеваниями слюнных желез и других железистых органов. Материалом для исследования являются слюна, спинно-мозговая жидкость или моча. Применяются вирусологический и серологический методы исследования.

Вирусологический метод - заражение куриных эмбрионов или культур клеток (почек эмбриона человека, He-La и др.) с последующей идентификацией вируса на основании характерного ЦПД (образование гигантских многоядерных клеток и синцития с включениями в цитоплазме), а также с помощью РТГА, РИФ, РСК.

Серологический метод применяется с целью определения нарастания титра антител в парных сыворотках больных с помощью ИФА (с дифференциацией антител по классам иммуноглобулинов M и G), РСК, РТГА; реже применяется РН.

Генодиагностика. Разработана ПЦР для выявления специфических фрагментов РНК вируса эпидемического паротита.

Самостоятельная работа студентов

1. Индикация и идентификация вируса кори по характеру ЦПД при куль­тивировании вируса на культуре опухолевых клеток.

2. Серологическая диагностика кори. Выявление антител в сыворотке крови больного с помощью РНГА.

3. Изучить биопрепараты для диагностики, профилактики и лечения кори, краснухи, эпидемического паротита:

• вакцина коревая культуральная живая сухая отечественная;

• живая коревая культуральная сухая вакцина фирмы Пастер Мерье Коннот (Франция);

• MMR – живая тривакцина против кори, эпидемического паротита, краснухи фирмы Мерк Шарп Доум (США);

• Рудивакс – моновакцина против краснухи фирмы Пастер Мерье Коннот (Франция);

• SII - – моновакцина против краснухи института сывороток Индии

• Отечественная паротитная культуральная живая сухая вакцина

Педиатрические аспекты темы.

1. Вирус гриппа вызывает у детей, особенно первого года жизни, тяжелую инфек­цию со склонностью к осложнению в виде пневмонии.

2. Вследствие слабого иммунного ответа у детей с выраженной клинической картиной гриппа диагностическое значение имеет на­растание титра антител в 2 раза.

Тема 15. Пикорнавирусы. Вирусы гепатитов. Ротавирусы Вирусологическая диагностика пикорнавирусных инфекций Энтеровирусные инфекции

К энтеровирусам человека (род Enterovirus, семейство Picornaviridae) относятся вирусы полиомиелита (3 серотипа), Коксаки А (23 серотипа), Коксаки В (6 серотипов), ECHO (31 серотип) и энтеровирусы человека 68-—71-го серотипов. Род Hepatovirus семейства Picornaviridae представлен вирусом гепатита А.

Энтеровирусы вызывают у человека разнообразные поражения, в том числе центральной нервной системы (энцефалит, менингоэнцефалит, полиомиелит, менингит), желудочно-кишечного тракта (диарея, гепатит, панкреатит), дыхательных путей (ри­нит, фарингит, пневмония новорожденных и др.), сердечно-со­судистой системы (миокардит, перикардит). В ряде случаев раз­виваются герпетическая ангина, экзантема, везикулярный стоматит.

Материалом для исследования при энтеровирусных инфекциях являются фекалии, носоглоточные смывы, кровь, спинно-мозговая жидкость, моча, органы трупа. Применяются следующие методы лабораторной диагностики (схема 21).

С

Материал для исследования: фекалии, носоглоточные смывы, кровь, спинно-мозговая жидкость, моча, органы трупа.

хема 21. Вирусологическая диагностика энтеровирусных инфекций

Вирусологический метод: заражение культур клеток, мышей-сосунков. Индикация энтеровирусов по ЦПД и бляшкообразованию под слоем агара или бентонита в культуре клеток, характеру развитию параличей у мышей-сосунков. Идентификация энтеровирусов с помощью РН (в культуре клеток или на мышах-сосунках), РТГА (при наличии у вируса гемагглютинина), РСК, РПГ, РИФ с типоспецифическими сыворот­ками против соответствующих энтеровирусов.

Серологический метод - РН на культуре ткани или на мышах-сосунках, РСК, РТГА с парными сыворотками больных.

Вирусологический метод. Для выделения энтеровирусов, обладающих ЦПД (вирусы полиомиелита, ЕСНО, Коксаки В, некоторые вирусы Коксаки А), применяются культуры клеток почек обезьян, почек эмбриона человека, амниона человека и др. Вирусы Коксаки А удается выделить только при подкожном, внутрибрюшинном или внутримозговом заражении однодневных мышей-сосунков. Вирусы Коксаки А после инкубационного периода в 2-3 дня вызывают вялые параличи конечностей в результате поражения скелетной мускулатуры с развитием общей миопатии. Вирусы Коксаки В вызывают через 6-8 дней после заражения спастические параличи за счет поражения центральной нервной системы. Характер параличей должен быть подтвержден гистологическими методами.

Индикацию энтеровирусов проводят по ЦПД и бляшкообразованию под слоем агара или бентонита в культуре клеток, характеру развитию параличей у мышей-сосунков. Идентификация энтеровирусов проводится с помощью РН (в культуре клеток или на мышах-сосунках), РТГА (при наличии у вируса гемагглютинина), РСК, РПГ, РИФ с типоспецифическими сыворот­ками против соответствующих энтеровирусов.

Серологический метод - постановка РН (на культуре ткани – обычно вариант «цветной» пробы или на мышах-сосунках), РСК (как правило, для диагностики полиомиелита; диагностический титр 1:32), реже РТГА с целью констатации нарастания титра антител к энтеровирусам в парных сыворотках больных.

Лабораторная диагностика ящура (вирус относится к роду Aphtovirus, семейству Picornaviridae), проявляющегося везикулезной сыпью на коже и слизистых оболочках в результате контакта с больными ящуром сельскохозяйственными животными, осуществляется с помощью экспресс-метода (РИФ для обнаружения специфического антигена вируса в содержимом везикул) и культурального метода. Вирус ящура выделяют в культуре клеток крупно­го рогатого скота, коз, хомяков, идентифицируя с помощью РН, РСК, РИФ. Для выделения вируса проводят также биопробу (заражение морских свинок внутрикожно или мышей-сосунков в мозг). Серологический метод диагностики ящура заключается в ис­следовании парных сывороток с целью определения наличия и нарастания титра специфических антител с помощью РН и РСК.