- •1 Роль ветеринарной вирусологии в подготовке ветеринарного врача. Основные причины преобладания вирусных болезней над инфекционными болезнями животных невирусной этиологии.
- •2 Состояние биологии и медицины конца XIX века. Открытие вирусов. Д.И. Ивановский – основоположник вирусологии.
- •3 Основные этапы в истории вирусологии и превращение вирусологии в одну из фундаментальных биологических наук.
- •4 Вклад отечественных ученых в развитие вирусологии.
- •5 Основные достижения, современное состояние и задачи медицинской и ветеринарной вирусологии.
- •6 Происхождение и природа вирусов.
- •7 Кардинальные свойства вирусов. Физическая структура вирусов.
- •8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
- •9 Характеристика вирусных белков.
- •10 Номенклатура вирусов.
- •19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
- •20 Синтез вирусных компонентов.
- •21 Основные типы (формы) взаимодействия вирусов с клеткой. Роль отдельных компонентов вирусной частицы.
- •27 Понятие о гене и геноме. Генотип и фенотип вирусов. Генетические признаки (маркеры) и их использование в характеристике штаммов.
- •28 Мутации и их механизмы. Практическое использование вирусных мутантов.
- •29 Генетические взаимодействия вирусов.
- •30 Негенетические взаимодействия вирусов.
- •11 Пикорнавирусы.
- •16 Реовирусы.
- •12 Тогавирусы и флавивирусы.
- •13 Коронавирусы.
- •14 Рабдовирусы.
- •15 Ретровирусы.
- •17 Парвовирусы.
- •18 Герпесвирусы и поксвирусы.
- •22 Виды культур клеток и их использование. Переживающие и плазменные культуры.
- •23 Первично-трипсинизированные культуры клеток и субкультуры, их использование.
- •24 Перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их использование.
- •25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
- •26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
- •31 Факторы неспецифической противовирусной защиты животных.
- •32 Противовирусные ингибиторы и их роль в противовирусном иммунитете. Ингибиторы
- •Механизм действия ингибиторов
- •33 Интерферон, его природа, свойства, механизм действия, получение и применение.
- •34 Иммунная система организма и её роль в специфическом противовирусном иммунитете.
- •35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
- •36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •38 Химические вакцины. Использование методов генной инженерии для получения противовирусных вакцин.
- •39 Препараты для специфической терапии вирусных болезней животных.
- •40 Препараты для неспецифической терапии вирусных болезней. Проблема химиотерапии вирусных болезней животных.
- •41 Вирус ящура. Краткая характеристика заболевания, история открытия и основные свойства вируса.
- •42 Методы лабораторной диагностики ящура. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •43 Вирус бешенства. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •44 Методы лабораторной диагностики бешенства. Биопрепараты для специфической профилактики.
- •45 Вирус болезни Ауески. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •46 Методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •47 Вирус оспы животных и птиц.
- •48 Вирус диареи крупного рогатого скота.
- •49 Вирус гриппа человека и животных.
- •50 Вирус чумы крупного рогатого скота.
- •51 Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
- •52 Вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота.
- •53 Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
- •54 Вирус классической чумы свиней.
- •55 Вирус африканской чумы свиней.
- •56 Вирус болезни Тешена.
- •57 Вирус болезни Ньюкасла.
- •58 Вирус гриппа (классической чумы) кур.
- •59 Вирус болезни Марека.
- •60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.
- •61 Правила отбора, консервирования и транспортировки вируссодержащего материала от больных животных и трупов.
- •62 Общие принципы и современные методы диагностики вирусных болезней.
- •63 Подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •64 Индикация вирусов в патологическом материале путем обнаружения вирионов и вирусных телец – включений.
- •65 Использование лабораторных животных в вирусологической практике.
- •66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.
- •67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.
- •68 Обнаружение вирусов в зараженных куриных эмбрионах.
- •69 Основные солевые, диспегрирующие растворы и питательные среды, необходимые для культивирования клеток, и их компоненты.
- •70 Методика получения первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •71 Индикация вирусов в зараженных культурах клеток.
- •72 Методика титрования вирусов по единичному эффекту.
- •73 Определение титра вируса. Методика расчета лд50 по Риду и Менчу.
- •74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
- •75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
- •76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
- •77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •81 Использование в вирусологии реакции гемагглютинации (рга).
- •82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.
- •83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
- •84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
- •85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
- •86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
- •87 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (днк-зонды), использование в вирусологии.
20 Синтез вирусных компонентов.
Средний (латентный) период репродукции вирусов. В нем происходит синтез вирусных компонентов, НК и белка.
Транскрипция – переписывание информации с ДНК на РНК по законам генетического кода с помощью РНК-полимеразы. Вирусная НК вступает в контакт с рибосомами и налаживает синтез ранних белков. Репрессоры типа гистонов блокируют синтез клеточной ДНК. Гистон препятствует снятию информации с клеточной ДНК на иРНК. На рибосомы не поступает клеточная информация, они освобождаются от синтеза клеточных компонентов. Ранние белки влияют и на митотические функции клетки, и она прекращает деление. Некоторые вирусы налаживают синтез ферментов ДНКаз, которые разрушают клеточный геном, чтобы использовать продукты клеточного генома для синтеза вирусных НК. Наряду с подавлением синтеза клеточных компонентов НК вируса вызывает синтез белков-полимераз, необходимых для репликации вирусных НК.
Трансляция иРНК. Стратегия вирусного генома в отношении синтеза иРНК у разных вирусов разная. У ДНКовых вирусов: ДНК - транскрипция – РНК – трансляция – белок. Такая стратегия у герпесвирусов и аденовирусов. Геном вирусов, представленный + нитью РНК, имеет более простую форму. РНК+ - белок. Пикорнавирусы, тогавирусы, коронавирусы. Вирусы, геном которых представлен РНК-: РНК- - иРНК – белок. При участии фермента транскриптазы происходит синтез иРНК. У ортомиксовирусов, парамиксовирусов, рабдовирусов. У ретровирусов передача генетической информации уникальная: РНК – ДНК – РНК – белок.
Репликация вирусных НК. Механизм репликации вирусных РНК и ДНК различен в зависимости от генома вируса. Субстратами для синтеза вирусных РНК и ДНК являются клеточные трифосфаты (АТФ, УТФ и т.д.) и углеводы (рибоза, дезоксирибоза). Разнообразие механизмов репликации связано с различными типами генома у вирусов.
Если вирус содержит двунитчатую ДНК, то для её синтеза нужен фермент ДНК-полимераза. У многих вирусов этот фермент есть. Если этого фермента нет в составе вириона (герпес-, аденовирусы), происходит расхождение нитей, на одной из нитей синтезируется иРНК. Она идет на рибосомы, где синтезируется белок-фермент ДНК-полимераза. Он осуществляет сборку молекул точных копий вирусной ДНК из клеточных компонентов.
Если в составе вириона имеется однонитчатая ДНК (парвовирусы), для её репликации необходим фермент ДНК-зависимая ДНК-полимераза, который входит в состав вириона. Этот фермент использует одну нить ДНК как матрицу, и на ней по принципу комплементарности строит вторую нить, т.е. на +нити сроится -нить, а на –нити - + нить. В дальнейшем на этой двуспиральной структуре синтезируются дочерние +нити ДНК. Матрицей является –нить ДНК.
У РНКовых вирусов геном представлен +нитью РНК (пикорнавирусы). +нить идет на рибосомы и налаживает синтез белка РНК-полимеразы. Этот фермент строит комплементарную –нить РНК, а затем на ней, как на матрице, собираются +нити РНК.
Если геном представлен –нитью РНК (рабдовирусы, ортомиксовирусы). –нить не вступает в контакт с рибосомами, не может наладить синтез белка. У этих вирусов должен быть фермент РНК-зависимая РНК-полимераза. Этот фермент синтезирует комплементарные +нити РНК, которые затем поступают в рибосомы клетки. Фермент РНК-полимераза синтезирует на +нити РНК многочисленные копии –нитей РНК.
Если геном представлен несколькими фрагментами, то каждый фрагмент несет свою информацию на рибосомы (в виде +нити РНК).
Вирусные двунитчатые РНК у реовирусов не могут поступать непосредственно в рибосомы. Передача генетической информации у них происходит через иРНК. В вирионах этих вирусов имеется фермент РНК-транскриптаза, с помощью которого синтезируется иРНК на матрице двунитчатой РНК. Фермент переписывает генетическую информацию с двунитчатой РНК на иРНК. иРНК поступает в рибосому, где вызывает синтез РНК-репликазы. Этот фермент синтезирует +нити РНК, комплементарные –нити, и вновь синтезируются двунитчатые молекулы РНК.
У онкогенных вирусов геном представлен РНК. Геном этих вирусов должен войти в геном клетки. В составе вирионов этих вирусов имеется фермент РНК-зависимая ДНК-полимераза (обратная транскриптаза). Кроме того, у них есть фермент ДНК-зависимая РНК-полимераза, осуществляющая синтез РНК на матрице ДНК.
Синтез вирусных НК идет до тех пор, пока есть строительный материал.
Синтез вирусных белков. АК состав вирусных белков не отличается в качественном отношении от АК состава клеточных белков. Те и другие построены из 20 АК. Синтез вирусных белков подчиняется всем закономерностям, которые присущи синтезу белков клетки, в его основе лежит тот же механизм. Белки синтезируются из АК клетки.
У ДНКовых вирусов процесс начинается с транскрипции, т.е. переписывания кода синтеза на матрицы ДНК. По принципу комплементарности образуются поздние иРНК. В их синтезе участвует ДНК-зависимая РНК-полимераза. Далее идет процесс трансляции, т.е. перевод генетической информации, содержащейся в иРНК на специфическую последовательность АК в синтезируемых вирусоспецифических белках. Считывание информации и синтез белка осуществляется с помощью транспортных РНК, которые в соответствии с кодом, т.е. чередованием пуриновых и пиримидиновых оснований в молекуле иРНК подбирают определенные АК на рибосомах, из которых формируется пептидная цепочка, которая уже является структурным белком. Из него формируются капсомеры и капсид.
Таким образом, белки вирусов строятся из 20ти клеточных АК, а отличаются от клеточных белков количеством АК и порядком их чередования. Как только в клетке накапливается определенное количество вирусной НК и вирусного белка, начинается процесс формирования вирионов.