- •1 Роль ветеринарной вирусологии в подготовке ветеринарного врача. Основные причины преобладания вирусных болезней над инфекционными болезнями животных невирусной этиологии.
- •2 Состояние биологии и медицины конца XIX века. Открытие вирусов. Д.И. Ивановский – основоположник вирусологии.
- •3 Основные этапы в истории вирусологии и превращение вирусологии в одну из фундаментальных биологических наук.
- •4 Вклад отечественных ученых в развитие вирусологии.
- •5 Основные достижения, современное состояние и задачи медицинской и ветеринарной вирусологии.
- •6 Происхождение и природа вирусов.
- •7 Кардинальные свойства вирусов. Физическая структура вирусов.
- •8 Характеристика вирусных нуклеиновых кислот.
- •9 Характеристика вирусных белков.
- •10 Номенклатура вирусов.
- •19 Репродукция вирусов. Схема основных процессов, обеспечивающих реализацию генетической информации.
- •20 Синтез вирусных компонентов.
- •21 Основные типы (формы) взаимодействия вирусов с клеткой. Роль отдельных компонентов вирусной частицы.
- •27 Понятие о гене и геноме. Генотип и фенотип вирусов. Генетические признаки (маркеры) и их использование в характеристике штаммов.
- •28 Мутации и их механизмы. Практическое использование вирусных мутантов.
- •29 Генетические взаимодействия вирусов.
- •30 Негенетические взаимодействия вирусов.
- •11 Пикорнавирусы.
- •16 Реовирусы.
- •12 Тогавирусы и флавивирусы.
- •13 Коронавирусы.
- •14 Рабдовирусы.
- •15 Ретровирусы.
- •17 Парвовирусы.
- •18 Герпесвирусы и поксвирусы.
- •22 Виды культур клеток и их использование. Переживающие и плазменные культуры.
- •23 Первично-трипсинизированные культуры клеток и субкультуры, их использование.
- •24 Перевиваемые и диплоидные культуры клеток, их использование.
- •25 Роллерные и суспензионные культуры клеток, их использование.
- •26 Контаминанты клеточных культур и куриных эмбрионов, методы деконтаминации. Пути создания чистых биологических систем.
- •31 Факторы неспецифической противовирусной защиты животных.
- •32 Противовирусные ингибиторы и их роль в противовирусном иммунитете. Ингибиторы
- •Механизм действия ингибиторов
- •33 Интерферон, его природа, свойства, механизм действия, получение и применение.
- •34 Иммунная система организма и её роль в специфическом противовирусном иммунитете.
- •35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.
- •36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •37 Инактивированные противовирусные вакцины. Принципы получения и контроль инактивированных вакцин. Основные достоинства и недостатки.
- •38 Химические вакцины. Использование методов генной инженерии для получения противовирусных вакцин.
- •39 Препараты для специфической терапии вирусных болезней животных.
- •40 Препараты для неспецифической терапии вирусных болезней. Проблема химиотерапии вирусных болезней животных.
- •41 Вирус ящура. Краткая характеристика заболевания, история открытия и основные свойства вируса.
- •42 Методы лабораторной диагностики ящура. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •43 Вирус бешенства. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •44 Методы лабораторной диагностики бешенства. Биопрепараты для специфической профилактики.
- •45 Вирус болезни Ауески. Краткая характеристика заболевания и основные свойства вируса.
- •46 Методы лабораторной диагностики болезни Ауески. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии.
- •47 Вирус оспы животных и птиц.
- •48 Вирус диареи крупного рогатого скота.
- •49 Вирус гриппа человека и животных.
- •50 Вирус чумы крупного рогатого скота.
- •51 Вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
- •52 Вирус парагриппа-3 крупного рогатого скота.
- •53 Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота.
- •54 Вирус классической чумы свиней.
- •55 Вирус африканской чумы свиней.
- •56 Вирус болезни Тешена.
- •57 Вирус болезни Ньюкасла.
- •58 Вирус гриппа (классической чумы) кур.
- •59 Вирус болезни Марека.
- •60 Правила работы с вируссодержащими материалами. Техника безопасности. Оборудование и аппаратура, необходимые для проведения вирусологических исследований.
- •61 Правила отбора, консервирования и транспортировки вируссодержащего материала от больных животных и трупов.
- •62 Общие принципы и современные методы диагностики вирусных болезней.
- •63 Подготовка патологического материала для вирусологических исследований.
- •64 Индикация вирусов в патологическом материале путем обнаружения вирионов и вирусных телец – включений.
- •65 Использование лабораторных животных в вирусологической практике.
- •66 Отбор яиц для инкубации, условия инкубации, отбор куриных эмбрионов для заражения вирусами.
- •67 Цели и методы заражения куриных эмбрионов.
- •68 Обнаружение вирусов в зараженных куриных эмбрионах.
- •69 Основные солевые, диспегрирующие растворы и питательные среды, необходимые для культивирования клеток, и их компоненты.
- •70 Методика получения первично-трипсинизированной культуры клеток.
- •71 Индикация вирусов в зараженных культурах клеток.
- •72 Методика титрования вирусов по единичному эффекту.
- •73 Определение титра вируса. Методика расчета лд50 по Риду и Менчу.
- •74 Схема устройства и принцип действия люминесцентного микроскопа и люминесцентных осветителей.
- •75 Основные флуорохромы и их использование при диагностике инфекционных заболеваний.
- •76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
- •77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •78 Непрямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
- •79 Прямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •80 Непрямой метод иммуноферментного анализа (ифа).
- •81 Использование в вирусологии реакции гемагглютинации (рга).
- •82 Реакция торможения гемагглютинации (ртга) и её практическое использование в вирусологии, достоинства и недостатки.
- •83 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (рнга), достоинства и недостатки, практическое использование в вирусологии.
- •84 Реакция диффузной преципитации в агаровом деле (рдп) и её практическое использование в вирусологии.
- •85 Реакция встречного иммуноэлектроосмофареза (рвиэоф). Сущность реакции, применение.
- •86 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (пцр), использование в вирусологии.
- •87 Генетические методы диагностики вирусных болезней животных (днк-зонды), использование в вирусологии.
76 Принципы изготовления флуоресцирующих сывороток. Виды флуоресцирующих сывороток и их назначение.
В основе этих методов лежит использование люминесцирующих (флюоресцирующих) иммунных сывороток, антитела которых мечены флюорохромом и сохраняют способность вступать во взаимодействие с гомологичными антигенами.
Принципы получения люминесцирующих сывороток
Выбирают животное – продуцента сыворотки. Оно должно быть здоровым, упитанным
Подготовка антигена
Гипериммунизация – многократное введение одному и тому же животному нарастающих доз соответствующего антигена
Взятие крови у животного и получение сыворотки
Получение иммунных глобулинов (при помощи сульфата аммония, сульфата натрия, этакридинлактата)
Получают 10% раствор иммунных глобулинов
Иммунные глобулины метят флюорохромом ФИТЦ (флюоросцеин изотиоционат натриевая соль) – дает изумрудно зеленое свечение. Реже используют РСХ (родамин сульфохлорид) – красное свечение. Обычно берут 5 мг флюорохрома на 100г сывороточного белка.
Удаляют избыток флюорохрома (фильтрация через воронку, наполненную сефадексом; адсорбируют на порошке печени)
Фасуют по флаконам, подвергают лиофильной сушке (высушивание из замороженного состояния подвакуумом)
Контроль на стерильность, активность и специфичность.
Виды люминесцирующих сывороток
Видовые люминесцирующие сыворотки.
Содержат антитела, меченые флюорохромом, к какому-либо определенному виду вируса. Их используют для прямого МФА.
Антивидовые люминесцирующие сыворотки.
Содержат антитела, меченые флюорохромом, к глобулинам определенного вида животного. Например, сыворотка против глобулинов лошади. Используют для непрямого МФА.
Антикомплементарная люминесцирующая сыворотка.
Содержит антитела против комплемента. Используется для непрямого МФА.
Идентификация вирусов
77 Подготовка препаратов для иммунолюминесцентной диагностики. Прямой метод флуоресцирующих антител (мфа).
Берут чистое обезжиренное предметное стекло, конец стекла стачивают напильником, на этом месте делают надписи простым карандашом.
Берут исследуемый патологический материал (вируссодержащий), не консервированный глицерином, и готовят мазки-отпечатки.
Фиксируют либо охлажденным ацетоном (5-10 минут), либо спирт-эфиром (15 минут), либо метиловым спиртом (10 минут).
Берут люминесцирующую сыворотку, на этикетке выясняют объем, добавляют дистиллированную воду, чтобы восстановить первоначальный объем. Готовят рабочее разведение сыворотки. Сыворотку в рабочем разведении наносят на препарат, помещенный в чашку Петри, на фильтровальную бумажку, смоченную водой. Закрывают чашку. Время экспозиции 20-30 минут.
Препарат промывают водой, высушивают, микроскопируют под люминесцентным микроскопом с использованием нефлюоресцирующего иммерсионного масла. Рассматривают в затемненном помещении, при наличии вируса выявляют свечение. Иногда фон препарата гасят, чтобы лучше выявить свечение (например, используя бычий альбумин, меченый родамином).
Методы Флюоресцирующих Антител
Цель: обнаружить и идентифицировать вирус.
Прямой МФА
Готовят мазок-отпечаток из исследуемого материала, фиксируют, наносят видовую люминесцирующую сыворотку к предполагаемому вирусу. Время экспозиции 20 минут. Промывают, высушивают, микроскопируют под люминесцентным микроскопом. При наличии вируса выявляется свечение (изумрудно-зеленое или красное). Если вируса в материале нет или он гетерологичен антителам, то свечение не выявляется.