Литература

1. Токсикологическая химия: метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие + СD/ под ред. Н.И. Калетиной. – М., 2008. – 1016 с. Переплет.

2. Токсикологическая химия: учебник / под ред. Т.В. Плетеневой. – 2-ое изд. – М., 2008. – 512 с. Переплет.

3. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. -М.,"Медицина", 1994. –189с.

4. Крамаренко В. Ф. Токсикологическая химия / В. Ф. Крамаренко. - Киев, «Высшая школа», 1989.- 272с.

Контрольные вопросы

1. Общее представление о пестицидах, их значение, токсичность, строение и свойства.

2. Классификация пестицидов.

3. Сохраняемость пестицидов в организме, трупном материале и окружающей среде.

4. Симптомы при остром отравлении пестицидами.

5. Симптомы при хронической интоксикации пестицидами.

Методические рекомендации для самостоятельной работы под руководством преподавателя

Тема 2. Методы анализа пестицидов: энзиматический, химический, хроматографический».

Цель: Ознакомление студентов с основными методами анализа пестицидов.

Задачи обучения: формирование знаний у студентов по современным методам анализа пестицидов.

Форма проведения: групповое обсуждение с презентацией.

Задания по теме:

1. Составить схему анализа пестицидов, включая проподготовку, энзиматический, химический и хроматографический методы анализа.

Раздаточный материал

1. Антихолинэстеразные препараты. Холинэстеразная проба. Известно большое

количество химических соединений, способных подавлять активность холинзстеразы (ХЭ). К соединениям, обладающим таким свойством, относятся пестициды из группы ФОС и производных карбаминовой кислоты. Ведущим звеном в механизме действия этих веществ на организм человека и животных является нарушение ка­талитической функции фермента ХЭ во всех органах и структурах, имеющих холинергическую иннервацию, прежде всего в ЦНС. Поэтому фосфорорганические пестициды (ФОН) и карбамагы относят к нервным или синаптическим ядам. Способность этих соединений снижать активность ацетилхолинэстеразы можно использовать для аналитических целей. Холинэстеразная проба является общей для обнаружения большинства органических ядохимикатов, которые понижают активность ацетилхолинэстеразы. Ацетилхолин под влиянием ацетилхолинэстеразы разлагается с образованием уксусной кислоты, в результате этого изменяется рН смеси ацетилхолинэстеразы и ацетилхолина. Эти изменения можно зафиксировать с помощью раствора бромтимолового синего или других индикаторов. При изменении рН среды (от нейтральной до кислой) синяя окраска бромтимолового синего переходит в желтую. Если к смеси растворов ацетилхолина и бромтимолового синего прибавить ацетилхолинэстеразу и фос­форсодержащее органическое соединение, являющееся ингиби­тором ацетилхолинэстеразы, то ацетилхолин не разлагается ацетилхолинэстеразой и окраска индикатора не изменяется. При выполнении холинэстеразной пробы к смеси реагирующих ве­ществ можно прибавлять не ацетилхолинэстеразу, а плазму крови или лошадиную сыворотку, содержащую этот фермент. В этом случае плазма крови или сыворотка служит источником ацетилхолинэстеразы.

2. Для обнаружения пестицидов применяют химические цветные реакции,

холинэстеразную пробу и метод хроматографии. Объектами химико-токсикологического анализа могут быть не только органы трупов и биологические жидкости, но и ядо­химикаты в виде порошков, растворов, эмульсий и т. д. Прежде чем приступить к анализу соответствующих объектов на наличие ядохимикатов, необходимо установить принадлежность их к опре­деленному классу химических соединений. Для установления принадлежности исследуемых веществ к фосфорсодержащим органическим соединениям проводят холинэстеразную пробу и определяют наличие фосфора в этих соединениях. Чтобы определить наличие фосфора в исследуемых соединениях вначале их подвергают минерализации. Затем в минерализатах определяют соединения фосфора с помощью соответствующих реакций.

3. Предварительное исследование пестицидов проводят хроматографическими методами (ТСХ и ГХ) или ИХМ. ТСХ применяют для скрининга и идентификации пестицидов в коммерчес­ких препаратах, добавленных к напиткам или пищевым продуктам, биологических жидкостях (содержимое желудка, моча) и тканях. Исследования образцов крови, объектов окружающей среды на наличие остаточных коли­честв пестицидов требуют применения более чувствительной техники ГХ. Наличие в молекулах пестицидов атомов фосфора, галогенов, сурьмы или мышьяка позволяет использовать возмож­ности селективных газохроматографических детекторов (АФД, ЭЗД, пламенно-фотометричес­кий — ПФД). а также газохроматографических систем, способных одновременно получать сигналы от нескольких из указанных детекторов или оборудованных современными устройс­твами для переключения потоков между хроматографическими колонками разной полярности (многомерная хроматография). Арбитражным методом при определении пестицидов считают ГХ-МС. Однако с развитием аналитической техники все большее значение приобретает ВЭЖХ с масс-селективным детектированием (ВЭЖХ-МС), особенно при определении термолабильных водорастворимых вешеств (см. электронное приложение). В последние годы разрабатывается скрининговый анализ пестицидов с использованием ИХМ. Лидирующее положение среди ИХМ определения пестицидов занимает гетерогенный твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), технология ЕП5А. Метод поляризацион­ного флюоресцентного иммуноанализа (ПФИА) также успешно применяется для определения пестицидов.