- •1 Роль ветеринарной вирусологии в подготовке ветеринарного врача. Основные причины преобладания вирусных болезней над инфекционными болезнями животных невирусной этиологии.
- •2 Состояние биологии и медицины конца XIX века. Открытие вирусов. Д.И. Ивановский – основоположник вирусологии.
- •3 Основные этапы в истории вирусологии и превращение вирусологии в одну из фундаментальных биологических наук.
- •4 Вклад отечественных ученых в развитие вирусологии.
- •5 Основные достижения, современное состояние и задачи медицинской и ветеринарной вирусологии.
- •6 Происхождение и природа вирусов.
- •7 Кардинальные свойства вирусов. Физическая структура вирусов.
- •8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
- •9 Характеристика вирусных белков.
- •10 Номенклатура вирусов.
- •19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
- •20 Синтез вирусных компонентов.
- •21 Основные типы (формы) взаимодействия вирусов с клеткой. Роль отдельных компонентов вирусной частицы.
- •27 Понятие о гене и геноме. Генотип и фенотип вирусов. Генетические признаки (маркеры) и их использование в характеристике штаммов.
- •28 Мутации и их механизмы. Практическое использование вирусных мутантов.
- •29 Генетические взаимодействия вирусов.
- •30 Негенетические взаимодействия вирусов.
- •11 Пикорнавирусы.
- •16 Реовирусы.
- •12 Тогавирусы и флавивирусы.
- •13 Коронавирусы.
- •14 Рабдовирусы.
- •15 Ретровирусы.
- •17 Парвовирусы.
- •18 Герпесвирусы и поксвирусы.
- •22 Виды культур клеток и их использование. Переживающие и плазменные культуры.
- •23 Первично-трипсинизированные культуры клеток и субкультуры, их использование.
- •24 Перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их использование.
- •25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
- •26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
- •31 Факторы неспецифической противовирусной защиты животных.
- •32 Противовирусные ингибиторы и их роль в противовирусном иммунитете. Ингибиторы
- •Механизм действия ингибиторов
- •33 Интерферон, его природа, свойства, механизм действия, получение и применение.
- •34 Иммунная система организма и её роль в специфическом противовирусном иммунитете.
- •35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
- •36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •38 Химические вакцины. Использование методов генной инженерии для получения противовирусных вакцин.
- •39 Препараты для специфической терапии вирусных болезней животных.
- •40 Препараты для неспецифической терапии вирусных болезней. Проблема химиотерапии вирусных болезней животных.
- •41 Вирус ящура. Краткая характеристика заболевания, история открытия и основные свойства вируса.
- •42 Методы лабораторной диагностики ящура. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •43 Вирус бешенства. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •44 Методы лабораторной диагностики бешенства. Биопрепараты для специфической профилактики.
- •45 Вирус болезни Ауески. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •46 Методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •47 Вирус оспы животных и птиц.
- •48 Вирус диареи крупного рогатого скота.
- •49 Вирус гриппа человека и животных.
- •50 Вирус чумы крупного рогатого скота.
- •51 Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
- •52 Вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота.
- •53 Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
- •54 Вирус классической чумы свиней.
- •55 Вирус африканской чумы свиней.
- •56 Вирус болезни Тешена.
- •57 Вирус болезни Ньюкасла.
- •58 Вирус гриппа (классической чумы) кур.
- •59 Вирус болезни Марека.
- •60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.
- •61 Правила отбора, консервирования и транспортировки вируссодержащего материала от больных животных и трупов.
- •62 Общие принципы и современные методы диагностики вирусных болезней.
- •63 Подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •64 Индикация вирусов в патологическом материале путем обнаружения вирионов и вирусных телец – включений.
- •65 Использование лабораторных животных в вирусологической практике.
- •66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.
- •67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.
- •68 Обнаружение вирусов в зараженных куриных эмбрионах.
- •69 Основные солевые, диспегрирующие растворы и питательные среды, необходимые для культивирования клеток, и их компоненты.
- •70 Методика получения первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •71 Индикация вирусов в зараженных культурах клеток.
- •72 Методика титрования вирусов по единичному эффекту.
- •73 Определение титра вируса. Методика расчета лд50 по Риду и Менчу.
- •74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
- •75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
- •76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
- •77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •81 Использование в вирусологии реакции гемагглютинации (рга).
- •82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.
- •83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
- •84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
- •85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
- •86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
- •87 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (днк-зонды), использование в вирусологии.
19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
Процесс репродукции вируса можно разделить на 3 периода
Подготовительный
Адсорбция. В результате случайной встречи по типу броуновского движения в одном из 1000 случаев встреча заканчивается адсорбцией. Это приводит к закреплению вируса на поверхности чувствительной клетки. В основе адсорбции лежат 2 механизма:
Неспецифический, при этом большая роль принадлежит ионным связям. Рецепторы вируса и клетки имеют разноименные заряды, поэтому происходит их взаимодействие;
Специфический, необходимым условием при этом является химическое сродство рецепторов вируса и клетки. Дополнительным является конфигурация вирусных частиц и клетки.
Процесс адсорбции вируса на клетке является сложным специфическим химическим процессом. Специфичность связана с природой рецепторов. Рецепторы вируса – прикрепительные белки. Например, ортомиксовирусы и парамиксовирусы адсорбируются на мукополисахаридах, а рабдовирусы – на липополисахаридных рецепторах. С наличием или отсутствием рецепторов связана чувствительность к вирусу клеток и организма в целом, тканевый тропизм вирусов. На адсорбцию вирусов на клетке влияет температура. Этот процесс лучше происходит при температуре 37С. Вирус может адсорбироваться и при более низких температурах, но процесс адсорбции происходит медленно. Также на адсорбцию влияет pH среды, присутствие электролитов. В нейтральной или щелочной среде процесс адсорбции идет лучше. Вирусы адсорбируются на клетках в течение от 15 минут до 2 часов. В результате адсорбции вирус прикрепляется к чувствительной клетке, и дальше происходит проникновение вируса в клетку.
Проникновение вируса в клетку. Вирусы проникают в клетку по-разному. Существует два основных способа.
Путем рецепторного эндоцитоза. Происходит в специализированных участках цитоплазматической мембраны. Там находятся специальные рецепторы, происходит инвагинация и образование внутриклеточных вакуолей. Их может формироваться до 2000 за одну минуту. Вакуоли сливаются с цитоплазматическими вакуолями. Те, в свою очередь, сливаются с лизосомами, и благодаря эндоцитозу обеспечивается внутриклеточный транспорт вирусной частицы (большинство вирусов)
Путем слияния (сплавления). Наблюдается у сложных вирусов. Вирусы имеют в суперкапсиде фермент нейраминидазу, он расщепляет нейраминовую (сиаловую) кислоту, входящую в состав клеточной стенки. В результате ферментативного действия часть клеточной стенки и суперкапсидной оболочки разрушается. В образовавшееся отверстие вплавляется нуклеокапсид, а затем отверстие закрывается остатком неразрушенной суперкапсидной оболочки.
Раздевание вируса в клетке (депротеинизация вируса). Ферменты клетки разрушают суперкапсид и капсид, и освобождается нуклеиновая кислота вируса.
Средний (латентный) – происходит синтез вирусных компонентов, НК и белка.
Транскрипция – переписывание информации с ДНК на РНК по законам генетического кода с помощью РНК-полимеразы.
Трансляция иРНК.
Репликация вирусных НК. Механизм репликации вирусных РНК и ДНК различен в зависимости от генома вируса. Субстратами для синтеза вирусных РНК и ДНК являются клеточные трифосфаты (АТФ, УТФ и т.д.) и углеводы (рибоза, дезоксирибоза). Разнообразие механизмов репликации связано с различными типами генома у вирусов.
Синтез вирусных белков. АК состав вирусных белков не отличается в качественном отношении от АК состава клеточных белков. Те и другие построены из 20 АК. Синтез вирусных белков подчиняется всем закономерностям, которые присущи синтезу белков клетки, в его основе лежит тот же механизм. Белки синтезируются из АК клетки.
У ДНКовых вирусов начинается процесс с транскрипции, т.е. переписывания кода синтеза на матрицы ДНК. По принципу комплементарности образуются поздние иРНК. В их синтезе участвует ДНК-зависимая РНК-полимераза. Далее идет процесс трансляции, т.е. перевод генетической информации, содержащейся в иРНК на специфическую последовательность АК в синтезируемых вирусоспецифических белках. Считывание информации и синтез белка осуществляется с помощью транспортных РНК, которые в соответствии с кодом, т.е. чередованием пуриновых и пиримидиновых оснований в молекуле иРНК подбирают определенные АК на рибосомах, из которых формируется пептидная цепочка, которая уже является структурным белком. Из него формируются капсомеры и капсид. Таким образом, белки вирусов строятся из 20ти клеточных АК, а отличаются от клеточных белков количеством АК и порядком их чередования. Как только в клетке накапливается определенное количество вирусной НК и вирусного белка, начинается процесс формирования вирионов.
Формирование вирионов. Если вирус устроен не сложно, идет процесс самосборки по принципу усложнения структуры. У некоторых вирусов, чтобы образовался капсомер, необходимо 2-3-4 глобулы. Капсомеры вступают во взаимодействие с НК: с 3мя нуклеотидами связывается 1 капсомер. Если у вирусов спиральный тип симметрии, то капсомеры взаимодействуют по всей спирали. Суперкапсидная оболочка сложно устроенных вирусов приобретается при выходе вируса из клетки и включает в себя клеточные компоненты. Место синтеза вирусных компонентов и репродукция у разных вирусов может происходить в разных местах клетки. Т.о. происходит формирование вириона. В каждой клетке количество вирусных частиц может быть разным. Чем мельче вирус, тем больше образуется вирионов. Так формируются полноценные вирусы.
Заключительный период репродукции вирусов включает стадию выхода вируса из клетки.