35 Иммуноглобулины и их роль в противовирусном иммунитете.

Иммунные глобулины – специфические факторы противовирусного иммунитета. Являются важным специфическим гуморальным фактором противовирусного иммунитета. Они образуются не только к целому вириону, но и к его отдельным компонентам. К вирусам образуются такие же виды антител, как и к бактериям – преципитины, агглютинины, комплемент связывающие и вируснейтрализующие антитела.

Антитела действуют на vi- и s–антигены в составе вирусной частицы, а не на клетки, зараженные вирусом. Вирус, находящийся внутри клеток, недоступен действию антител. Молекула антител присоединяется к поверхности вирусной частицы и изменяет её физико-химические свойства. В результате этого вирус теряет способность соединяться с рецепторами чувствительной клетки, что препятствует начальной стадии вирусной инфекции. Нейтрализация вируса антителами зависит от массы, количества этих систем, температуры и других факторов. В течение начального периода комплекс антитело + вирус обратим, но со временем он становится прочным.

Различные вирусы дают неодинаково стойкие комплексы с антителами. Это зависит от вирулентности вирусных частиц и от сложности структур вирусной частицы. Считают, что одна вирусная частица может нейтрализоваться одной молекулой антитела, хотя вирус может обладать несколькими адсорбционными связями. В этом случае свободной стороной вирус может вирус может связаться с восприимчивой клеткой и инфицировать её, если мало антител. В организме наблюдается неравномерное распределение противовирусных антител. В тканях, пораженных вирусом, их значительно больше, чем в сыворотке крови. Антитела концентрируются в местах репродукции вируса и нейтрализуют вирус, тем самым препятствуют распространению его по организму. Уровень антител в крови и сыворотке крови не отражает напряженность иммунитета. Антитела против вирусов начинают формироваться весьма рано – уже на 2 – 3 сутки после заражения. Но они отличаются по целому ряду признаков от поздних антител. Они термолабильны и разрушаются при температуре 58-60⁰С за 30 минут. Таким образом, при вирусных инфекциях защитная функция организма реализуется по 3м линиям защиты: у места входных ворот, на пути продвижения вируса к чувствительной клетке и в пределах инфицированной клетки.

Вирусы обладают разнообразными свойствами защиты от распознавания их антителами.

1. Они меняют антигенные свойства – постепенное изменение, антигенный дрейф. Он характеризуется постепенным изменением антигенных свойств вируса. Гуморальный иммунитет к этим вирусам сохраняется лишь до появления нового сероварианта возбудителя. Это не позволяет рассчитывать на долговременный эффект вакцинации;

2. Некоторые вирусы могут противодействовать интерферону;

3. Многие вирусы способны вызывать у макрофагов выработку супрессирующих цитокинов, которые подавляют развитие иммунного ответа.

36 Живые противовирусные вакцины. Принцип получения и контроль живых вакцин. Основные достоинства и недостатки.

Живые вакцины - это биологические препараты, содержащие штаммы вирусов, утратившие способность вызывать клинически выраженное заболевание, но сохранившие способность репродуцироваться в организме восприимчи­вого животного и стимулировать выработку специфических факторов противовирусного иммунитета (антител).

Основной этап - получение аттенуированных (слабовирулентных) штаммов вирусов. Основные трудности связаны с получением стабильного иммуногенного вакцинного штамма вируса и разработкой методов его контроля.

Для изготовления живых вакцин используют селекционированные естественные, аттенуированные и гетерологические штаммы вирусов. Естественные (выделенные из природы) авирулентные или слабовирулентные штаммы - это спонтанные мутанты, утратившие способность вызывать заболевание, но сохранившие иммуногенные свойства. Аттенуированные, т. е. ослабленные экспериментатором штаммы это индуцированные мутанты. Их обычно получают в лабораториях путем целена­правленного воздействия на эпизоотические штаммы различными физическими и химическими мутагенами или чаше путем пассажей вирулентного вируса через гетерологические (маловосприимчивые) биологические системы. В принципе, живые вакцины могут содержать и «дикий» тип вируса, т. е. неослабленный вирус, но в таком случае его вводят в организм неестественным путем, в результате чего ограничивается репликация вируса в месте введения, вызывается лишь бессимптомная инфекция, заканчивающаяся выработкой иммунитета.

Любой вакцинный штамм должен быть хорошо изучен, классифицирован, клонирован и паспортизирован. В паспорте указываются основные генетические признаки, выявляемые, постоянно воспроизводимые и контролируемые в процессе поддержания его жизнеспособности и хранения (остаточная вирулентность, способность репродуцироваться, активность в конкретной биологической системе, особенности проявления инфекционного действия, спектр гемагглютинации, степень чувствительности к физическим и химическим факторам). Вакцинные вирусные штаммы должны обладать генетической и фенотипической стабильностью. Их приживаемость в привитом организме должна быть выраженной, а способность к репродукции ограниченной. Эти признаки должны быть наследственно закрепленными. Вакцинные штаммы не должны подвергаться реверсии (возврату в исходное состояние) в том числе и при пассажах на естественно восприимчивых животных. Они не должны вызывать специфического инфекционного процесса у животных после введения им массивных доз вакцинного штамма (в 5—10 раз превышающих иммунизирующую дозу). Живые вакцины должны создавать напряженный иммунитет не менее чем у 70% однократно вакцинированных животных, этого достаточно для создания условий, препятствующих дальнейшему распространению болезни в неблагополучном стаде. Вакцинные штаммы размножаются в привитом организме до тех пор, пока его защитные механизмы не затормозят их развитие.

Технология изготовления живых вакцин сводится к культивированию вакцинного штамма в какой-либо биологической системе, накоплению вируса, очистке и концентрации, расфасовке, лиофилизации и контролю готового препарата.

Для предупреждения размножения бактерий, случайно попавших во время сбора и расфасовки вируссодержащего материала, в состав живых вакцин иногда включают антибиотики. Для профилактики контаминации живых авианизированных вакцин микоплазмами и вирусами применяют прединкубационную термообработку яиц при 42—45°С в течение 4 - 7 часов с последующим переводом их на обычный режим инкубации, кроме того, для инактивации вирусов лейкозов готовые вакцины выдерживают при 4°С не менее 4 педель. Наиболее желательно для изготовления живых вакцин использовать чистые биологические системы: эмбрионы и эмбриональные культуры клеток японских перепелок или кур, свободных от специфических патогенных факторов. Выпускаются живые вакцины, как правило, в лиофильно высушенном виде. В процессе высушивания активность вирусов не должна снижаться более чем в 10-15 раз, что обеспечивается за счет добавок стабилизирующих веществ.

В живой вакцине вирус сохраняет потенциальную способность изменяться в сторону снижения антигенности или повышения реактогенности, или даже вирулентности.

Преимущества и недостатки живых вакцин.

Технология изготовления живых вакцин, как правило, проста, они относительно дешевы, выпускаются чаще в сухом виде, поэтому удобны для применения. Вызывают активацию всех компонентов иммунной системы, стимулируют общий (системный) и местный иммунный ответ на каждый из защитных антигенов. Создают продолжительный и напряженный иммунитет за счет приживаемости, размножения и диссеминации в организме вакцинного штамма, при этом иммунитет формируется быстро, на первых этапах обычно за счет интерференции, а затем обусловливается накоплением вируснейтрализующих антител. Их можно вводить подкожно, внутримышечно, интраназально, а также аэрозольным (аэрогенным) и энтеральным (с кормом или водой) способом.

В зависимости от физиологического состояния животных живые вакцины могут вызвать поствакцинальные реакции. У животных может быть лихорадка, активация хронических и латентных инфекций, снижение продуктивности, избыточная смертность, аборты, аллергические реакции, врожденные уродства, низкая устойчивость к заражению. При использовании живых вакцин необходимо учитывать уровень остаточной вирулентности вакцинного штамма. Живые вакцины хранят в себе потенциальную опасность, связанную с возможной реверсией, т, е; возвратом вакцинного штамма в исходное (вирулентное) состояние. При культивировании вакцинных штаммов в эмбрионах птиц, культуре клеток или в организме животных имеется потенциальная опасность контаминации, что усложняет контроль и сдерживает широкое применение живых вакцин. Может наблюдаться длительная персистенция вакцинного штамма в организме животного. Чтобы сохранить жизнеспособность вакцинного штамма, необходимо соблюдать условия хранения и транспортировки живых вакцин (не выше 8°С) и применять в соответствии с инструкцией, прилагаемой к препаратам. Нарушение вакуума и попадание влаги в ампулу с вакциной, воздействие света и тепла инактивирует штамм, утрачиваются его иммуногенные свойства. Ввиду отсутствия в большинстве живых вакцин консервантов при вскрытии ампул и растворении содержимого необходимо строго соблюдать правила асептики. Место введения препарата в организм животного нельзя обрабатывать дезинфицирующими веществами. Разведенную живую вакцину необходимо быстро использовать (в течение 2 часов), остатки уничтожать сжига­нием или кипячением

Контроль живых вакцин

Контроль на чистоту, т. е. отсутствие контаминирующих агентов проводят путём посева вакцины на питательные среды (МПА, МПБ с глюкозой, бульон и агар Мартена, МППБ под вазелиновым маслом, бульон и агар Сабуро или Чапека). Посевы их выдерживают при 36—37°С до 15 дней. При отсутствии роста через 5—6 дней делают пересевы на аналогичные среды, их выдерживают до 10 дней. Роста микробов не должно быть.

Контроль на пирогенность и реактогенность вакцин определяют по наличию у привитых животных температуры, местной воспалительной реакции, вовлечению в процесс регионарных лимфоузлов, реже с помощью лабораторных анализов крови и мочи.

Контроль на иммуногенность проводят на восприимчивых лабораторных или сельскохозяйственных животных. Заражение вакцинированных животных проводят вирулентным штаммом в дозе от 5 до 200 полулетальных или инфицирующих доз при одновременном заражении равного количества равноценных невакцинированных животных. Между вакцинацией и заражением должен быть срок, достаточный для формирования иммунитета, - он зависит от вакцины - от двух суток до двух недель.

Кроме того, вакцины не должны вызывать аллергических реакций и образования опухолей, обладать эпизоотической и эпидемиологической безопасностью (для вакцин против болезней, свойственных человеку и животным).