Самостоятельная работа студентов

Изучить основные этапы бактериологического метода диагностики брюшного тифа.

1. Бактериологический метод – выделение гемокультуры:

Учесть характер роста бактерий на среде Раппопорт (желчный МПБ с глюкозой, индикатором Андреде и поплавком для улавливания газа), висмут-сульфит агаре, среде Левина (МПА с лактозой, с эозином и метиленовым синим), среде Олькеницкого (МПА с глюкозой, лактозой, сахарозой, моче­виной и индикатором феноловым красным). Разложение глюко­зы сопровождается пожелтением столбика, скошенная часть остается без изменений в случае отсутствия разложения лактозы. При разложении лактозы наблюдается пожелтение скошенной части среды. При образова­нии сероводорода на границе скошенной части и столбика наблюдается почернение. Среда позволяет также учесть газооб­разование. При разложении мочевины среда окрашивается в красный цвет. Используется также накопительная селенито­вая среда;

контроль чистоты выделенной культуры. Со среды Олькеницкого приготовлен мазок, окрашен его по Граму. Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные препараты сальмонелл – возбудителей тифо-паратифозных заболеваний (S.typhi, S.paratyphi, S.schottmuelleri, окраска по Граму), приготовленные из чистых культур. Сальмонеллы – грамотрицательные палочки с закругленными краями, идентичны по морфологическим свойствам;

идентификация выделенной культуры возбудителя:

- по антигенным свойствам – учесть ориентировочную ре­акцию агглютинации (ОРА) на предметном стекле со смесью монорецепторных агглютинирующих О-сыво­роток, а также с отдельными О- (2, 4, 7, 9), Н- 1 фазы (a, b, c, d) и Н-2 фазы (1,2) сыворотками. Развернутая реакция агглютинации (демонстрация) ставится в пробирках с двукратными последовательными разведениями специфической агглютинирующей сыворотки от I:200 и выше до титра (титр указывается на ампуле с сывороткой) и выделенной культурой; в качестве контроля используется физиологический раст­вор. Во все пробирки вносят по 2 капли исследуемой культуры, выдерживают в термостате при 37⁰ С в течение 2 часов, затем 18-20 часов при комнатной температуре, после чего производят учет.

- по биохимическим свойствам - определить биохимическую активность исследуемой культуры по пестрому ряду Гисса или Пешкова (демонстрация). Обратить внимание на расщепление глюкозы и отсутствие расщепления лактозы и саха­розы.

- по фаголизабельности - учесть пробу на фаголизабельность (демонстрация)

Определение фаговара выделенной культуры (демонстра­ция). Сделан посев выделенной культуры "газоном" на чаш­ку с МПА. На поверхность посева нанесено по 1 капле специ­фических типовых фагов. Фаговар определяют по наличию "стерильных" пятен на месте нанесения типового фага cooответствующего фаговару культуры через сутки инкубации в термостате при 37⁰ С.

Определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам методом бумажных дисков (демонстрация).

2. Серологический метод диагностики тифо-паратифозных заболеваний.

Учесть демонстрационную реакцию агглютинации Видаля, поставленную с четырьмя диагностикумами (брюшнотифозными О и Н, паратифозными А и В ОН). Сыворотка крови больного титруется от 1:100 и выше. Диагно­стический титр - 1:200.

Учесть реакцию непрямой Vi-гемагглютинации (демон­страция). Реакция поставлена с сывороткой крови больного и зритроцитарным Vi -диагностикумом. Диагностический титр - 1:50 – I:100

3. Изучать биопрепараты, используемые для диагностики, ле­чения и профилактики тифо-паратифозных заболеваний:

• диагностикумы (взвеси убитых бактерий) для постановки реакции агглютинации (Видаля) брюшнотифозные О и Н, паратифозные А и В ОН с целью определения антител в крови больного;

- эритроцитарный Vi-диагностикум - взвесь эритроцитов, конъюгированных с Vi-антигеном S.typhi. Используется для постановки реакции непрямой Vi- гемагглютинации с целью и выявления бактерионосительства;

- сальмонеллезные групповые адсорбированные и монорецепторные О- и Н- агглютинирующие сыворотки для определения антигенной структуры сальмонелл с помощью РА

- типовые сальмонеллезные бактериофаги для фаготипирования сальмонелл

- брюшнотифозные вакцины. На протяжении ряда лет для профилактики брюшного тифа используются убитые цельноклеточные брюшнотифозные вакцины, которые заменяют в нестоящее время живой оральной или полисахаридной вакцинами. Одна из них - ВИАНВАК, обогащенная хроматографически чистым полисахаридным Vi-ан­тигеном, для профилактики брюшного тифа. Разработана также живая пероральная брюшнтифозная вакцина.  Кроме того, в России зарегистрирована вакцина ТИФИМ Ви производства французской фирмы Авентис Пастер, приготовленная на основе полисахарида, выделенного из бактерий Salmonella typhi.

- поливалентный брюшнотифозный бактериофаг (таблетки с кислотоустойчивым покрытием) для экстренной профилактики брюшного тифа.