66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.

В основном используют куриные эмбрионы, реже – утиные, т.к. могут быть заражены сальмонеллами, также используют перепелиные.

Для заражения используют эмбрионы в возрасте 6-7 – 10 дней.

Куриные эмбрионы берут на птицефабрике или инкубаторной станции, или же получают эмбрионы из инкубационного яйца в условиях лаборатории.

Требования к инкубационному яйцу:

1. Яйцо берут от здоровой птицы

2. Стандартные по размеру

3. Свежеснесенное (не более 6-7 дней)

4. Целое, без трещин

5. Чистая скорлупа

6. Оплодотворенное

7. От кур белых пород

Перед заражением яйца просвечивают (овоскопируют), простым карандашом отмечают место предлежания зародыша и воздушную камеру – пугу. Иногда отмечают треугольником бессосудистый участок. Удаляют бракованные яйца.

Виды брака:

1. Кровь-кольцо. По периметру яйца – кровяное кольцо, связано с гибелью эмбриона на ранних этапах развития.

2. Гибель эмбриона на поздних этапах развития – кровеносные сосуды запавшие, зародыш не двигается.

3. Тумак – совсем не просвечивается яйцо, связано с бактериальным загрязнением.

4. Пятна или пятнышки – тоже связано с бактериальным загрязнением

5. Неоплодотворенное яйцо

Строение куриного эмбриона

Снаружи – известковая скорлупа, пронизанная порами диаметром до 40 мкм. В порах – слизистые пробки, поэтому не проникают микроорганизмы. Под скорлупой находится белочная оболочка, которая выстилает пугу – воздушную камеру. Под ней – хориоаллантоисная оболочка (ХАО), пронизанная кровеносными сосудами. Это орган дыхания зародыша. ХАО выстилает аллантоисную полость, в которой содержится аллантоисная жидкость, в которой накапливаются продукты жизнедеятельности зародыша. Затем идет амниотическая полость – амнион – наполненная амниотической жидкостью. В ней плавает зародыш, как в личном пруду. В ней содержатся факторы естественной резистентности зародыша. Желточный мешок, наполненный желтком, - источник питания зародыша.

В курином эмбрионе имеются 6 субстратов, на которых могут развиваться вирусы:

1. ХАО

2. Аллантоисная полость

3. Желточный мешок

4. Амниотическая полость

5. Сам зародыш

6. Кровеносный сосуд ХАО

Поэтому куриные эмбрионы можно заражать 6ю способами, но практическое применение нашли -4, не больше.

Условия, при которых проводят заражение

1. Работу выполняют в условиях стерильного бокса;

2. Работают в спецодежде, соблюдают меры личной безопасности;

3. Работа у пламени спиртовки, работу выполняют с соблюдением правил асептики и пользуются стерильными инструментами;

4. Руки обрабатывают спиртовым тампоном;

5. Поверхность скорлупы в области пуги обрабатывают спиртовым тампоном, йодированным спиртом и фламбируют.

Выбор метода заражения зависит от тканевого тропизма предполагаемого вируса.

67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.

Самая удобная биологическая модель, но подходит не для всех вирусов

• Для выделения и накопления вируса

• Для идентификации вируса в реакции нейтрализации

• Для сохранения музейных штаммов вируса

• Для титрования вируса

• Для получения вирусных антигенов и противовирусных вакцин (авионизированные – полученные на куриных эмбрионах).

Методы заражения куриных эмбрионов

1. Заражение в аллантоисную полость. Иглу вводят через отверстие в пуге в сторону, противоположную предлежанию зародыша на глубину 10-12 мм.

2. Заражение в желточный мешок. Располагают зародыш горизонтально, иглу вводят через отверстие в центе пуги на глубину 30-35 мм.

3. Заражение на ХАО. Делают 2 отверстия: в центе пуги и в области бессосудистого участка. Из пуги отсасывают грушей воздух, в области бессосудистого участка образуется искусственная пуга. Отверстие расширяют, надрывают пинцетом белочную оболочку, на ХАО наносят ВСМ. Окно заклеивают лейкопластырем.

Доза заражения – 0,2 кубика при всех методах.

Условия, при которых проводят заражение

6. Работу выполняют в условиях стерильного бокса;

7. Работают в спецодежде, соблюдают меры личной безопасности;

8. Работа у пламени спиртовки, работу выполняют с соблюдением правил асептики и пользуются стерильными инструментами;

9. Руки обрабатывают спиртовым тампоном;

10. Поверхность скорлупы в области пуги обрабатывают спиртовым тампоном, йодированным спиртом и фламбируют.

Выбор метода заражения зависит от тканевого тропизма предполагаемого вируса.