Методические рекомендации для занятий (практические, семинарские, лабораторные)

Тема 4 - Завершение решения экспертной задачи:

- определение в трупной крови концентрации карбоксигемоглобина методом

спектрофотометрии;

- написание экспертного заключения (заключение химико-токсикологической экспертизы).

Цель: ознакомить студентов с определением в трупной крови концентрации карбоксигемоглобина методом спектрофотометрии;

- написание экспертного заключения (заключение химичеко-токсикологической экспертизы).

Задачи обучения: научить студентов определению в трупной крови концентрации карбоксигемоглобина методом спектрофотометрии и написанию экспертного заключения (заключение химико-токсикологической экспертизы).

Форма проведения: семинар, работа в малых группах и выполнение заданий парами студентов.

Задания по теме:

Задание 1 групповое обсуждение теоретических вопросов по теме занятия.

6. Особенности определения оксида углерода (II) в трупных биообъектах.

7. Подготовка проб к анализу

8. Предварительные методы исследования (химические)

9. Обнаружения в трупной крови карбоксигемоглобина с использованием химических методов анализа

10. Обнаружения в трупной крови карбоксигемоглобина с использованием физико-химических методов анализа

Задание 2. (для 2-х студентов).

Токсикологическая химия. Ситуационные задачи и упражнения. Под ред.Н.И. Калетиной.-М.-2007.-С.314. Ситуационная задача № 9

На ХТЭ доставлены: внутренние органы, моча и кровь трупа.

Обстоятельства дела.

Во время сильного пожара в дачном поселке пропал человек. На месте происшествия его останков не было обнаружено. Однако через 3 дня труп был найден в закрытом снаружи и слегка обгоревшем сарае.

Информация.

Патологоанатомом при осмотре трупа отмечены отек легких и мозга, слизь в бронхах, сине-багровый цвет кожи и малиново-красный оттенок слизистых оболочек.

При исследовании крови трупа был обнаружен токсикант. В пробах с основным ацетатом свинца и формалином кровь потерпевшего сохра­няла розовый цвет.

Цель исследования: провести ХТЭ представленных трупных биообъектов - определение в трупной крови концентрации карбоксигемоглобина методом спектрофотометрии.

Приведите схему химико-токсикологического анализа представленных биообъектов, опираясь на методологию системного химико-токсикологи­ческого анализа (СХТА).

Лаборатория работает согласно принципам GLP и оснащена аналити­ческим оборудованием в соответствии с современными рекомендациями TIAFT.

ПРИМЕЧАНИЕ

При решении задачи следует учесть информацию предыдущего занятия:

• информацию о выборе биообъекта, используя знания фи­зико-химических свойств токсикантов, их токсикокинетики и мета­болизма;

• информацию о способе пробоподготовки и изолирова­ния (выделения) токсикантов, используя знания физико-химических свойств токсикантов и учитывая Ваш выбор последующих методов анализа;

• выбор методов идентификации и количественного определения ток­сикантов, учитывая их чувствительность и специфичность, преиму­щества и недостатки;

• обосновать выбор способа количественного определения, поэтапно изложить схему и процедуру его проведения, привести математичес­кие формулы; если необходимо, то произвести вычисления;

• представить интерпретацию полученных количественных результатов;

• дать заключение об обнаружении токсикантов.

Литература

5. Токсикологическая химия: метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие + СD/ под ред. Н.И. Калетиной. – М., 2008. – 1016 с. Переплет.

6. Токсикологическая химия: учебник / под ред. Т.В. Плетеневой. – 2-ое изд. – М., 2008. – 512 с. Переплет.

7. Крамаренко В. Ф. Токсикологическая химия / В. Ф. Крамаренко. - Киев, «Высшая школа», 1989.- 272 с.

8. Руководство к практическим занятиям по токсикологической химии/ А.В. Белова.- М., "Медицина", 1976.-231с.

Контрольные вопросы:

7. Особенности определения оксида углерода (II) в трупных биообъектах.

8. Подготовка проб к анализу

9. Предварительные методы исследования (химические)

10. Обнаружения в трупной крови карбоксигемоглобина с использованием химических методов анализа

11. Обнаружения в трупной крови карбоксигемоглобина с использованием физико-химических методов анализа

12. Экспертное заключение (акта судебно-химического исследования).

ПРИЛОЖЕНИЕ

Оптические методы (Калетина Н.И.-Метаболизм и определение токсикантов.-М.-2007.-С.-753-759 )

Объектами исследования на СО являются главным образом кровь пострадавшего и воздух производственных или жилых помещений, содержащий СО.

Диагностическое значение имеет определение НbСО в крови, взятой непосредственно на месте происшествия, так как при оказании пострадавшему первой помощи происходит час­тичная элиминация угарного газа и снижается содержание НbСО в крови. Спектрофотометрический метод определения СО наиболее распространен, потому что все гемоглобиновые структуры имеют абсорбцию в определенной части спектра.

Количественное определение в крови НbСО спектрофотометрическим методом

При добавлении восстановителя (натрия тиосульфата) к исследуемой крови окси- и метгемоглобин количественно образуют восстановленную форму гемоглобина. Последняя имеет спектр поглощения, представленный на рис. 1.

СО имеет большее сродство к гемоглобину, чем кислород, поэтому комплекс НЬСО не можег быть разрушен тиосульфатом натрия. Таким образом, после обработки тиосульфатом натрия комплекс НbСО проявляется характерным спектром с двумя максимумами поглоще­ния (рис. 8-16, А). Максимальная разница оптической плотности между спектрами А и Б от­мечается при длине волны 540 нм, тогда как при длине волны 579 нм оптическая плотность практически одинакова. Процентное содержание СО в крови (см. рис. 1. А) может быть вычислено по формуле, исходя из значения оптической плотности «здоровой», не содержащей НЬСО крови (см. рис. 1. Б), и исследуемого образца (см. рис. 1. В) после добавления тиосульфата натрия:

Рис. 1. Уф-спектры НЬСО (А), восстановленного гемоглобина (Б) и крови паписта при отравлении \ 1 арным I азом ( В).

Интерпретация результатов

• Содержание СО в крови < 5%: норма; для курящих до 10%.

• Содержание СО в крови 10—20%: интоксикация легкой степени.

• Содержание СО в крови 20—30%: интоксикация средней степени.

• Содержание СО в крови 30—40%: интоксикация средней степени, но возможен коллапс.

• Содержание СО в крови 40—50%: интоксикация средней степени, выраженные расстройс­тва дыхания и функций сердечно-сосудистой системы, часто коллапс, возможна смерть.

• Содержание СО в крови 50—60%: интоксикация сильной степени — кома, судороги, воз­можна смерть.

• Содержание СО в крови 60—90%: смерть

Судебно-медицинская оценка результатов количественного определения карбоксигемоглобина и карбоксимиоглобина

• Содержание НbСО в крови зависит прежде всего от концентрации СО во вдыхаемом возду­хе и времени его воздействия.

• Концентрация НbСО тем выше, чем выше парциальное давление СО в альвеолярном воз­духе по сравнению с парциальным давлением О,.

• За один и тот же промежуток времени при прочих равных условиях СО поступает в орга­низм тем больше, чем больше минутный объем дыхания.

• Соответствие между концентрацией НЬСО и тяжестью отравления имеется не всегда. Это особенно отчетливо проявляется при групповых отравлениях.

• Смертельная концентрация НbСО в крови составляет в среднем около 60%, но может коле­баться от 40 до 80% и более, что обусловлено влиянием внешних условий и особенностями организма.

• Тяжесть острого отравления СО усиливается при низком барометрическом давлении, повы­шенной влажности, высокой или низкой температуре воздуха, усиленной мышечной работе.

• При смертельном отравлении порог насыщения НbСО у пожилых людей ниже. У женщин отравление протекает легче, чем у мужчин. Беременные женщины более чувствительны, чем небеременные. Лица, подвергавшиеся хроническому воздействию СО, тяжелее переносят острое отравление.

• Острое отравление проходит тяжелее у лиц, страдающих заболеваниями легких, сердца, нарушениями кровообращения, неврастенией, ожирением, анемией, перенесших черепно-мозговую травму, во время инфекционных заболеваний.

• Данные о влиянии алкогольной интоксикации на тяжесть отравления СО противоречивы.

• При сочетанном отравлении СО и оксидами азота, СО,, парами бензина, НСN (например, в результате пожара или технологического процесса) к смертельному исходу может привести относительно невысокая концентрация НbСО.

• Необходимо учитывать очень разную чувствительность отдельных лиц к действию СО. При групповых отравлениях у некоторых лиц, находящихся в коматозном состоянии, содержа­ние НЬСО бывает гораздо ниже, чем у лиц, перенесших тяжелое отравление и при этом чувствующих себя удовлетворительно.

• Изредка встречаются атипичные формы отравления, протекающие с быстрой потере)! созна­ния или тяжелыми расстройствами дыхания и сердечной деятельности (СО в крови 30%).

• Количественное содержание НbСО в крови, по-видимому, может зависеть от того, из како­го участка кровеносной системы взята для исследования кровь. При вскрытии трупа кровь для исследования надлежит брать из правого предсердия (при наличии в нем крови) или бедренной вены либо из другого магистрального сосуда, а также из грудной или брюшной полости (при наличии излившейся в нее крови).

• В некоторых случаях целесообразно измерять содержание НbСО в гематомах и кровоподте­ках, так как оно может служить одним из признаков определения времени их возникнове­ния. Считают, что гематомы, в которых содержание НbСО менее 10%. возникли до воздейс­твия СО. Если содержание НbСО в них превышает 20%, то образование гематом связано с отравлением СО.

• В воздухе промышленных городов постоянно содержится СО, вследствие чего в крови жи­телей обычно находится некоторое количество НbСО. Между концентрацией НbСО и степенью загрязнения воздушной среды СО отмечена прямая зависимость. Например, в крови регулировщиков уличного движения содержание НbСО может достигать 22%.

• При освидетельствовании лиц, перенесших отравление СО, нужно иметь в виду, что при интоксикации средней степени в течение первого часа выделяется около половины посту­пившего в организм СО. Полное освобождение организма от СО наступает спустя 10—12 ч, но может затягиваться и до 24 ч.

• При обнаружении в крови трупа менее 60% НbСО необходимо проанализировать патологоанатомические данные и обстоятельства отравления, чтобы обосновать заключение о причине смерти.

• При повышении поступления СО в организм соответственно увеличивается содержание СО в тканях.

• Необходимость в исследовании скелетных мышц трупа или его частей возникает в очень редких случаях (например, при гнилостных изменениях резко обескровленных частей тру­па), потому что для определения НbСО спектрофотометрическим методом необходим всего 1 мл крови из свежего или хранившегося до 10 дней биологического материала

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ ПОД РУКОВОДСТВОМ ПРЕПОДАВАТЕЛЯ

Кредит № 1