4.3. Резюме

Таким образом, в настоящее время сложились довольно строй­ные представления о механизмах ангиогенеза, последовательности событий в ранние сроки этого процесса, об ультраструктурной ор­ганизации вновь образованных микрососудов. Неоангиогенез на­чинается с миграции эндотелиальных клеток, которая проявляется образованием на базальной плазмалемме псевдоподий, проникаю­щих через разрушенную протеазами базальную мембрану. Мигра­ция в свою очередь инициирует начало синтеза ДНК и пролиферацию эндотелиоцитов. Последняя обеспечивает как бы накопление потенциала роста, являющегося в дальнейшем строи­тельным материалом для нового сосуда. После образования ка­пиллярной почки происходит ее канализация и установление циркуляции в ней крови. Новообразованные микрососуды харак­теризуются сниженными барьерными свойствами стенок. Участие в процессе созревания стенок перицитов делает сосуды менее про­ницаемыми и блокирует их дальнейший рост.

Глава 5 регуляция ангиогенеза

РЕГУЛЯЦИЯ АНГИОГЕНЕЗА предполагает реализацию таких механизмов и средств, которые воздействуют на сосудообразование. Они могут побуждать развитие сосудов, ускорять, интенсифи­цировать их рост, влиять на формирование стенки сосудов, направление их роста, даже подавлять его. Целесообразно в главе, посвященной регуляции ангиогенеза, выделить фрагменты, объяс­няющие информацию об индукторах ангиогенеза, стимуляторах его и ингибиторах. Очевидно, им должен быть предпослан раздел, в котором говорилось бы о методах стандартизации эффектов воздействия на ангиогенез.

5.1. Оценка ангиогенной активности

Ни единых критериев, ни шкалы показателей динамики ангио­генеза пока не существует. Попытки подсчета количества выраста­ющих новых капилляров, определения скорости их роста, радиуса диффузии не унифицированы, полученные данные противоречи­вы. Затруднения в оценке ангиогенных свойств различных факто­ров возникают вследствие того, что их действие in vivo и in vitro не совпадает. Так, вещество с явным стимулирующим ангиогенез действием in vitro зачастую оказывается нейтральным и даже ингибирующим ангиогенез in vivo и наоборот. Отсюда вытекает за­ключение о том, что механический перенос данных, полученных in vitro, в экспериментальные исследования на животных, а тем более на человека не может быть допущен. Очевидно, внедрению в прак­тику подлежат лишь те вещества, природа и свойства которых до­сконально изучены, а механизм действия проверен и in vivo и in vitro.

Поскольку исследования в данном направлении стремительно развиваются, возникла проблема верификации и стандартизации полученных результатов. Принят джентльменский набор методов и моделей, необходимых для проверки ангиогенной активности различных веществ: оценка всех трех фаз ангиогенеза (отщепление от субстрата, миграция и пролиферация) in vitro и проверка ангио­генной активности in vivo (как на модели васкуляризации роговицы, так и на хориоаллантоисной мембране и др. моделях) (160). В настоящее время практически каждая фаза ангиогенеза легко мо­делируется и оценивается количественно in vitro. В первом случае измеряется активность выделяемых клетками протеаз, во втором - скорость направленной миграции клеток, в третьем - уровень про­лиферативной активности (93). В то же время при изучении ангиогенной активности различных факторов in vitro следует учитывать, эндотелиальные клетки (ЭК) какого пассажа использо­ваны в экспериментах. Отмечено, например, что после 10-го пас­сажа возможна утеря способности ЭК реагировать на митогены (153, 265). Принципиально важным является применение ЭК, выделенных именно из микрососудов, поскольку эндотелиоциты из других источников часто имеют неприемлемые для указанных це­лей свойства (см. гл.2).

Для разрешения данного противоречия исследователи сосредо­точили усилия на поиске и создании стандартизированных усло­вий in vitro для анализа ангиогенной активности, например, линейных культур клеток. С другой стороны, при использовании и оценке индукторов ангиогенеза следует всегда выяснить его проис­хождение по отношению к изучаемой ткани: является он эндоген­ным или экзогенным (например, из плазмы крови), тип клеток, из которых выделен индуктор.

Так как существование неоангиогенеза доказано и для диффе­ренцированных паренхиматозных органов (сердца, мозга и мышц при гипоксии; сердца и мышц при физических упражнениях, при непрямой стимуляции мышц в течение 4-7 дней, в длительно со­кращающемся в замедленном режиме сердце, в мышцах и сердце после длительного применения сосудорасширяющих препаратов), необходимо условиться о критериях, позволяющих верифициро­вать наличие неоангиогенеза в таких случаях. Для этого использу­ют следующие признаки: 1) прямое наблюдение капиллярных выростов; 2) увеличение числа меченых ЭК; 3) возрастание числа капилляров на единицу площади или объема (195).