- •1 Роль ветеринарной вирусологии в подготовке ветеринарного врача. Основные причины преобладания вирусных болезней над инфекционными болезнями животных невирусной этиологии.
- •2 Состояние биологии и медицины конца XIX века. Открытие вирусов. Д.И. Ивановский – основоположник вирусологии.
- •3 Основные этапы в истории вирусологии и превращение вирусологии в одну из фундаментальных биологических наук.
- •4 Вклад отечественных ученых в развитие вирусологии.
- •5 Основные достижения, современное состояние и задачи медицинской и ветеринарной вирусологии.
- •6 Происхождение и природа вирусов.
- •7 Кардинальные свойства вирусов. Физическая структура вирусов.
- •8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
- •9 Характеристика вирусных белков.
- •10 Номенклатура вирусов.
- •19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
- •20 Синтез вирусных компонентов.
- •21 Основные типы (формы) взаимодействия вирусов с клеткой. Роль отдельных компонентов вирусной частицы.
- •27 Понятие о гене и геноме. Генотип и фенотип вирусов. Генетические признаки (маркеры) и их использование в характеристике штаммов.
- •28 Мутации и их механизмы. Практическое использование вирусных мутантов.
- •29 Генетические взаимодействия вирусов.
- •30 Негенетические взаимодействия вирусов.
- •11 Пикорнавирусы.
- •16 Реовирусы.
- •12 Тогавирусы и флавивирусы.
- •13 Коронавирусы.
- •14 Рабдовирусы.
- •15 Ретровирусы.
- •17 Парвовирусы.
- •18 Герпесвирусы и поксвирусы.
- •22 Виды культур клеток и их использование. Переживающие и плазменные культуры.
- •23 Первично-трипсинизированные культуры клеток и субкультуры, их использование.
- •24 Перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их использование.
- •25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
- •26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
- •31 Факторы неспецифической противовирусной защиты животных.
- •32 Противовирусные ингибиторы и их роль в противовирусном иммунитете. Ингибиторы
- •Механизм действия ингибиторов
- •33 Интерферон, его природа, свойства, механизм действия, получение и применение.
- •34 Иммунная система организма и её роль в специфическом противовирусном иммунитете.
- •35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
- •36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •38 Химические вакцины. Использование методов генной инженерии для получения противовирусных вакцин.
- •39 Препараты для специфической терапии вирусных болезней животных.
- •40 Препараты для неспецифической терапии вирусных болезней. Проблема химиотерапии вирусных болезней животных.
- •41 Вирус ящура. Краткая характеристика заболевания, история открытия и основные свойства вируса.
- •42 Методы лабораторной диагностики ящура. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •43 Вирус бешенства. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •44 Методы лабораторной диагностики бешенства. Биопрепараты для специфической профилактики.
- •45 Вирус болезни Ауески. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •46 Методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •47 Вирус оспы животных и птиц.
- •48 Вирус диареи крупного рогатого скота.
- •49 Вирус гриппа человека и животных.
- •50 Вирус чумы крупного рогатого скота.
- •51 Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
- •52 Вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота.
- •53 Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
- •54 Вирус классической чумы свиней.
- •55 Вирус африканской чумы свиней.
- •56 Вирус болезни Тешена.
- •57 Вирус болезни Ньюкасла.
- •58 Вирус гриппа (классической чумы) кур.
- •59 Вирус болезни Марека.
- •60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.
- •61 Правила отбора, консервирования и транспортировки вируссодержащего материала от больных животных и трупов.
- •62 Общие принципы и современные методы диагностики вирусных болезней.
- •63 Подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •64 Индикация вирусов в патологическом материале путем обнаружения вирионов и вирусных телец – включений.
- •65 Использование лабораторных животных в вирусологической практике.
- •66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.
- •67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.
- •68 Обнаружение вирусов в зараженных куриных эмбрионах.
- •69 Основные солевые, диспегрирующие растворы и питательные среды, необходимые для культивирования клеток, и их компоненты.
- •70 Методика получения первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •71 Индикация вирусов в зараженных культурах клеток.
- •72 Методика титрования вирусов по единичному эффекту.
- •73 Определение титра вируса. Методика расчета лд50 по Риду и Менчу.
- •74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
- •75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
- •76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
- •77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •81 Использование в вирусологии реакции гемагглютинации (рга).
- •82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.
- •83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
- •84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
- •85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
- •86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
- •87 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (днк-зонды), использование в вирусологии.
8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
Клетки всех живых существ содержат 2 типа НК: ДНК и РНК. ДНК – двуспиральная молекула, РНК – односпиральная. Функция ДНК клетки заключается в хранении и репликации наследственной информации, т.е. является клеточным геномом. РНК в клетке представлена в 3х формах: информационная, рибосомальная, транспортная. Информационная РНК образуется в результате транскрипции генома и передает информацию с ДНК на рибосомы (белоксинтезирующий аппарат клетки). Рибосомальная РНК является структурным компонентом рибосом. Транспортная РНК доставляет АК к белоксинтезирующему аппарату клетки.
Геном вируса может быть представлен молекулой РНК или ДНК. Поэтому все вирусы подразделяются на РНКовые и ДНКовые. К РНКовым относятся вирус ящура, гриппа, бешенства. К ДНКовым относятся вирус оспы, болезни Ауески, африканской чумы свиней. И РНК, и ДНК выполняют функцию вирусного генома, структура НК у разных вирусов весьма разнообразная.
РНК
Молекула РНК вирусов состоит из тех же 4х нуклеотидов, что и у растений, животных и человека. Каждый нуклеотид состоит из 3х компонентов: АО, рибозы и остатков фосфорной кислоты. Соединение происходит с помощью фосфорнодиэфирных связей.
В результате соединения нуклеотидов образуются высокополимерные соединения, которые и будут являться молекулами РНК. Например, у вируса табачной мозаики 6000 нуклеотидов.
От количества нуклеотидов в молекуле будет зависеть молекулярная масса РНК. Она выражается в миллионах дальтон. У каждого вида вируса молекулярная масса является постоянной величиной. Например, у вируса гриппа = 4,8 – 5*106Д. У вируса ящура 2,6*106Д. Процентное соотношение АО в молекуле РНК также постоянно для каждого вида вируса и даже может характеризовать вид.
Процентное содержание РНК у разных вирусов колеблется в значительных пределах и составляет от 1 до 30% от массы вириона. Для каждого вида вируса эта величина постоянная. Чем мельче вирус, тем выше процент РНК и наоборот.
В функциональном отношении молекула РНК состоит из нескольких генов. Геном называют участок НК, ответственный за синтез какого-либо функционального или структурного белка. С каждым геном сцеплен какой-либо признак или свойство вируса. Количество генов у разных вирусов разное. Чем меньше молекула РНК, тем меньше количество генов. Чем сложнее устроен вирус, тем больше генов в молекуле РНК.
Ген состоит из триплетов. Триплет – самая мелкая функциональная единица НК, состоит из 3х рядом стоящих нуклеотидов. Каждый триплет кодирует какую-либо АК в молекуле белка.
Инфекционная активность молекулы РНК зависит от её структуры. Различают РНК одно- и двуспиральные. По форме: линейные, фрагментированные и кольцевые.
Вирусы с односпиральными РНК из-за различий в функциях генома подразделяются:
Плюснитиевые вирусы (вирусы с позитивным геномом). Они обладают функциями иРНК, матричной активностью.
Не обладающие функцией иРНК. Минуснитчатые, вирусы с негативным геномом. На -нити синтезируется комплементарная молекула при участии белка-фермента транскриптазы. Этот фермент находится в структуре минуснитиевых вирусов.
Между минус- и плюснитчатыми РНКовыми вирусами имеются структурные различия. У +нитевых вирусов на 5х концевых участках молекулы РНК имеется «шапочка» – 7метилгуанин. Она необходима для специфического узнавания РНК рибосомами. На 3х концевых участках – до 200 и более адениновых нуклеотидов (поли(А)). Поли(А) необходимы для стабилизации молекул РНК. -нитчатые вирусы не имеют ни шапочки, ни поли(А).
Двуцепочечная РНК, содержащая + и -нити. Такой геном был впервые обнаружен у реовирусов (диплорновирусов).
У каждого вида РНК своеобразно упакована. Например, у вируса гриппа – в виде шпильки, концы которой закручены сами на себя.
ДНК
Так же, как ДНК других живых существ, они состоят из 3х компонентов: дезоксирибоза, АО и остатки фосфорной кислоты. Зная последовательность АО первой цепочки, можно построить вторую цепочку. Тимин очень близок по структуре к урацилу, отличается только метильной группой. Структурное сходство тимина и урацила имеет большое значение в передаче информации с РНК на ДНК.
Из этих компонентов строятся полинуклеотиды (биополимеры). Чем сложнее устроен вирус, тем длиннее у него нить ДНК и больше молекулярная масса. Самый мелкий ДНК-содержащий вирус – парвовирус. Он имеет молекулярную массу 1,8*106Д. Поксвирус имеет молекулярную массу 160*106Д. У ДНКовых вирусов соотношение АО подчиняется правилу Чаргаффа, т.е. процентное содержание аденина = тимину, а гуанина – цитозину. А + Г = Ц + Т. Если известна сумма Г + Ц, то можно рассчитать содержание А и Т. У вируса болезни Ауески Г + Ц = 74%
У разных ДНК-вирусов А+Т = 35-74 %. ДНК большинства вирусов построены из 2х полинуклеотидных цепочек, спиралевидно закрученных одна вокруг другой и обе вокруг оси. Снаружи – остаток фосфорной кислоты и дезоксирибоза, внутри – АО, которые удерживаются между собой водородными связями. У ДНКовых вирусов имеется 4 типа генома.
Одноцепочечная линейная одной полярности (+ или – нить). Такой тип генома только у парвовирусов. + нить комплементарна –нити.
Двуцепочечная кольцевая или циркулярная ДНК – например, у папилломовирусов.
Двуцепочечная линейная молекула ДНК, обладающая инфекционностью. Такой тип генома у аденовирусов и у герпесвирусов.
Двуцепочечная линейная, не обладающая инфекционностью. У вируса гепатита В.
Вирусы с разными геномами по-разному репродуцируются.