37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.

Принцип получения

Штаммы, предназначенные для изготовления инактивированных вакцин, представляют собой культуру типичного представителя данного вида вируса, по биологическим свойствам они идентичны циркулирующим в природе эпизооти­ческим штаммам. Изготовление инактивированных вакцин начинается с культивирования и накопления производственного штамма вируса в чувствительной биологической системе. Затем ВСМ гомогенизируют, центрифугируют, фрагменты кле­точных структур, как правило, удаляют. Из обработанного материала вирус концентрируют ультрацентрифугированием, сорбцией на геле гидрата окиси алюминия или осаждением при помощи химических веществ, после чего вирус инактивируют. Инактивация должна быть не только эффективной, но и максимально щадящей. Иными словами, сопутствующие изменения в структуре вирусных частиц и их компонентов должны быть минимальными. Выбор инактиватора проводят с таким расчетом, чтобы повредить геном (нуклеиновую кислоту), не повреждая антигенов, входящих в состав капсида и суперкапсидной оболочки. При изготовлении цельновирионных нереплицирующихся вакцин для инактивации вирусов используют химические факторы (изменение рН, формалин, и др.) или физические факторы (температура до 60°С, ионизирующие излучения, действие дневного света в присутствии красящих веществ, УФ лучи, ультразвук). Одним из способов повышения безопасности инактивированных вакцин на случай неполной инактивации вируса является использование аттенуированных штаммов. Для повышения иммуногенной активности в состав инактивированной вакцины вводят стимуляторы иммуногенеза — адъюванты (гидроокись алюминия, аэросил, сапонин, минеральные масла и реже другие препараты). На заключительном этапе с целью ликвидации возможной контаминации в вакцину вводят консервант (фенол, глицерин, антибиотики), после чего фасуют и подвергают контролю.

При изготовлении инактивированных вакцин основной проблемой является получение большого количества безопасного вирусного антигена. В инактивированной вакцине вирус может быть обезврежен не полностью, а её производство таит в себе опасность попадания возбудителя во внешнюю среду.

Кроме вирусных частиц и продуктов вирусоспецифического синтеза с инактивированной вакциной в организм поступает масса иммунологически активных балластных клеточных белков и чужеродных нуклеиновых кислот, что крайне нежелательно. Несмотря на большие успехи в создании инактивированных вакцин, многие из них пока не обеспечивают такой напряжённой и длительной защиты животных от вирусных заболеваний, как живые вакцины. Между тем против некоторых вирусных болезней созданы достаточно эффективные инактивированные вакцины, являющиеся на сегодня единственно приемлемыми препаратами для специфической профилактики.

Контроль инактивированных вакцин

Для контроля на стерильность инактивированных вакцин из отобранных флаконов производят посевы на питательные среды (МПА, МПБ с глюкозой, бульон и агар Мартена, МПГГБ под вазелиновым маслом, бульон и агар Сабуро или Чапека). Посевы выдерживают их при 36—37°С до 15 дней. При отсутствии роста через 5—6 дней делают пересевы на ана­логичные среды, их выдерживают до 10 дней. Роста микробов не должно быть.

Контроль на полноту инактивации вируса осуществляют путем проведения трех слепых пассажей: на чувствительной биологической системе, при этом репродукции вируса быть не должно.

Безвредность вакцин определяют на основании данных о выживании, отсутствию клинических признаков болезни и гибели, привитых вакциной животных, при этом лабораторным животным вводят максимально переносимые дозы, а сельскохозяйственным — в 2—10 раз превышающие рекомендуемые для практического применения. Привитые животные должны оставаться здоровыми при наблюдении за ними не менее 10 дней.

Для выявления неспецифической токсичности, обусловленной наличием в вакцинах стабилизаторов, сорбентов и консервантов, используют химические методы исследования, например, на содержание свободного формальдегида.

Контроль на иммуногенность проводят на восприимчивых лабораторных или сельскохозяйственных животных путем заражения вакцинированных животных вирулентным штаммом в дозе от 5 до 200 полулетальных или инфицирующих доз при одновременном заражении равного количества равноценных невакцинированных животных. Между вакцинацией и заражением должен быть срок, достаточный для формирования иммунитета. Он зависит от вакцины — от двух суток до двух недель. Вакцину считают иммуногенной при отсутствии клинических признаков и гибели не менее чем у 80% вакцинированных при заболевании или гибели не менее 80% контрольных животных. Допускается заболевание 30% вакцинированных при 100% гибели контрольных животных. Реже об иммуногенности вакцины судят по титрам специфических антител в сыворотке крови привитых животных выявляемым с помощью серологических реакций.

Преимущества, недостатки

Инактивированные вакцины отличаются большей стабильностью свойств, они безопаснее, их можно применять в поливалентных вариантах, однако технология изготовления их гораздо сложнее, что связано с необходимостью получения большего количества вируссодержащего материала, очистки и концентрации антигена, инактивации вирусного генома, ликвидации контаминирующих агентов и включения в состав вакцины адъювантов. Инактивированные вакцины применяются только парентерально, в больших дозах, как правило, неоднократно, иммунитет формируется обычно через 10—14 дней, он менее напряженный, непродолжительный. Такие вакци­ны используют преимущественно с профилактической целью в благополучных хозяйствах и угрожаемых зонах. Известно, что каждый вирус представляет собой смесь нескольких вирусоспецифических белков - антигенов. Формалин может разрушать некоторые из них. Возможна иммунная реакция с иммунопатологическими последствиями, что иногда приводит к усилению симптомов болезни. Кроме того, инактивированные вакцины слабее стимулируют Т-систему иммунитета и местный иммунный ответ, поэтому резистентность слизистых оболочек верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта бывает менее выраженной, чем после применения живых вакцин или после естественного переболевания. К отрицательным качествам инактивированных вакцин относится и их способность вызывать аллергическое состояние после повторной прививки. Это бывает связано с присутствием в инактивированных вакцинах антибиотиков, сапонина, формальдегида, тиомерсала и некоторых других компонентов.