Занятие 14.

14.1. Семинар: «Расчёт энергетического эффекта распада высших жирных кислот и глицерина».

Используя пример расчёта баланса энергии в учебнике (Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф., издание третье, с 376 -377) проведите расчёт количества АТФ, образующегося при окислении молекул:

А) стеариновой кислоты

Б) олеиновой кислоты

Г) пальмитиновой кислоты

14.2. Лабораторная работа: «Определение ацетоновых тел в моче».

К ацетоновым телам относятся ацетон, β-гидроксимасляная кислота и ацетоуксусная кислота.

В норме моча млекопитающих животных и человека содержит незначительные количества ацетоновых тел, которые не выявляются обычными химическими реакциями. Повышенное выделение ацетоновых тел с мочой наблюдается при нарушении жирового или углеводного обмена, при голодании и неправильном режиме питания.

Для обнаружения веществ, которые в моче здорового человека и животных не встречаются в аналитически определяемых количествах (белки, глюкоза, кетоновые тела, билирубин и гемоглобин) можно использовать экспресс-методы полуколичественного анализа (так называемые, тест-полоски).

Цель работы

Провести экспресс-тесты с 5 образцами мочи. Определить рН каждого из образцов, а также содержание белка, кетоновых тел, глюкозы. Проанализировать полученные результаты.

Принцип метода

О концентрации того или иного реагента можно судить по изменению окраски сенсорной зоны, сопоставив полученный результат с соответствующей цветной шкалой на упаковке.

Сенсорная или реакционная зона любой тест-полоски (для определения глюкозы, кетонов, белка, нитритов, билирубина, уробилиногена и т.д.) представляет собой некую матрицу, в которой находится много различных сбалансированных  химических компонентов.  Наряду с химическими компонентами в некоторые сенсорные зоны тест-полосок вводят ферменты, специфически взаимодействующие с определяемым веществом в пробе. Тест-полоски с наличием ферментов в сенсорной  зоне называют ферментативными.

Чтобы результаты определения были корректными, определение необходимо проводить в строгом соответствии с прилагаемой инструкцией по применению.

Реагенты, используемые в сенсорной зоне

№ п/п	Анализируемое соединение	Рабочий реагент
1	белок	Эфир тетрабромфенолфталеина, тетрабромфеноловый синий
2	глюкоза	Глюкозооксидаза, пероксидаза, тетраметилбензидин
3	кетоновые (ацетоновые) тела	Натрия нитропруссид
4	рН	Метиловый красный, бромтимоловый синий

Примечание:

Проба, анализируемая на наличие белка, наиболее чувствительна к альбумину, значительно менее чувствительна к глобулинам, мукопротеинам, гемоглобину. На определение белка не влияет величина рН мочи, но в сильно щелочной моче (рН выше 8) или в моче с высокой буферной емкостью тест может дать ложноположительные результаты. Не обращайте внимания на окраску сухой зоны.

Определение глюкозы основано на ферментативной (глюкозоксидаза/пероксидаза) реакции, тест специфичен для глюкозы, другие сахара не взаимодействуют. Реакция не зависит от рН и присутствия кетоновых тел.

Кетоны - проба значительно чувствительнее к ацетоуксусной кислоте, чем к ацетону. С бета-гидроксимасляной кислотой проба не реагирует. Лекарственные и диагностические препараты на основе фенолфталеина, присутствующие в моче, могут в щелочной среде зоны окрашиваться в красный и даже пурпурный цвет. Цветная шкала сравнения на этикетке отражает концентрацию ацетоуксусной кислоты в моче.

Выполнение работы

Тест-полоску опускают на 1-2 с. в исследуемый образец так, чтобы сенсорные зоны были смочены. Капли мочи с полоски удаляют, проведя полоской по краю сосуда с мочой. Полоску оставляют в горизонтальном положении. Приблизительно через 60 с. сопоставляют окраску зон индикации с соответствующей цветной шкалой.

Оформление работы

	I обра-зец	II обра-зец	III обра- зец	IV обра- зец	V обра- зец
рН
Белок
Глюкоза
Кетоновые тела

Выводы

Раздел 8