1.4. Метод тканевых культур

Тканевые культуры, особенно те, на которых можно воспроиз­вести фенотип ангиогенеза, являются удобным и все более широко распространяющимся средством для изучения факторов, вовле­ченных в капиллярный рост. Обычно их использование обходится дешевле альтернативных методов оценки ангиогенеза: прозрачных камер, роговицы кролика и хориоаллантоисной мембраны. В соот­ветствующем разделе настоящей книги мы более подробно разбе­рем вопросы, связанные с использованием метода тканевых культур для изучения ангиогенеза. Пока же отметим, что выращи­вание in vitro эндотелия и гладких мышечных клеток позволяет оценивать скорость их миграции и отслеживать направленность движения (64). Для этих же целей применяется трековый анализ движения эндотелиальных клеток (ЭК) по подложке с нанесенным на нее слоем коллоидного золота (57). Однако хотелось бы подчер­кнуть, что оценка отдельных аспектов ангиогенеза in vitro ни в коей мере не заменяет его исследования in vivo.

В последние годы оценка различных аспектов ангиогенеза in vitro применяется все шире. Используется локальное повреждение эндотелиального монослоя, ведущее к миграции и пролиферации краевых эндотелиоцитов. Для оценки двигательной активности клеток в ответ на хемотаксическое влияние применяют различные субстраты, на которых эндотелиоциты оставляют четко различи­мые следы. Анализ пролиферативного ответа ЭК осуществляется чаще всего с использованием стандартных подходов: введением меченого тимидина, определением содержания ДНК и тд.

Для того, чтобы правильно трактовать результаты, получаемые при исследовании механизмов ангиогенеза на ЭК, полученных из разных источников; необходимо хорошо представлять себе особенности их поведения в культуре ткани и реагирования на те или иные факторы окружения (табл.1).

Таблица 1.

Структурно-функциональные особенности ЭК из аорты и из микрососудов мозга (по 236,217)

Признаки	Микрососуды	Аорта
Морфология	Похожи на фибропласты	Типичные (булыжная мостовка)
VIII фактор	+	+
Щелочная фосфатаза	+	+
Гамма-глутамилтранспептидаза	+
Специфические гранулы	реже	чаще
Фермент, конвертирующий ангиотензин	-	+
Простациклин	-	+

Одной из наиболее удачных моделей для оценки дифференциа­ции сосудистой стенки является культивирование эндотелия на трехмерных субстратах, типа коллагенового геля, желатина и т.д. (303).

1.5. Трансплантация органов и тканей

Метод оценки васкуляризации трансплантатов позволяет ре­шить многие вопросы, связанные с исследованием механизмов ангиогенеза. Однако при его применении следует учитывать, какой вид пересадки используется. К примеру, при пересадке аутологичной мышечной ткани реваскуляризация вначале идет от окружаю­щих сосудов хозяина и лишь позднее от сосудов трансплантата. Гомотрансплантаты вызывают интенсивную васкуляризацию со стороны сосудов хозяина, но их собственные сосуды при этом раз­рушаются (195).

В этой связи с иммунологической точки зрения защечный кар­ман хомячка является привилегированным местом для пересадки или подсадки различных тканей аллогенного или ксеногенного происхождения, поскольку в этой области после операции не раз­вивается немедленной воспалительной реакции.