6.2.2. Особенности ангиогенеза при заживлении кожных ран . В условиях воздействия жидкой среды и некоторых ферментов (раздел написан с участием т.В.Ершовой)

Для изучения влияния различных солевых растворов и некото­рых ферментов нами были проведены эксперименты на 162 белых беспородных крысах-самцах по анализу растущих микрососудов в дерме кожи крысы в различных условиях заживления стандартной раны. Моделью для изучения особенностей заживления ран при воздействии ферментами служил полнослойный кожный дефект размером 1,5x1,5 см. У крыс в межлопаточной области под эфир­ным наркозом выщипывали шерсть для подготовки операционно­го поля площадью 4x4 см. Затем кожу обрабатывали этанолом и 5-процентным раствором йода. При помощи трафарета наносили контуры раны, после чего ножницами иссекали полнослойный кожный лоскут и подкожножировой клетчатки. Все животные бы­ли разделены на четыре группы. Первая группа (контрольная): ра­ну подвергали воздействию физиологическим раствором. Вторая группа: стимуляцию заживления ран проводили с помощью 0,2-процентного трипсина на физрастворе. Третья группа: в качестве стимулирующего вещества использовали 0,1-процентную ронидазу на физиологическом растворе. Четвертая (интактпая) группа: кожа каким-либо воздействиям не подвергалась. После операции животных содержали в индивидуальных клетках для исключения зализывания и травмирования ими ран.

Воздействие ферментами и физиологическим раствором про­водили на следующий день после операции в утренние часы с 9.00 до 10.00 один раз в сутки в течение 20 мин. с помощью специаль­ной капсулы. Продолжительность стимуляции ограничивали сро­ком наступления полной эпителизации раны. Полное закрытие дефекта эпидермисом оценивали визуально, что впоследствии подтверждалось на гистологических срезах.

Как известно, заживление ран связано с формированием грануляционной ткани и образованием в ней капилляров. В разные фа­зы раневого процесса степень васкуляризации неодинакова. Наши исследования с применением количественного метода подсчета длины капилляров на единицу объема грануляционной ткани выя­вили неравномерность скорости и интенсивности развития микро­сосудов в зависимости от условий микроокружения.

Суммарная длина капилляров в начальные сроки заживления ран прогрессивно нарастает (табл.3). На 2-е сутки после операции (фаза травматического воспаления) у животных всех групп отдель­ные капилляры встречаются только в области жировой клетчатки дна раны. Они расширены, базальная мембрана разрыхлена. Тка­ни, окружающие микрососуды, содержат форменные элементы крови. Наблюдается смешанное полнокровие.

Начинал с 4-х суток эксперимента (начало второй фазы) отме­чаемся интенсивное развитие капилляров грануляционной ткани. Они образуют почкующиеся выросты и эндотелиальные тяжи. Со­судистые петли располагаются перпендикулярно поверхности ра­пы. Протяженность сосудистого русла в 1 мм формирующейся грануляционной ткани в ранах у крыс второй группы (воздействие трипсином) достоверно выше этого показателя для контрольной группы животных. Длина капилляров у животных третьей группы также достоверно больше но сравнению с аналогичными значени­ями для первой группы (табл.3).

На 7-е сутки течения раневого процесса (фаза формирования грануляционной ткани и эпителизации дефекта) у крыс первой группы на полутонких срезах видно застаивание плазмы крови в верхних петлях капилляров. Непосредственно под полинуклеарным валом эритроциты образуют монетные столбики. В ранах жи­вотных всех исследованных групп наблюдается смешанное полнокровие. В лот срок наибольшее развитие капиллярной сети оказалось у животных третьей группы. Данный показатель у них был статистически достоверно выше показателей длины капилля­ров у животных второй и третьей групп. Наблюдается митотическое деление ЭК в растущих капиллярах (рис.20А).

На 14-е сутки после операции (конец 2-й, начало 3-й фазы за­живления) длина капилляров в 1 мм грануляционной ткани до­стигает максимальных величин у животных второй и третьей групп. В контрольной группе животных этот показатель не изме­нился по сравнению с 7-ми сутками эксперимента. Кроме того, сосуды здесь выглядят спавшимися и отмечается гиалиноз соеди­нительной ткани.

В ходе формирования и перестройки рубца (3-я фаза раневого процесса) во всех трех группах животных длина микроциркуляторного русла уменьшается. Однако, в контрольной группе крыс длина капилляров на 60-е сутки по сравнению с 14-ми сутками сократилась лишь на 7,7%, в то время как во второй и третьей группах уменьшение протяженности микрососудов составило 39,6% и 32,6% соответственно. Абсолютные показатели длины микроциркуляторного русла в группе животных с воздействием на раневую поверхность раствора ронидазы на 60-е сутки после опе­рации в 1,5 раза превосходят длину капилляров у животных двух других групп.

Таким образом, под действием ферментов процессы ангиогене­за в грануляционной ткани активируются. Суммарная длина микроциркуляторного русла по сравнению с контрольной группой животных увеличивается. Скорость ангиогенеза в первую фазу ра­невого процесса самая высокая при воздействии раствора трипси­на. Раствор ронидазы во вторую и в третью фазы заживления ран оказывает более сильный эффект, чем раствор трипсина. Вновь об­разующиеся кровеносные сосуды в меньшей степени, чем при ис­пользовании физиологического раствора, имели признаки стаза и сладжа эритроцитов. Следовательно, при воздействии на внекле­точные структуры рост капилляров облегчается, что ведет к фор­мированию более нежного рубца.

В процессе созревания и перестройки рубцовой ткани происхо­дит редукция микрососудистой сети и уменьшение показателя васкуляризации (длины капиллярной сети). Степень редукции в условиях воздействия на раневой дефект трипсина и ронидазы в 4-5 раз больше, чем в контрольной группе животных.

Таблица 3.

Длина капиллярной сети (мм в 1мм² среза) грануляционной ткани и рубца в динамике заживления кожаных ран в жидкой среде (p 0,01 по U-критерию Уилкоксона) (X±Sx,* - по сравнению с предыдущим сроком)

Сутки	Воздействующее вещество
	Физраствор	трипсин	ронидаза
2	29,12 + 2,5	51,11 + 1,69	46,92 + 1,96
		p < 0,001	p < 0,001
4	51,91 + 3,65	110,35 + 6,10	92,12 + 6,76
		p < 0,001	p < 0,001
7	105,58 + 5,06	145,24 + 6,29	177,85 + 7,72
		p < 0,001	p < 0,001
		*p < 0,01
14	105,57 + 3,63	172,20 + 11,45	212,76 + 11,16
		p < 0,001	p < 0,001
		*p < 0,05
30	82,54 + 1,92	118,61 + 4,43	179,77 + 7,59
		p < 0,001	p < 0,001
		*p < 0,001
60	97,24 + 4,14	104,41 + 5,92	143,35 + 6,31
		p < 0,001