1.6. Наблюдение роста сосудов на различных объектах

Ранее данный метод широко применялся для описания последовательности событий при образовании, росте сосудов и их ре­грессии. Кроме того, он оказался очень полезным для изучения связанных с ангиогенезом перестроек сосудистой сети. В качестве объекта исследования применялись растущие конечности земно­водных, мышца, поднимающая яичко у крыс (195).

Сравнительно недавно был предложен новый метод: изучение ангиогенеза путем биомикроскопии сосудов брыжейки у молодых растущих крыс (349). Сущность нового подхода заключается в том, что производится срединная лапаротомия. Небольшая часть тонкой кишки с брыжейкой выносится в рану и помещается на пластиковую подставку таким образом, чтобы брыжейка постоян­но была под слоем тока изотонического раствора внеклеточного типа. Участок брыжейки постоянно поддерживается в натянутом виде с помощью специального кольца с иглами.

Недостатком указанной методики является то обстоятельство, что период наблюдения ограничен 1-2 часами, после чего развива­ются повреждения. Однако данный подход позволяет с помощью серийных полутонких и ультратонких срезов осуществить анализ каждого изученного биомикроскропически капиллярного сегмента и каждой детали, интересующей исследователя и зарегистрирован­ной с помощью видеотехники. Наиболее перспективным методом в настоящее время стала подсадка поливинилового диска, имею­щего губчатую структуру, в подкожный карман экспериментально­го животного с последующим наблюдением за врастанием сосудов по направлению к центру диска, где обычно содержится либо тес­тируемая ткань, либо тестируемое вещество (137).

Очень часто бывает необходимо оценить функциональную, обычно биосинтетическую активность эндотелиального пласта. Для чего определяют изменение активности ферментов, их секре­цию, экспрессию антигенов, информационной РНК и тд.

Наконец, для исследования эмбрионального васкуло- и ангио­генеза используется культивирование различных частей эмбриона, чаще всего куриного (408).

Таким образом, в настоящее время наметились возможности достаточно объективных и воспроизводимых подходов к изучению ангиогенеза во взрослом организме. Ведутся работы по стандарти­зации исследований. Все это позволило за короткий период време­ни решить многие вопросы ангиогенеза, особенно касающиеся индукторов и ингибиторов этого процесса.

Глава 2 ангиогенез и васкулогенез в пренатальном и постнатальном периодах онтогенеза

2.1. Вводные замечания

Вопросы образования и дифференцировки кровеносных сосудов в онтогенезе долгое время оставались наименее изученными (2, 421). Значительный прогресс, достигнутый в исследовании васкуло- и ангиогенеза за последние пятнадцать лет, обусловлен от­крытием и использованием специфических маркеров для идентификации эндотелиальных клеток (ЭК) и их предшественни­ков, появлением возможности исследования процессов васкуло- и ангиогенеза с использованием моделей, и в частности: 1) с получением моноклональных антител против ангиобластов и гемангиобластов перепелки (антитела QH1 и MB1); 2) с усовершенствованием методики трансплантации различных час­тей эмбриона птиц - созданием ЭМБРИОНАЛЬНЫХ ХИМЕР; 3) с разработкой адекватных условий культивирования и сокультиви-рования клеток, полученных из различных тканей эмбриона; 4) с усовершенствованием методов выделения в чистом виде различ­ных ростовых факторов и молекул внеклеточного матрикса.

В качестве характерного примера можно привести эксперимен­ты по пересадке частей первичной полоски перепелки, не имею­щих кровеносного русла, в различные участки эмбриона курицы с последующей обработкой моноклональными антителами против ангиобластов перепелки. При этом в эндотелиальной выстилке различных сосудов курицы обнаруживались как окрашенные (пе­репелиные), так и неокрашенные (куриные) ЭК (431).

Получение моноклональных антител QH1 против клеток крас­ного костного мозга из большеберцовой кости 12-дневного эмбри­она перепелки позволило маркировать начальные стадии образования гемангиобластов (316). Они связываются с предше­ственниками как эндотелиальных, так и гемангиобластических клеток. Моноклональные антитела, названные анти-MB1 и направ­ленные против поверхностного антигена MB1 клеток перепелки, создавались путем иммунизации U-цепью иммуноглобулинов взрослых перепелок (323). Их иммунореактивность ограничена ЭК и неэритроидными предшественниками гемангиобластов. В эмб­рионе эти антигены впервые регистрируются в уплощенных клетках на периферии гемангиобластических кластеров на стадии од­ного сомита.