1. Реакция влагалищного мазка:

а - в мазке определяются базальные, парабазальные клетки, лейкоциты — резкая эстрогенная недостаточность;

б - в мазке парабазальные клетки и единичные промежуточные — выраженная гипофункция яичников;

в - в мазке промежуточные клетки и единичные поверхностные — умеренная гипофункция яичников (присутствуют в нормальном менструальном цикле в фолликулиновой и лютеиновой фазах, за исключением периовуляторного периода);

г - в мазке поверхностные клетки, единичные промежуточные, среди поверхностных — клетки со сморщенными ядрами — хорошая эстрогенная насыщенность, определяется в периовуляторный период.

2. Индекс созревания — процентное соотношение поверхностных, промежуточных и парабазальных клеток. Записывается в виде трех чисел, из которых первое — процент парабазальных — второе — промежуточных и третье — поверхностных клеток. 0/20/80 — периовуляторный период, максимальный уровень эстрогенов и поверхностных клеток; 0/70/30 — ранняя фолликулиновая фаза.

3. Кариопикнотический индекс (КПИ) — процентное отношение поверхностных клеток с пикнотическими ядрами к клеткам, имеющим везикулярные (непикнотические) ядра. КПИ в начале фолликулиновой фазы 25-30% к моменту овуляции — 60-70%, в лютеиновой фазе снижается до 25%.

III. Измерение базальной температуры — тест основан на гипертермическом эффекте прогестерона. Последний оказывает непосредственное воздействие на центр терморегуляции, расположенный в гипотамаламусе. Поэтому при повышении секреции прогестерона во вторую половину нормального менструального цикла отмечается повышение базальной температуры на 0,4-0,8⁰С. В фолликулиновую фазу базальная температура ниже 37⁰С, период овуляций падает до 36,2⁰ — 36,3⁰С, после овуляции повышается до 37,1⁰ — 37,3⁰С, редко до 37,6⁰С и держится на субфебрильных цифрах в лютеиновой фазе (не менее 10-12 дней), непосредственно перед менструацией падает до исходных цифр. По базальной температуре можно судить о продолжительности фаз цикла, их полноценности, наличии или отсутствии овуляции.

IV. Гистологическое исследование соскоба эндометрия. Метод основан на появлении характерных изменений эндометрия под воздействием стероидных гормонов яичника. Эстрогены вызывают пролиферацию, а прогестерон — секреторные преобразования.

В норме в фазу секреции железы расширены, имеют полиповидную форму, видны компактный и губчатый слой. Цитоплазма в клетках железистого эпителия светлая, ядро бледное. В просвете желез виден секрет. При гипофункции желтого тела железы слабо извитые, с узкими просветами. При ановуляторном менструальном цикле железы эндометрия узкие или несколько расширенные, прямые или извитые. Железистый эпителий цилиндрический, высокий, ядра крупные, расположены базально или находятся на различных уровнях. Атрофический эндометрий характеризуется преобладанием стромы, иногда видны единичные железы. Соскоб чрезвычайно скудный.

V. Исследование крови. Основано на том, что состав форменных элементов изменяется в соответствии с фазами менструального цикла. В позднюю фолликулиновую фазу увеличивается количество лейкоцитов, тромбоцитов и эритроцитов. К началу менструации количество указанных элементов минимальное. Метод менее достоверный из-за больших индивидуальных колебаний.

VI. Кожно-аллергический тест. Основан на появлении аллергической реакции в ответ на введение гормональных препаратов (эстрогенов, прогестерона). На месте введения гормональных препаратов образуется папула, размеры которой увеличиваются при нарастании уровня эстрогенов или прогестерона. При этом одновременно с увеличением размеров папулы возникает местная аллергическая реакция: покраснение папулы, зуд. Если цикл ановуляторный, изменение папулы на введение эстрогенов отсутствуют. Изменение папулы при введении прогестерона в период предполагаемой максимальной функции желтого тела (поздняя лютеиновая фаза) свидетельствует о происшедшей овуляции и удовлетворительной функции желтого тела. Тест проводят в течение нескольких менструальных циклов.

Ранее для исследования в сыворотке крови и моче содержания половых стероидных гормонов в клинической практике было возможно использование биохимического метода по цветной реакции Кобера. В настоящее время используются радиоиммунологический (РИА) и иммуноферментный (ИФА) методы, которые являются более простыми, точными и специфическими методами анализа.

РИА основан на обнаружении меченых радионуклидами гормонов in vitro. Определяемый гормон конкурирует за место связывания АТ до химического равновесия со своим меченным аналогом (АГ). Сравнивая степень уменьшения связывания меченого гормона с аналогичным действием известного количества гормона, взятого в качестве стандарта, определяется концентрация гормона в плазме крови или другой жидкости.

С помощью РИА в крови определяют гормоны гипоталамуса (люлиберин, фолиберин), гипофиза (ФСГ, ЛГ, пролактин, АКТГ, ТТГ), яичников (эстрогенные соединения - Э1, Э2, Э3, прогестерон, андрогены), надпочечников (кортизол, тестостерон, альдостерон), щитовидной железы (Т3, Т4) и др. желез. В суточной моче определяют 17-кетостероиды - метаболиты андрогенов, которые образуются в организме женщины в яичниках, надпочечниках и внегонадно.

Гормонально-функциональные пробы применяются для топической и дифференциальной диагностике эндокринных заболеваний как по горизонтали (яичники-надпочечники-щитовидная железа), так и по вертикали (матка - яичники - гипофиз - гипотоламус - нейротрансмитерные механизмы).

а) проба с прогестероном - применяется при аменорее любой этиологии для исключения маточной формы; считается положительной, если через 2-4 дня после 6-8 дневного внутримышечного введения прогестерона или через 8-10 дней после однократного введения оксипрогестерона капроната у больной появляется менструальноподобная реакция. Положительная проба исключает маточную форму аменореи и свидетельствует о дефиците прогестерона. Отрицательная проба может быть при маточной аменорее или при эстрогенной недостаточности.

б) проба с эстрогенами и прогестероном - проводится для исключения (подтверждения) маточной или яичниковой формы аменореи. Больной в течение 10-14 дней вводят один из эстрогенных препаратов в/м (эстрадиола бензоат, фолликулин) или внутрь (этинил эстрадиол), затем прогестерон как и в пробе с прогестероном. Наступление менструальноподобной реакции свидетельствует о выраженном дефиците эндогенных эстрогенов, отрицательный результат указывает на маточную форму аменореи.

в) проба с дексаметазоном - применяется для определения характера гиперандрогении у женщин с признаками вирилизации, основана на угнетении секреции АКТГ. До и после проведения пробы определяют содержание 17-КС. Снижение уровня 17-КС после проведения пробы на 50-75% указывает на надпочечниковый источник андрогенов (проба положительная), на 25-30% - на яичниковое происхождение андрогенов (проба отрицательная).

г) проба с кломифеном - показана при заболевании, сопровождающимся ановуляцией, чаще на фоне олиго- или аменореи. Пробу проводят после месячных или менструальноподобной реакции. Назначается кломифена цитрат с 5 по 9 день от начала менструальноподобной реакции, действие его ощущается через гипоталамус. Отрицательная проба с кломифеном (отсутствие увеличения концентрации эстрадиола, гонадотропинов в плазме крови, монофазная базальная температура, отсутствие менструальноподобной реакции) указывает на гипоталамо-гипофизарное нарушение.

д) проба с люлиберином - проводится при отрицательной пробе с кломифеном. Внутривенно вводят 100 мг синтетического аналога люлиберина. До начала введения препарата и через 15, 30, 60 и 120 мин после введения через постоянный катетер из локтевой вены берут кровь для определения содержания ЛГ. При положительной пробе к 60-й мин содержание ЛГ нарастает до цифр, соответствующих овуляции, что указывает на сохраненную функцию передней доли гипофиза и нарушение функции гипоталамических структур.

8. Морфологические методы исследования.

Аспирационная биопсия эндометрия.

Аспирационная биопсия эндометрия — минимально инвазивный метод, который позволяет определить выраженность пролиферативных изменений эндометрия. Используют как скрининговый метод анализа состояния эндометрия при изменении его по данным УЗИ, а также при динамическом контроле эффективности лечения.

Большое распространение получила методика аспирационной биопсии с помощью специального катетера «Пайпель», который позволяет извлечь кусочки ткани эндометрия для гистологического исследования.

Методика. После определения размера и положения матки обнажают с помощью зеркал шейку матки, обрабатывают ее спиртом, фиксируют пулевыми щипцами, вводят катетер диаметром 2–4 мм в полость матки и производят аспирацию ее содержимого с помощью шприца (может быть использован шприц Брауна). После извлечения катетера из матки полученный материал наносят на предметное стекло, приготавливают тонкий мазок (как при исследовании крови). Полученные мазки передают в цитологическую лабораторию. У менструирующих женщин аспират из матки рекомендуют брать на 25–26 й день менструального цикла; у женщин пре и перименопаузального возраста — в любое время.

Наличие в препаратах аспирата активно пролиферирующих клеток эндометрия является цитологическим признаком гиперплазии эндометрия. При его атрофии клеток эндометрия в препарате мало, они мелкие, мономорфные, расположены разрозненно.

Отсутствие признаков злокачественных изменений в материале, полученном методом аспирации (фактически, это поверхностные клетки эндометрия), не гарантирует отсутствие злокачественного процесса в глубоких слоях слизистой оболочки. Поэтому диагностическое выскабливание проводят обязательно, даже если по данным цитологического исследования не обнаружены патологические изменения, но имеются клинические проявления заболевания эндометрия.

Мазки на онкоцитологию.

Многие гинекологические заболевания, в том числе и онкологические, на ранних стадиях протекают без видимых симптомов. А их своевременная диагностика даёт шанс на более успешное лечение.

Мазки для цитологии. При плановом гинекологическом осмотре берут два вида мазков: мазок на онкоцитологию из цервикального канала, который необходим для обнаружения начальной стадии рака шейки матки; из влагалища берётся мазок на цитологию, что показывает наличие воспалительного процесса, вирусной инфекции, бактериального вагиноза, которые нуждаются в незамедлительном лечении. Но возможно и внеплановое исследование шейки и канала матки, основанием для чего служат: генитальный герпес; остроконечные кондиломы; генитальные бородавки; беспричинные влагалищные выделения; маточные кровотечения; сбои менструального цикла; планирование зачатия; бесплодие; установка средств внутриматочной контрацепции; наличие ВИЧ-инфекции; присутствие злокачественного вируса папилломы человека. Анализ на цитологию в гинекологии считается одним из наиболее информативных, к тому же мазок берётся быстро, легко и безболезненно. Поэтому метод стал бесплатным и нашёл широкое применение в гинекологии. Но в 5-10% случаев он может дать ложный результат, что происходит из-за того, что многие женщины понятия не имеют, что за пару дней до взятия мазка им следует воздерживаться от: сексуальных контактов; использования вагинальных свечей и спермицидных мазей; спринцевания влагалища; использования влагалищных тампонов; принятия противовоспалительных и контрацептивных таблеток. Следует воздержаться от мочеиспускания за 2-3 часа до. Гинеколог не берёт мазки в дни месячных, а также при наличии во влагалище воспалительного процесса, выделений и зуда. После достижения 19-летнего возраста ежегодно проводить цитологический анализ. Мазок на онкоцитологию положено брать даже в случае, когда женщина остаётся девственницей до 25 лет и более. Хотя бывают и исключения: если дважды подряд цитологический анализ был отрицательным, то следующий можно брать через три года. А после 65-летнего возраста цитологическое исследование женщине уже не нужно. Женщины из группы риска с перечисленными выше проблемами обязаны чаще делать этот анализ.

Методика проведения онкоцитологического анализа Процедура происходит в смотровом кабинете, предваряя двуручное обследование матки с соблюдением определённой последовательности: Гинекологическое зеркало вводится для возможности осмотра её канала и шейки. После очищается ватным тампоном от выделений. Стерильным шпателем производится соскоб с трёх участков (свода влагалища, со стороны влагалища – для исследования плоских эпителиальных клеток и со стороны шеечного канала – для изучения цилиндрических эпителиальных клеток). Взятый на атипичность клеток материал наносится равномерно на обезжиренное стекло, обработанное специальным раствором. Все 3 пробы могут находиться на одном стекле, а чтобы они не подсыхали, на них капают смесью этанола и диэтилового эфира либо чистым этанолом, а иногда применяются специальные аэрозоли. После этого берётся соскоб с цервикального канала, необходимый для определения онкологии, возбудителей ИППП и вагиноза, с помощью стерильной цервикальной щёточки или палочкой с ватным тампоном, пропитанным физиологическим раствором. Проба наносится на другое предметное стекло. Сама процедура взятия мазка из цервикального канала совершенно безболезненная. После взятия мазки отправляют в лабораторию на исследование, проводящееся обычно под микроскопом. Правда, в некоторых клиниках применяются другие методики определения патологий в эпителии (ПАП-тест или метод окрашивания по Папаниколау, методика высушивания).

Более достоверные результаты при поиске атипичных клеток даёт жидкостная цитология. От традиционного этот анализ отличает то, что взятый образец первоначально помещается в специальный раствор и лишь затем наносится на предметное стекло. При этом образец с помощью раствора очищается от ненужных лейкоцитов и слизи, а клетки эпителия лучше сохраняются для предстоящего исследования. После взятия онкоцитологического мазка иногда у женщин появляются небольшие кровяные сгустки, которые не должны стать предметом для беспокойства. Это совершенно нормальное явление, которое на следующий же день обычно исчезает. Расшифровка анализа на цитологию.

По этой методике можно интерпретировать результаты изучения цитологических мазков из влагалища. Они подразделяются на 5 классов, а в расшифровке хранится состояние эпителиальных клеток.

Первый класс – когда исследуемые клетки не изменены, а имеют правильные размеры, форму и расположение, что соответствует состоянию здоровой женщины.

Второй класс, в котором у отдельных элементов клетки снижена морфологическая норма. Это свойственно для инфекционных и воспалительных заболеваний, что может указывать на наличие вагиноза. В этом случае назначаются дополнительные обследования (биопсия, кольпоскопия), с помощью которых можно уточнить диагноз и выбрать тактику эффективного лечения.

В третьем классе результатов в некоторых клетках нарушено нормальное строение ядра и цитоплазмы, отмечаются такие аномальные отклонения, как дисплазия и гиперплазия. Но таких клеток ещё очень мало. Рекомендуется повторение цитологического исследования. В четвёртом классе результатов выявляются раковые клетки, в которых строение ядра, хроматина и цитоплазмы имеет злокачественные изменения, что позволяет говорить о предраковом состоянии.

Пятый класс характеризуется большим количеством атипичных клеток в мазке, значительно превышающем норму. Это свидетельствует о том, что шейка матки уже имеет начальную стадию онкологии. Расшифровка анализа на цитологию образцов, взятых из цервикального канала, проводится по методике Бетесда, обеспечивающей наиболее точные результаты. При постановке диагноза учитывается расположение клеток и изменения в клеточном ядре (дискариоз). Используются следующие обозначения: норма или отсутствие патологий не имеет особого обозначения; атипичные состояния, в том числе цервикальная неоплазия со следующими обозначениями: койлоцитоз, вагиноз – HPV; дисплазия первой степени – CIN I; дисплазия второй степени – CIN II; дисплазия третьей степени – CIN III. В практике цитологии используются следующие аббревиатуры для обозначения наличия атипичных клеток. ASC-US – присутствие в мазке плоских эпителиальных клеток с невыясненной этиологией. Часто встречается у женщин старше 45 лет, когда снижается производство экстрагенов. AGC – присутствие цилиндрических изменённых клеток, что может говорить о вагинозе и прочих болезнях. Чтобы уточнить диагноз, назначают дополнительные обследования. LSIL – присутствие атипичных, но не раковых клеток в небольшом количестве, требуется дальнейшее исследование кольпоскопией и биопсией. ASC-H – фиксация изменения строения клетки, присущего предраковому состоянию и начальной стадии рака шейки матки. HSIL – присутствие изменённых плоских клеток. Требуется незамедлительная терапия, способная предупредить развитие рака. AIS – наличие цилиндрических клеток (раковых), необходимо срочное лечение.