- •1 Роль ветеринарной вирусологии в подготовке ветеринарного врача. Основные причины преобладания вирусных болезней над инфекционными болезнями животных невирусной этиологии.
- •2 Состояние биологии и медицины конца XIX века. Открытие вирусов. Д.И. Ивановский – основоположник вирусологии.
- •3 Основные этапы в истории вирусологии и превращение вирусологии в одну из фундаментальных биологических наук.
- •4 Вклад отечественных ученых в развитие вирусологии.
- •5 Основные достижения, современное состояние и задачи медицинской и ветеринарной вирусологии.
- •6 Происхождение и природа вирусов.
- •7 Кардинальные свойства вирусов. Физическая структура вирусов.
- •8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
- •9 Характеристика вирусных белков.
- •10 Номенклатура вирусов.
- •19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
- •20 Синтез вирусных компонентов.
- •21 Основные типы (формы) взаимодействия вирусов с клеткой. Роль отдельных компонентов вирусной частицы.
- •27 Понятие о гене и геноме. Генотип и фенотип вирусов. Генетические признаки (маркеры) и их использование в характеристике штаммов.
- •28 Мутации и их механизмы. Практическое использование вирусных мутантов.
- •29 Генетические взаимодействия вирусов.
- •30 Негенетические взаимодействия вирусов.
- •11 Пикорнавирусы.
- •16 Реовирусы.
- •12 Тогавирусы и флавивирусы.
- •13 Коронавирусы.
- •14 Рабдовирусы.
- •15 Ретровирусы.
- •17 Парвовирусы.
- •18 Герпесвирусы и поксвирусы.
- •22 Виды культур клеток и их использование. Переживающие и плазменные культуры.
- •23 Первично-трипсинизированные культуры клеток и субкультуры, их использование.
- •24 Перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их использование.
- •25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
- •26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
- •31 Факторы неспецифической противовирусной защиты животных.
- •32 Противовирусные ингибиторы и их роль в противовирусном иммунитете. Ингибиторы
- •Механизм действия ингибиторов
- •33 Интерферон, его природа, свойства, механизм действия, получение и применение.
- •34 Иммунная система организма и её роль в специфическом противовирусном иммунитете.
- •35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
- •36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •38 Химические вакцины. Использование методов генной инженерии для получения противовирусных вакцин.
- •39 Препараты для специфической терапии вирусных болезней животных.
- •40 Препараты для неспецифической терапии вирусных болезней. Проблема химиотерапии вирусных болезней животных.
- •41 Вирус ящура. Краткая характеристика заболевания, история открытия и основные свойства вируса.
- •42 Методы лабораторной диагностики ящура. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •43 Вирус бешенства. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •44 Методы лабораторной диагностики бешенства. Биопрепараты для специфической профилактики.
- •45 Вирус болезни Ауески. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •46 Методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •47 Вирус оспы животных и птиц.
- •48 Вирус диареи крупного рогатого скота.
- •49 Вирус гриппа человека и животных.
- •50 Вирус чумы крупного рогатого скота.
- •51 Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
- •52 Вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота.
- •53 Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
- •54 Вирус классической чумы свиней.
- •55 Вирус африканской чумы свиней.
- •56 Вирус болезни Тешена.
- •57 Вирус болезни Ньюкасла.
- •58 Вирус гриппа (классической чумы) кур.
- •59 Вирус болезни Марека.
- •60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.
- •61 Правила отбора, консервирования и транспортировки вируссодержащего материала от больных животных и трупов.
- •62 Общие принципы и современные методы диагностики вирусных болезней.
- •63 Подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •64 Индикация вирусов в патологическом материале путем обнаружения вирионов и вирусных телец – включений.
- •65 Использование лабораторных животных в вирусологической практике.
- •66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.
- •67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.
- •68 Обнаружение вирусов в зараженных куриных эмбрионах.
- •69 Основные солевые, диспегрирующие растворы и питательные среды, необходимые для культивирования клеток, и их компоненты.
- •70 Методика получения первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •71 Индикация вирусов в зараженных культурах клеток.
- •72 Методика титрования вирусов по единичному эффекту.
- •73 Определение титра вируса. Методика расчета лд50 по Риду и Менчу.
- •74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
- •75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
- •76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
- •77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •81 Использование в вирусологии реакции гемагглютинации (рга).
- •82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.
- •83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
- •84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
- •85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
- •86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
- •87 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (днк-зонды), использование в вирусологии.
83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
В основе РНГА, как и любой серологической реакции, лежит взаимодействие антител с антигенами. Эту серологическую реакцию используют:
Для идентификации вируса (по заведомо известным антителам определяют вид вируса);
Для серологической (прижизненной) диагностики инфекционных болезней животных и для контроля за поствакцинальным иммунитетом(по заведомо известному антигену определяют наличие антител в испытуемой сыворотке);
Для этой реакции выпускают биофабричным путем 2 вида диагностических препаратов.
Антигенный эритроцитарный препарат – эритроциты, сенсибилизированные соответствующим вирусом;
Антительный эритроцитарный препарат – эритроциты, сенсибилированные антителами к предполагаемому вирусу.
С помощью антигенного эритроцитарного препарата можно определить наличие антител в испытуемой сыворотке. Если антитела есть – произойдет гемагглютинация (склеивание эритроцитов);
С помощью антительного эритроцитарного препарата можно определить вид вируса (испытуемый антиген). Если антитела и антиген гомологичны – произойдет гемагглютинация.
РНГА в исследовании на лейкоз птиц (кур)
У кур берут кровь (из гребешка) – 1-2 капли, наносят на предметное стекло. Можно сначала 2 раза заморозить и разморозить (тогда лучше из подкрыловой вены). В крови содержатся антигены, размораживают и замораживают – чтобы извлечь вирус из лейкоцитов. Добавляют антительный эритроцитарный препарат, если в крови есть вирус – произойдет гемагглютинация, если нет – хлопьев не будет.
2 вариант:
Берут испытуемую сыворотку из крови животного, готовят разведения (1:2, 4, 8 или 1:10, 100, 1000 (в зависимости от того, на что исследуют и какова концентрация антител)), к каждому разведению добавляют в равных объемах антигенный эритроцитарный препарат. Оставляют при комнатной температуре. При положительной реакции – гемагглютинация (осадок в виде раскрытого зонтика), это говорит о наличии антител в сыворотке крови. При отрицательной реакции – пуговки из осевших эритроцитов на дне лунок. Учет и контроль аналогично РГА.
В этой реакции можно определить титр антител – наибольшее разведение сыворотки, давшее 50% ГА(++)
РНГА нашла широкое применение в практике, так как она легко выполнимая, наглядная, может быть использована для диагностики любых вирусных инфекций, даже если вирус не гемагглютинирующий.
84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
Разновидности: Реакция иммунной диффузии – РИД; реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (РВИЭОФ) – ускоренный вариант РДП.
В основе РДП лежит взаимодействие антител с антигенами, которые, диффундируя в агаровом геле при встрече образуют преципитат (осадок) в виде линии / полосы преципитации. Впервые реакцию диффузионной преципитации разработал финский ученый Оухтерлони в 1948году. С 1953 года она стала применяться в вирусологической практике.
РДП может быть использована:
Для обнаружения вирусного антигена в исследуемом материале;
Для идентификации вирусов;
Для серологической прижизненной диагностики вирусных болезней животных (по заведомо известному антигену выявляют антитела в исследуемой сыворотке крови, а по антителам косвенно судят, инфицировано животное или нет).
Компоненты РДП
Испытуемый вируссодержащий материал или заведомо известный стандартный вирус (диагностикум). Заведомо известная иммунная сыворотка к предполагаемому вирусу или испытуемая сыворотка, взятая у животного. Агаровый гель.
Приготовление агарового геля
Берут 2-2,5 г агар-агара на 100 мл дистиллированной воды. Температура плавлении агара 100 градусов. Затвердевает при 40 градусах. Нагревают до расплавления агара, разливают в кювету слоем 1-1,5 см, после затвердевания разрезают на отдельные кубики и заливают дистиллированной водой. Воду меняют несколько раз и выдерживают 2-3 дня. Добиваются, чтобы вода была прозрачной. После этого к агарному гелю добавляют равный объем раствора NaCl в концентрации 1,7%. Добавляют 0,5% хлористого кальция для просветления агарового геля. Добавляют тиомерсал (мертиолат). Тиомерсал обладает противомикробным действием. 1 кубик 1% раствора тиомерсала на 100 кубиков агарового геля. Иногда добавляют метилоранж в концентрации 1:100000. Полученный агаровый гель разливают по флаконам и закупоривают. Перед постановкой реакции агаровый гель плавят и разливают в чашки Петри или на предметные стекла, если исследуют единичные пробы.
Методика постановки РДП
Схемы постановки реакции могут быть разными в зависимости от цели исследования.
В агаровом геле с помощью пробойника вырезают лунки. Лунки располагают симметрично. Затем с помощью пастеровской пипетки разливают в лунки необходимые компоненты по 1-2 капли в каждую лунку.
Обнаружение вируса в исследуемом материале.
РДП нашла широкое применение в практике для диагностики бешенства, лейкоза, ИНАН, аденовирусной инфекции. Это экспрессный, легко выполнимый метод, реакция наглядная, но требуется мало компонентов. 1 недостаток: в большинстве случаев она малочувствительная. И требуется высокая концентрация антител и антигенов для её прохождения.