2.3.7 Серологическая диагностика

Для серологической диагностики ИК использованы методы – определения маннана («Platelia® Candida Ab») и антиманнановых антител («Platelia® Candida Ag») (BioRad, США). Наличие маннана и антиманнановых антител в сыворотке крови оценивали путем сравнения оптической плотности образца, полученного из биосубстратов больных, с контрольным образцом в спектрофотометр. Диагности- чески значимым (положительным) для маннана считали индекс выше 0,5 нг/мл, промежуточный результат – 0,25 – 0,5 нг/мл, отрицательный результат < 0,25 –

0,5 нг/мл, для антиманнановых антител – положительный результат > 10 AU/мл, промежуточный результат 5,0 – 10 AU/мл, отрицательный результат < 5,0 AU/мл.

Серологическая диагностика выполнена в НИЛ «Молекулярно-генетической микологии» (ведущий научный сотрудник – к.б.н. С.М. Игнатьева).

2.3.8 Методы патоморфологического исследования

Биопсийный, операционный или секционный материал подвергали обезво- живанию после фиксации формалином, заливали в парафиновые блоки. Из пара- финовых блоков готовили срезы толщиной 4 мкм. Фиксированные срезы окраши- вали гематоксилином-эозином. Дополнительно проводили PAS-реакцию и окрас- ку по методу Гомори-Грокотта для выявления элементов гриба.

Патоморфологическое исследование выполнено в НИЛ патоморфологии и цитологии (и.о. заведующей – д.б.н. Степанова С.М., старший научный сотрудник

– к.м.н. Авдеенко Ю.Л.).

2.3.9 Критерии диагностики «доказанного» инвазивного кандидоза

Для диагностики ИК использовали критерии, принятые Европейской органи- зацией по изучению и лечению рака (EORTC) и группы исследующей микозы

(MSG) Национального института аллергологии и инфекционных заболеваний

(NIAID) США [De Pauw B. et al., 2008].

«Доказанный» ИК считали при выявление клеток Candida spp. при гистоло- гическом, цитологическом исследовании или прямой микроскопии образца, полу- ченного при помощи диагностической пункции или биопсии из «стерильной» в норме биосубстрата (исключая слизистые оболочки) или при положительном ре- зультате посева периферической крови на грибы Candida spp., или при положи- тельном результате посева биосубстратов, полученных стерильно из «стериль- ной» в норме области.

2.4 Статистическая обработка результатов

Статистический анализ полученных результатов был выполнен с помощью параметрических и непараметрических методов программы Statistica for Windows (версия 10 Лиц. BXXR310F964808FA-V). Для статистического анализа использо- вали следующие методы статистического анализа: оценку соответствия закону нормального распределения по критерию Колмогорова-Смирнова; определение числовых характеристик переменных; оценку значимости различий количествен- ных показателей в независимых выборках по U-критерию Манна-Уитни. Из непа- раметрических методов применяли критерий Хи-квадрат Пирсона, при его не- устойчивости использовали двусторонний точный тест Фишера. Для анализа дан- ных, содержащих цензурированные наблюдения, использовали F-критерий Кокса, критерий Кокса – Ментела. Метод Каплана – Мейера был использован при оценке выживаемости. Для определения пороговых значений факторов оказывающих влияние на выживаемость был сформирован суммарный балл благоприятного ис- хода с помощью метода построения классификационных деревьев. Для визуали- зации структуры исходных данных и полученных результатов их анализа мы ис- пользовали графические возможности системы Statistica for Windows и модуль построения диаграмм системы Microsoft Office. Для представления частотных ха- рактеристик признаков были построены гистограммы и диаграммы. Количествен-

ные показатели в различных исследуемых подгруппах для полноты описания и удобства восприятия и сравнения мы представили в форме «Box&Whisker Plot», когда на одном поле при различных группировках на основе качественных крите- риев отражены среднее значение, ошибка среднего и стандартное отклонение для указанного параметра. Критерием статистической достоверности получаемых вы- водов считали общепринятую в медицине величину р<0,05 [Реброва О.В., 2002; Юнкеров В.И. и др., 2005]. При этом устойчивый вывод о наличии или отсутствии достоверных различий нами формулировался тогда, когда мы имели сходные по сути результаты по всему набору применявшихся критериев.