59 Вирус болезни Марека.

Сем. Herpesviridae. ДНК-содержащий вирус, имеет кубический тип симметрии, 162 капсомера в белковой оболочке, размер 90-100нм.

Устойчивость: погибает при температуре 18-20⁰С, в отторгнутых эпителиях перьевых фолликулов вирус сохраняет вирулентные свойства в условиях внешней среды до 8мес.

Культивирование: в организме 1дневных цыплят, куриных эмбрионах. В культуре фибробластов и почечных клеток куриных и утиных эмбрионов с развитием ЦПД в виде очагов круглых клеток.

Антигенные свойства: варианты и типы вируса отсутствуют, но отдельные штаммы возбудителя отличаются по способности образовывать бляшки разной морфологии и величины, активности и репродукции в культуре клеток, а также по вирулентности. В организме птиц вызывает образование нейтрализующих и преципитирующих антител, высококонтагиозное заболевание.

Патогенез. Проникает – адсорбируется лейкоцитами крови, разносится по организму и локализуется в тканях лимфоидных органов. Его репродукция вызывает пролиферацию лимфоидных клеток с последующей инфильтрацией периферических нервов, мозга, глаз, мышц и внутренних органов. Вирус обнаруживают в пораженных органах.

Клиника: инкубационный период 3-4недели – несколько месяцев. Болезнь протекает классически и остро. Классическая форма: нервный синдром, иногда с поражением глаз, висцеральными и смешанными процессами. В результате поражения периферической н/с возникает хромота, отвисание крыльев и скручивание шеи. Острая: расстройство пищеварения, отказ от корма, атаксия, удушье. Эти признаки вызваны образование опухолей во внутренних органах.

Патологоанатомические: классическая – в яичниках и семенниках обнаруживают диффузные или очаговые утолщения нервных стволов, изменение их цвета. При острой форме находят плотные очаговые опухоли во внутренних органах. Легкие имеют сероватый цвет с диффузными опухолевыми очагами.

Наиболее восприимчивы куры 1-5мес возраста. Могут болеть индейки, утки, фазаны, куропатки. Источник: больные куры и вирусоносители. Передача: аэрогенная. Заболеваемость 40-85%, смертность 30-80%.

Патматериал: кровь, очины вырванных перьев, от трупов селезенка, печень, яичник, сердце, легкие, Фабрициева сумка, тимус и опухолевые образования.

• Экспресс-методы: РИФ, РГА, обнаружение телец-включений, гистологический метод

• Вирусологические – выделение вируса в культуре клеток почек куриных и утиных эмбрионов, на куриных эмбрионах, однодневных цыплятах. Идентификация: РИФ, РДП, РИД, ИФА с помощью моноклональных антител.

• Ретроспективная диагностика: РДП, ИФА.

Дифференциация: лимфоидный лейкоз, авитаминозы В,Е,Д, инфекционный энцефаломиелит, Ньюкаслская болезнь, грипп, листериоз, некоторые отравления. Срок исследования до 7 суток. Иммунитет после переболевания нестерильный.

Лечение не разработано

Профилактика: сухая культуральная вирусвакцина из штамма ФС-126 герпеса индеек. Внутримышечно однократно 1сут цыплятам. Продолжительность вакцинального иммунитета до 40 недель.

Работа с вирусами

60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.

Исследования на вирусные болезни проводятся в областных, краевых и республиканских ветеринарных лабораториях, а также в некоторых НИИ. В районных и межрайонных лабораториях вирусологических отделов нет, там могут проводиться исследования только на лейкоз КРС (серологическим методом).

В ветеринарной лаборатории имеется вирусологический отдел, гематологический отдел (где проводится исследование на лейкоз КРС, инфекционную анемию лошадей), серологический отдел (исследование на те же болезни).

Вирусологическая лаборатория работает по особому режиму в соответствии с имеющимися правилами работы. Она является лабораторией режимного типа, так как имеется целый ряд болезней, общих для человека и животных. В соответствии с инструкцией для вирусологического отдела должно быть выделено изолированное помещение (отдельный этаж, крыло, здание), состоящее из 5-6 комнат (не меньше).

1. Комната для микроскопических исследований

2. Комната для иммунологических методов исследования

3. Не менее 2х комнат-боксов. 1. «чистый» бокс – используется для работы с культурами клеток. 2. «грязный» бокс – для работы с вируссодержащим материалом. Воздух в боксе обязательно должен быть стерильным, обеспечивается с помощью бактерицидных ламп (типа БУВ). В настоящее время используют рециркуляторы, обеспечивающие обеззараживание воздуха в присутствии людей. Представляет собой бактерицидную лампу с рециркулятором. Кроме обычных боксов пользуются настольными боксами. Лучшие из них – ламинарные боксы.

4. Помещение для работы с литературой и для оформления документов.

5. Используются генетические методы исследования, в частности ПЦР. Для такой диагностики требуется не менее 3х отдельных комнат, одна из них должна находиться в отдельном здании.

6. Вскрывочная, моечная, автоклавная, виварий – общие с другими отделами.

Пол и стены в лаборатории покрывают влагонепроницаемым материалом (плиткой, линолиумом). Столы должны быть покрыты влагонепроницаемым материалом, например, пластиком, стеклом, жестью. В лаборатории должно быть хорошее освещение, водопровод, канализация.

Оборудование и аппаратура

1. В лаборатории имеются различные микроскопы. Широко используют люминесцентные микроскопы или осветители (для МФА). Желательно иметь электронный микроскоп.

2. Холодильное хозяйство: холодильники бытовые, низкотемпературные (на -20 - 70 градусов).

3. Термостат. При исследовании в материале не должно быть бактерий и грибов.

4. Центрифуги, имеющие разные скорости для очистки вирусов.

5. Для работы с куриными эмбрионами необходимы овоскоп – для просвечивания яиц, подставки для яиц, инструменты для заражения и вскрытия куриных эмбрионов. Необходим лабораторный инкубатор.

6. Для работы с культурами клеток необходимы питательные среды, солевые растворы, буферные растворы

7. Химическая посуда, флаконы, пробирки, колбы, воронки

8. Магнитная мешалка

9. Подставки для флаконов и пробирок.

10. Для работы с лабораторными животными нужны клетки, фиксирующие устройства, инструменты для заражения и вскрытия трупов павших лабораторных животных.

11. Для иммунологических методов исследования необходимы диагностические наборы, содержащие сыворотки и антигены.

12. Используют плексиглазовые пластинки с лунками. Полистероловые микропанели (плашки) для постановки ИФА

13. Для генетических методов исследования (ПЦР) используют амплификатор (термоциклер), тест-системы, аппарат для электрофареза. Учет проводят с помощью компьютера.

14. В любой лаборатории ведутся журналы учета выполняемой работы.

Правила работы с вирусами и техника безопасности.

3 основных правила работы с вирусами:

1. Соблюдать меры личной профилактики и безопасности.

2. Не рассеивать материал в окружающую среду.

3. Не загрязнять материал микроорганизмами извне.

Техника безопасности:

1. Работа в спецодежде (2 халата, сменная обувь или бахилы, марлевая повязка, колпак, при необходимости – резиновые перчатки)

2. Никогда не берут пипетки в рот. Пользуются либо грушами-сосалками, или одно- и многоканальными пипетками.

3. Не приносить продукты питания

4. Не приносить посторонние предметы

5. Весь отработанный материал стерилизуют или дезинфицируют. Трупы мелких лабораторных животных сжигают.

6. Предупреждать, если что-то разлилось / разбилось.