- •1 Роль ветеринарной вирусологии в подготовке ветеринарного врача. Основные причины преобладания вирусных болезней над инфекционными болезнями животных невирусной этиологии.
- •2 Состояние биологии и медицины конца XIX века. Открытие вирусов. Д.И. Ивановский – основоположник вирусологии.
- •3 Основные этапы в истории вирусологии и превращение вирусологии в одну из фундаментальных биологических наук.
- •4 Вклад отечественных ученых в развитие вирусологии.
- •5 Основные достижения, современное состояние и задачи медицинской и ветеринарной вирусологии.
- •6 Происхождение и природа вирусов.
- •7 Кардинальные свойства вирусов. Физическая структура вирусов.
- •8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
- •9 Характеристика вирусных белков.
- •10 Номенклатура вирусов.
- •19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
- •20 Синтез вирусных компонентов.
- •21 Основные типы (формы) взаимодействия вирусов с клеткой. Роль отдельных компонентов вирусной частицы.
- •27 Понятие о гене и геноме. Генотип и фенотип вирусов. Генетические признаки (маркеры) и их использование в характеристике штаммов.
- •28 Мутации и их механизмы. Практическое использование вирусных мутантов.
- •29 Генетические взаимодействия вирусов.
- •30 Негенетические взаимодействия вирусов.
- •11 Пикорнавирусы.
- •16 Реовирусы.
- •12 Тогавирусы и флавивирусы.
- •13 Коронавирусы.
- •14 Рабдовирусы.
- •15 Ретровирусы.
- •17 Парвовирусы.
- •18 Герпесвирусы и поксвирусы.
- •22 Виды культур клеток и их использование. Переживающие и плазменные культуры.
- •23 Первично-трипсинизированные культуры клеток и субкультуры, их использование.
- •24 Перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их использование.
- •25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
- •26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
- •31 Факторы неспецифической противовирусной защиты животных.
- •32 Противовирусные ингибиторы и их роль в противовирусном иммунитете. Ингибиторы
- •Механизм действия ингибиторов
- •33 Интерферон, его природа, свойства, механизм действия, получение и применение.
- •34 Иммунная система организма и её роль в специфическом противовирусном иммунитете.
- •35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
- •36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •38 Химические вакцины. Использование методов генной инженерии для получения противовирусных вакцин.
- •39 Препараты для специфической терапии вирусных болезней животных.
- •40 Препараты для неспецифической терапии вирусных болезней. Проблема химиотерапии вирусных болезней животных.
- •41 Вирус ящура. Краткая характеристика заболевания, история открытия и основные свойства вируса.
- •42 Методы лабораторной диагностики ящура. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •43 Вирус бешенства. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •44 Методы лабораторной диагностики бешенства. Биопрепараты для специфической профилактики.
- •45 Вирус болезни Ауески. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •46 Методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •47 Вирус оспы животных и птиц.
- •48 Вирус диареи крупного рогатого скота.
- •49 Вирус гриппа человека и животных.
- •50 Вирус чумы крупного рогатого скота.
- •51 Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
- •52 Вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота.
- •53 Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
- •54 Вирус классической чумы свиней.
- •55 Вирус африканской чумы свиней.
- •56 Вирус болезни Тешена.
- •57 Вирус болезни Ньюкасла.
- •58 Вирус гриппа (классической чумы) кур.
- •59 Вирус болезни Марека.
- •60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.
- •61 Правила отбора, консервирования и транспортировки вируссодержащего материала от больных животных и трупов.
- •62 Общие принципы и современные методы диагностики вирусных болезней.
- •63 Подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •64 Индикация вирусов в патологическом материале путем обнаружения вирионов и вирусных телец – включений.
- •65 Использование лабораторных животных в вирусологической практике.
- •66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.
- •67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.
- •68 Обнаружение вирусов в зараженных куриных эмбрионах.
- •69 Основные солевые, диспегрирующие растворы и питательные среды, необходимые для культивирования клеток, и их компоненты.
- •70 Методика получения первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •71 Индикация вирусов в зараженных культурах клеток.
- •72 Методика титрования вирусов по единичному эффекту.
- •73 Определение титра вируса. Методика расчета лд50 по Риду и Менчу.
- •74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
- •75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
- •76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
- •77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •81 Использование в вирусологии реакции гемагглютинации (рга).
- •82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.
- •83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
- •84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
- •85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
- •86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
- •87 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (днк-зонды), использование в вирусологии.
85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
Реакция иммуноэлектроосмофореза (РИЭОФ), ее сущность и механизм заключается в том, что под действием электрического поля антиген, помещенный в лунке в агаровом геле, перемещается к положительному полюсу, а антитело к отрицательному, т.е. навстречу друг другу, и по месту их встречи и соприкосновения образуется хорошо видимая между лунками со специфическими компонентами серо-белая полоса (линия) преципитации. Следовательно, здесь в отличие от РДП миграция антигена и антител в агаровом геле происходит навстречу друг другу под действием электрического поля.
86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
Наиболее широкое распространение во всем мире получил метод ПЦР. Она была предложена в 1986 году американским биохимиком Мюллисом. Мюллис стал лауреатом государственной премии.
Для вирусологической диагностики этот метод стал одним из главных. ПЦР позволяет выявить в исследуемом патматериале наличие специфического участка ДНК или РНК, характерного для исследуемого организма и многократно разможить его – амплифицировать. Амплификация – изолированное размножение гена или его фрагментов.
Метод ПЦР основан на принципе естественной репликации нуклеиновой кислоты, включающем расплетение двойной спирали, расхождение нитей, комплементарное достраивание обеих нитей. Механизм репликации таков, что комплементарное достраивание нитей может начаться не в любой точке последовательности ДНК, а только в определенных стартовых блоках, коротких двунитчатых участках. Маркировав такими блоками специфический участок ДНК добиваются протекания синтеза только в этом участке, а не по всей длине нити ДНК (РНК). В результате происходит увеличение количества копий специфического фрагмента по формуле 2n, где n – число циклов аплификации. Для создания стартовых блоков в заданных участках ДНК (РНК) используют две олигонуклеотидные генетические затравки, которые иначе называются праймерами. Праймеры – искусственно синтезируемые одноцепочечные дезоксиолигонуклеотиды, состоящие из 20-30 АО. Они представляют собой концевые последовательности интересующего фрагмента ДНК. При температуре 72 градуса протекает синтез полинуклеотидных цепей путем удлинения праймиеров с помощью дезоксирибонуклеотидтрифосфатов в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Праймеры или ампликоны накапливаются в геометрической прогрессии и очень скоро начинают доминировать (преобладать) среди продуктов амплификации. В каждом цикле происходит удвоение числа копий амплифицированного участка. Процесс является цепным, так как синтезированные фрагменты ДНК в дальнейшем сами служат матрицей, на которой идет синтез. Праймеры комплементарны последовательностям ДНК на левой и правой границе специфического фрагмента. Они ориентированы таким образом, что синтез протекает между ними, удваивая количество копий этого фрагмента, пофторяет стадии амплификации примерно 30-40 раз. За 1,5-3 часа получают миллионы копий специфического участка ДНК или РНК вируса для обнаружения её с помощью электрофареза.
Этапы:
Выделение ДНК. Готовят суспензию, обрабатывают, очищают.
Собственно амплификация. При этом изменяют температурный режим, и процесс идет стадийно
Плавление ДНК – 92 градуса – расплетение нитей
Отжиг праймеров
Достройка комплементарных цепей
Детекция. Учет результатов. Получение окончательного результата проводят с помощью электрофареза, результаты – на мониторе компьютера. Всегда сравнивают полученный результат сравнивают с контрольными положительными и отрицательными контрольными образцами. Выявляют продукт амплификации с помощью ДНК-зондов.
В настоящее время разработаны отечественные тест-системы для диагностики методом ПЦР таких заболеваний, как лейкоз, чума КРС. Бешенство, ящур. Классическая чума свиней, африканская чума свиней, трансмиссивный гастроэнтерит, везикулярная болезнь свиней, парвавирусная инфекция свиней, ССЯ, болезнь Марека, инфекционный бронхит кур, Нью-касслская болезнь, ринотрахеит кошек и др.
Преимущества: высокая чувствительность, достаточно 10 вирусных частиц; высокая специфичность; быстрота получения результата
Разработан метод ПЦР в реальном времени. Регистриты можно регистрировать в любой момент времени при прохождении этой реакции. Для выявления продуктов амплификации используют флюоресцентные ДНК-зонды. К зонду присоединены 2 химических соединения – флюоресцентная метка и гаситель флюоресценции. В ходе ПЦР происходит разъединение флюоресцентной метки и гасителя. Это приводит к появлению свечения. Регистрируя интенсивность свечения можно узнать о ходе реакции.