Аскорбиновая кислота является антиоксидантом и вкусовой добавкой, поэтому часто добавляется во многие напитки и пищевые продукты.

Суточная потребность в аскорбиновой кислоте у человека составляет не менее 60 мг. У птиц добавление к рациону 50 мг витамина в сутки повышает яйценоскость.

Цель работы

Определить процентное содержание витамина С (аскорбиновой кислоты) в картофеле (в молодом картофеле содержание витамина С составляет 0,02 - 0,04 %, а в старом – 0,005 – 0,010 %).

Принцип метода

Титрование витамина С (аскорбиновой кислоты) раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, имеющим тёмно-синюю окраску в кислой среде, до получения розовой восстановленной формы последнего. Другие легко окисляемые вещества, например глутатион, цистеин, мешают определению аскорбиновой кислоты.

Химизм реакции

натриевая соль (розовая в кислой среде)

Выполнение работы

Навеску картофеля 2 г тщательно растирают в ступке с 3-5 мл 2% раствора НСl, затем количественно (ополаскивая дистиллированной водой) переносят содержимое ступки в колбу. Титруют из бюретки 0,001 М раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 с.

1 мл титрованного 0,001 М раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола соответствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты (относительная молекулярная масса аскорбиновой кислоты 176, а грамм-эквивалент – 88 г). При расчёте на 100 г вещества необходимо учитывать количество исследуемого материала.

Пример

На титрование 2 г гомогената картофеля пошло 1,25 мл 0,001 М 2,6-дихлорфенолиндофенола. Содержание аскорбиновой кислоты в 2 г гомогената составляет:

0,088 мг ^. 1,25 = 0,11 мг аскорбиновой кислоты

а в 100 г картофеля содержится:

0,11 мг ^. 50 = 5,5 мг аскорбиновой кислоты (0,0055%)

Выводы

Занятие 8. Коллоквиум II по теме: «Ферменты и витамины»

Вопросы, для самостоятельной подготовки

1. Классификация ферментов. Примеры ферментов каждого класса.

2. Общие свойства ферментов: термолабильность, зависимость от pH, температуры, специфичность действия ферментов.

3. Ферменты, определение. Простые и сложные ферменты. Активные и аллостерические центры ферментов.

4. Регуляция действия ферментов.

5. Ферменты. Определение активности. Единицы активности.

6. Ингибирование ферментов, неспецифическое и специфическое ингибирование, обратимое и необратимое. Конкурентное и неконкурентное.

7. Понятие о ферментах и коферментах. Связь коферментов с витаминами.

8. Специфичность действия ферментов. Типы специфичности.

9. Влияние концентрации субстрата на активность ферментов. Понятие о константе Михаэлиса.

10. Витамины, классификация витаминов. Биологическая роль витаминов. Жирорастворимые витамины А, D, E, K .

11. Витамин PP (антипеллагрический) витамин. Биологическая роль.

12. Витамин B₁ (антиневритный) – тиамин. Биологическая роль.

13. Витамин В₂ (витамин роста) – рибофлавин. Биологическая роль.

14. Витамин В₃ (антидерматитный) – пантотеновая кислота. Биологическая роль.

15. Витамин В₆ (антидерматитный) – пиридоксин. Акродиния. Биологическая роль.

16. Витамин С (антискорбутный) – аскорбиновая кислота. Биологическая роль.

Варианты письменной части коллоквиума

Вариант 1.

1. Общие свойства ферментов: термолабильность, рН-зависимость, специфичность.

2. Изоферменты и их значение для энзимодиагностики.

3. Биологическая роль витамина A.

4. Написать формулу кофермента витамина B₁

и показать его участие в обменных процессах

Вариант 2.

1. Зависимость между концентрацией субстрата и скоростью ферментативных реакций. Понятие о константе Михаэлиса.

2. Типы ингибирования ферментов: конкурентное и неконкурентное ингибирование.

3. Биологическая роль витамина K .

4. Написать формулу кофермента витамина B₃ и показать его участие в обменных процессах . .

Вариант 3.

1. Классификация ферментов, характеристика каждого класса ферментов (примеры).

2. Понятие об активных центрах ферментов: каталитические и регуляторные центры. Аллостерические эффекторы. Активаторы и ингибиторы ферментов.

3. Биологическая роль витамина E.

4. Написать формулу кофермента витамина B₆ и показать его участие в обменных процессах для

Вариант 4.

1. Зависимость между концентрацией субстрата и скоростью ферментативных реакций. Понятие о константе Михаэлиса.

2. Примеры использования ферментов в ветеринарии.

3. Биологическая роль витамина D .

4. Написать формулу кофермента витамина B₂ и показать его участие в обменных процессах .

Варианты заданий на компьютерном тестировании

Инструкция к тесту: Выбрать все правильные ответы

1. K классу оксидоредуктаз не относится фермент:

   1. каталаза

   2. пероксидаза

   3. амилаза

   4. аскорбатоксидаза

   5. лактатдегидрогеназа

2. Перенос электронов от одного вещества к другому осуществляют:

   1. оксидоредуктазы

   2. трансферазы

   3. гидролазы

   4. лиазы

   5. лигазы

3. Фермент амилаза относится к

   1. оксидоредуктазам

   2. гидролазам

   3. лиазам

   4. синтетазам

   5. изомеразам

4. Смесь ферментов нельзя разделить:

   1. высаливанием

   2. диализом

   3. гель-фильтрацией

   4. электрофорезом

   5. ионообменной хроматографией

5. Константа Михаэлиса (К_m ) – это концентрация субстрата [S], при которой скорость ферментативной реакции v:

   1. равна 0

   2. равна 1

   3. максимальна (v_макс.)

   4. равна ½ от максимальной скорости

   5. превышает v_макс.

6. Причиной гиповитаминоза могут быть:

   1. недостаток витамина в пище

   2. нарушение транспорта витамина

   3. нарушение синтеза кофермента

   4. генетические дефекты апофермента

   5. все вышеперечисленные обстоятельства

7. Витамин, необходимый для переноса атомов водорода:

   1. тиамин

   2. рибофлавин

   3. фолиевая кислота

   4. кобаламин

   5. биотин

8. В состав ФМН входит витамин:

   1. В₁

   2. В₂

   3. В₃

   4. В₆

5. В₁₂

9. Витамины, участвующие в свертывании крови:

   1. А

   2. В

   3. С

   4. Е

   5. К

10. Витамин С не синтезируется в организме:

    1. человека

    2. собаки

    3. коровы

    4. лошади

    5. свиньи

11. Фермент каталаза относится к:

    1. оксиредуктазам

    2. трансферазам

    3. гидролазам

    4. лиазам

    5. изомеразам

12. В активном центре фермента не может связывать:

    1. субстрат

    2. продукт

    3. кофермент

    4. конкурентный ингибитор

    5. аллостерический эффектор

13. Кофермент присоединяется к апоферменту:

    1. минимум в трех точках

    2. всегда в активном центре

    3. разнообразными химическими связями

    4. либо прочно, либо непрочно

    5. всеми перечисленными способами

14. Специфичность действия холофермента определяется:

    1. характером витамина

    2. углеводными молекулами, присоединенными к белку

    3. апоферментом

    4. коферментом

    5. всеми вышеперечисленными факторами

15. Общее число субъединиц в лактатдегидрогеназе:

    1. две

    2. три

    3. четыре

    4. шесть

    5. восемь

16. Витамин, необходимый для переноса аминогрупп:

    1. пиридоксин

    2. рибофлавин

    3. тиамин

    4. аскорбат

    5. никотинамид

17. НАД⁺ и НАДФ⁺ - коферментные формы витамина:

1. Р

2. PP

3. К

4. С

5. В₃

18. Неспецифическое (неизбирательное) ингибирование всех ферментов наблюдается под действием:

    1. избытка субстрата

    2. аналогов субстрата

    3. аналогов кофермента

    4. аллостерических эффекторов

    5. нагревания

19. Полиневрит развивается при недостаточности витамина:

1. А

2. В₁

3. В₆

4. РР

5. В₃

20. Акродиния – заболевание связанное с недостаточностью витамина:

    1. В₁

    2. В₂

    3. В₃

    4. РР

    5. В₆

21. К какому классу относится фермент фосфопируват-гидратаза (енолаза КФ 4.2.1.11):

    1. трансферазы

    2. гидролазы

    3. лиазы

    4. изомеразы

    5. лигазы

22. К классу оксидоредуктаз не относится фермент:

    1. каталаза

    2. пероксидаза

    3. холинэстераза

    4. аскорбатоксидаза

    5. лактатдегидрогеназа

23. Специфичность сложных ферментов определяется:

    1. коферментом

    2. апоферментом

    3. аллостерическим эффектором

    4. витамином

    5. всеми вышеперечисленными факторами

24. Конкурентные ингибиторы:

    1. повышают К_m фермента

    2. понижают К_m фермента

    3. повышают V_max

    4. понижают V_max

    5. не изменяют К_m и V_max

25. Коферментом лактатдегидрогеназы является:

    1. ТПФ

    2. пиридоксальфосфат

    3. биотин

    4. НАД

    5. фолиевая кислота

26. Кофермент, присоединяющий всегда только один атом водорода при окислении субстрата:

    1. ФАД

    2. ФМН

    3. НАДФ⁺

    4. ТПФ

    5. пиридоксальфосфат

27. При недостатке витамина РР у человека развивается:

    1. склероз

    2. рахит

    3. пеллагра

    4. цинга

    5. бери - бери

28. ФАД и ФМН - коферментные формы витамина:

    1. В₁

    2. В₂

    3. В₃

    4. В₆

    5. В₁₂

29. В состав кофермента А входит витамин:

    1. В₁

    2. В₂

    3. В₃

    4. В₆

    5. В₁₂

30. В рубце жвачных животных не синтезируется витамин:

    1. В₁

    2. В₂

    3. А

    4. В₁₂

    5. В₆

31. В активный центр фермента не входит:

    1. субстратсвязывающий участок

    2. каталитический участок

    3. металл

    4. кофермент

    5. аллостерический эффектор

32. Фермент, не относящийся к гидролазам:

    1. амилаза

    2. трипсин

    3. каталаза

    4. холинэстераза

    5. пепсин

33. Каталитической активностью обладает:

    1. инсулин

    2. гемоглобин

    3. казеин

    4. пепсин

    5. кератин

34. Коферментом аминотрансфераз служит:

    1. ФАД

    2. ТПФ

    3. ПФ

    4. биотин

    5. КоА

35. Конкурентное ингибирование снимается:

    1. повышением температуры

    2. добавлением продукта реакции

    3. избытком субстрата

    4. ионами тяжелых металлов

    5. другим ингибитором

36. Витамин, содержащий в своей молекуле атом металла:

    1. тиамин

    2. биотин

    3. кобаламин

    4. пиридоксин

    5. рибофлавин

37. Витамин, входящий в состав кофермента НАДФ:

    1. тиамин

    2. биотин

    3. рибофлавин

    4. ниацин (РР)

    5. пиридоксин

38. Витамин Е представляет собой:

    1. холекальциферол

    2. ретинол

    3. эргокальциферол

    4. токоферол

    5. диметилнафтохинон

39. В реакциях карбоксилирования участвуют витамины:

    1. тиамин

    2. биотин

    3. пиридоксин

    4. ретинол

    5. токоферол

40. При недостаточности какого витамина наблюдается у животных остеомаляция?

    1. А

    2. D

    3. Е

    4. В₁

    5. К

Ответы к тестам:

1. 3

2. 1

3. 2

4. 2

5. 4

6. 5

7. 2

8. 2

9. 5

10. 1

11. 1

12. 5

13. 5

14. 3

15. 3

16. 1

17. 2

18. 5

19. 2

20. 1

21. 3

22. 3

23. 2

24. 1

25. 4

26. 3

27. 3

28. 2

29. 3

30. 3

31. 5

32. 3

33. 4

34. 3

35. 3

36. 3

37. 4

38. 4

39. 2

40. 2