Цель работы

Убедиться в специфичности действия ферментов на соответствующие субстраты.

Принцип метода

Следят за расщеплением крахмала и сахарозы по образованию глюкозы, которую определяют пробой Троммера (модификация пробы «медного зеркала» на альдегидную группу). Крахмал и сахароза не содержат способной окисляться альдегидной группы и не дают положительной пробы Троммера при нагревании.

Выполнение работы

Слюну разводят 1:5 и полученный раствор используют как источник амилазы. Получение сахаразы осуществляют следующими образом: 10 г пекарских дрожжей тщательно растирают в ступке, добавляют 15 мл воды, перемешивают, фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Полученный фильтрат используют как источник фермента.

В 4 пробирки по каплям добавляют следующие реактивы:

№№ проб	Крахмал	Сахароза	Амилаза	Сахараза	Окраска в реакции Троммера на наличие глюкозы
1	10 капель	-	5 капель	-
2	10 капель	-	-	5 капель
3	-	10 капель	5 капель	-
4	-	10 капель	-	5 капель

Пробы перемешивают и инкубируют при 40°С в течение 10 мин, а затем проводят реакцию Троммера с содержимым каждой пробирки. Результаты записывают в таблицу.

Проба Троммера на наличие глюкозы

К 5 каплям исследуемого раствора добавляют 5 капель 30% раствора NaOH и 1 каплю 7% раствора CuSO₄ , следя за тем, чтобы капли не растекались по стенкам пробирки до появления в верхнем слое неисчезающей голубой мути вследствие образования гидроксида меди (II) Cu(OH)₂. Затем осторожно, не встряхивая пробирку, нагревают её на горелке. При кипячении выпадает желтый осадок гидроксида меди (I) CuOH или красный осадок Cu₂O. В случае избытка CuSO₄ образуется черный осадок CuO.

Выводы

Занятие 11.

11.1 Семинар по теме: «Обмен углеводов»

Тестовые задания по теме: «Распад и синтез гликогена. Гликолиз и гликогенолиз»

1.Вопросы, требующие однозначного ответа «да» (+) или «нет» (-).

1. Скорость гликолиза и гликогенолиза контролируется фосфофруктокиназой .

2. Инсулин активирует фосфорилазу "b".

3. Гликоген в мышцах рападается с образованием глюкозо-6-фосфата.

4. Положительный баланс гликогенолиза составляют 2 молекулы АТФ.

5. Необходимо ли фосфорилирование глюкозы для включения ее в обменные процессы?

6. Все ли ферментативные реакции гликолиза обратимы?

7. Сопровождается ли процесс анаэробного гликолиза накоплением НАДН(Н⁺)?

8. Относится ли пируваткиназа к классу гидролаз?

9. Расщепляет ли альдолаза фруктозо-1,6-бисфосфат?

10. Обратима ли лактатдегидрогеназная реакция?

2.Вопросы с выборочным ответом

В опыте с мышечной тканью изучали гликолиз в анаэробных условиях. Скорость гликолиза уменьшается при добавлении: АДФ АМФ цитрата ацетил-КоА сукцината

Метаболит гликолиза в эритроцитах, изменяющий сродство гемоглобина к кислороду: 1,3-бисфосфоглицерат 2,3-бисфосфоглицерат 2-фосфоглицерат 3-фосфоглицерат фосфоенолпируват

Тестовые задания по теме: «Аэробный обмен углеводов»

1.Вопросы, требующие однозначного ответа «да» (+) или «нет» (-).

1. Скорость ЦТК регулируется аллостерическими ферментами - цитратсинтазой и изоцитрадегидрогеназой.

2. Положительный баланс ЦТК составляют 15 молекул АТФ.

3. Сукцинил-КоА является макроэргическим соединением.

4. В окислительном декарбоксилировании пировиноградной и -кетоглутаровой кислот участвует КоА.

5. Все ферменты ЦТК находятся в митохондриях.

6. Зависит ли скорость цикла трикарбоновых кислот от концентрации АТФ в клетке?

7. Катализирует ли сукцинатдегидрогеназа окисление янтарной кислоты?

8. Происходит ли в ЦТК субстратное фосфорилирование?

9. Все ли атомы глюкозы окисляются в ЦТК до СО₂?

10. Может ли цитрат из митохондрий попадать в цитоплазму?