Методические рекомендации для занятий (практические, семинарские, лабораторные)

Тема 2 - Решение ситуационной задачи:

- подготовка проб к анализу;

- идентификация в крови карбоксигемоглобина с использованием химических экспресс-методов;

- написание заключения аналитической диагностики.

Цель: ознакомить студентов с подготовкой проб к анализу и идентификацией в крови карбоксигемоглобина с использованием химических экспресс-методов.

Задачи обучения: научить студентов методам анализа карбоксигемоглобина в с использованием химических экспресс-методов.

Форма проведения: семинар, работа в малых группах и выполнение заданий парами студентов.

Задания по теме:

Задание 1 групповое обсуждение теоретических вопросов по теме занятия.

1. Определение СО в крови

2. Предварительные методы исследования (химические).

3. Экспресс-тесты на определение СО в крови

4. Другие химические пробы.

Задание 2. (для 2-х студентов).

Токсикологическая химия. Ситуационные задачи и упражнения. Под ред.Н.И. Калетиной.-М.-2007.-С.312. Задача № 7.

На ХТА доставлены: кровь и моча ребенка.

Обстоятельства дела.

Семья с ребенком 8 лет участвовала в пикнике в горах. При возвра­щении домой люди попали в снежные заносы и вынуждены были нахо­диться в закрытом автомобиле с включенным мотором в течение 14 часов. После возвращения домой все чувствовали себя плохо. У взрослых кру­жилась голова, возникла рвота, мышечная слабость. У женщины на фо­не низкого давления появилась боль в сердце. Ребенок впал в кому и был доставлен в больницу.

Информация.

При осмотре в больнице у ребенка кожа лица была сине-багрового цвета, а видимые слизистые оболочки — малиново-красного оттенка. В пробах с танином и фероцианидом калия кровь ребенка сохраняла ро­зовый цвет.

Цель исследования: провести ХТА представленных биообъектов с использованием химических экспресс-методов.

Приведите схему химико-токсикологического анализа представленных биообъектов, опираясь на методологию системного химико-токсикологи­ческого анализа (СХТА).

Лаборатория работает согласно принципам GLP и оснащена аналити­ческим оборудованием в соответствии с современными рекомендациями TIAFT.

ПРИМЕЧАНИЕ

При решении задачи следует:

• представить информацию о выборе биообъекта, используя знания фи­зико-химических свойств токсикантов, их токсикокинетики и мета­болизма;

• представить информацию о способе пробоподготовки и изолирова­ния (выделения) токсикантов, используя знания физико-химических свойств токсикантов и учитывая Ваш выбор последующих методов анализа;

• выбрать химические экспресс-методы определения ток­сикантов, учитывая их чувствительность и специфичность, преиму­щества и недостатки;

• обосновать выбор способа количественного определения, поэтапно изложить схему и процедуру его проведения, привести математичес­кие формулы; если необходимо, то произвести вычисления;

• представить интерпретацию полученных количественных результатов;

• дать заключение об обнаружении токсикантов.

Литература

1. Токсикологическая химия: метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие + СD/ под ред. Н.И. Калетиной. – М., 2008. – 1016 с. Переплет.

2. Токсикологическая химия: учебник / под ред. Т.В. Плетеневой. – 2-ое изд. – М., 2008. – 512 с. Переплет.

3. Крамаренко В. Ф. Токсикологическая химия / В. Ф. Крамаренко. - Киев, «Высшая школа», 1989.- 272с.

4. Швайкова М.Д. Токсикологическая химия/ М.Д. Швайкова. - М., «Медицина», 1975.-376 с.

Контрольные вопросы:

1. Определение СО в крови

2. Предварительные методы исследования (химические).

3. Экспресс-тесты на определение СО в крови

4. Другие химические пробы.

5. Заключение об обнаружении токсикантов. Судебно-медицинская оценка результатов определения.

ПРИЛОЖЕНИЕ

1. Определение СО в крови

Для определения СО в крови можно использовать различные методы, включая предвари­тельные пробы, спектрофотометрию, газовую хроматографию и специальные методы. Опреде­ление СО в крови проводят либо по СО, либо выделяют из пробы крови газобразную смесь СО, СО,. О,, N.. измеряют количество газа и тем или иным способом устанавливают содержа­ние в нем оксида углерода (II).

Предварительные методы исследования (химические). При выполнении нижеуказанных реак­ций параллельно исследуют два образца — кровь, не содержащую НbСО. и кровь пострадавшего при отравлении. В образцы добавляют одинаковые объемы реактивов и наблюдают за измене­нием окраски. Изменение окраски происходит только в образцах с нормальной кровью. Окраска образцов крови пострадавшего при отравлении не изменяется или изменяется незначительно.

Экспресс-тесты, или пробы, проводят непосредственно на месте происшествия или сразу после поступления пострадавшего в клинику. Цель — быстро установить наличие НbСО.

Тест 1. К 15 мл воды добавляют 1—2 капли исследуемой крови и отдельно донорскую кровь, пробирки встряхивают. В норме проба светло-розового цвета, при наличии НЬСО — вишне­во-красного. Затем добавляют 5 капель 20% раствора гидроксида натрия. После энергичного встряхивания при наличии НЬСО в течение нескольких секунд сохраняется светло-розовый цвет (концентрация НbСО не менее 20%). Если светло-розовый цвет перейдет в соломенно-желтый, в крови нет НbСО или его содержится менее 20%. Проводят контрольную пробу с донорской кровью.

Метаболизм и определение токсикантов различных химических групп... 755

Тест 2. В две пробирки вносят по 10 мл дистиллированной воды, затем в первую — 5 капель анализируемой пробы (кровь) и 5 капель свежеприготовленного раствора сульфида аммония, во вторую — 5 капель донорской крови и 5 капель свежеприготовленного раствора сульфида аммония. После осторожного перемешивания добавляют в обе пробирки по 2—3 капли 30% раствора уксусной кислоты. Анализируемая проба при наличии НЬСО окрашивается в крас­ный цвет, контрольная проба (донорская) — в грязно-зеленый.

Тест 3. К 5 мл крови (анализируемой пробы и донорской), разбавленной в 100 раз дистил­лированной водой, добавляют 5 капель концентрированного раствора сульфида меди. Дли­тельно и энергично встряхивают. Кровь, содержащая НЬСО. красного цвета, не содержащая — зеленого.

Тест 4. К 1 капле крови (анализируемой пробы и донорской) добавляют 40 капель воды и 5 капель 40% раствора фенилгидразина. Кровь, содержащая НЬСО. светло-красная, не содер­жащая НЬСО — темно- или черно-красная.

Тест 5. К 5 мл крови (анализируемой пробы и донорской), разведенной 100 раз, добавляют 5 капель 1% раствора гексаиноферрата (III) калия. Кровь, содержащая НЬСО, вишневого цвета, не содержащая — светло-коричневого (железо гемоглобина окисляется до Ре").

Другие химические пробы. Исследуемую кровь и контрольную кровь из печени животного в количестве 2—5 мл разбавляют 100 мл воды. При этом кровь, содержащая НЬСО. имеет ярко-красный цвет, контрольная кровь — буроватый оттенок.

Затем проводят следующие химические реакции.

• К разбавленным в соотношении 1:100 пробам испытуемой и контрольной крови прибав­ляют равные объемы 30% раствора гидроксида натрия. Кровь, содержащая оксид углерода, сохраняет розовую окраску, контрольная принимает зеленовато-черную окраску.

• К разбавленным в соотношении 1:4 пробам испытуемой и контрольной крови прибавляют приблизительно по 3 объема 1% раствора танина и взбалтывают. Кровь, содержащая оксид углерода, сохраняет розовый цвет; контрольная принимает серую окраску.

• К разбавленным в соотношении 1:20 пробам испытуемой и контрольной крови прибавляют равные объемы 20% раствора гексаиноферрата (III) калия и 2 мл разведенной 1:2 уксус­ной кислоты. Кровь, содержащая оксид углерода, сохраняет розовый цвет, контрольная приобретает бурую окраску.

• Контрольная кровь, смешанная с 5 частями раствора основного ацетата свинца, принимает грязно-зеленую окраску, кровь, содержащая оксид углерода, сохраняет свой цвет.

• Контрольная кровь после разбавления формалином спустя короткое время принимает гряз­но-бурую окраску, кровь, содержащая оксид углерода, сохраняет красный цвет в течение нескольких недель.

Реакции можно проводить, смочив разведенной кровью белую фильтровальную бумагу, на­нося затем на нее реактивы. Описанные реакции малопригодны для обнаружения малых ко­личеств НЬСО в крови.

Судебно-медицинская оценка результатов количественного определения карбоксигемоглобина и карбоксимиоглобина

• Содержание НbСО в крови зависит прежде всего от концентрации СО во вдыхаемом возду­хе и времени его воздействия.

• Концентрация НbСО тем выше, чем выше парциальное давление СО в альвеолярном воз­духе по сравнению с парциальным давлением О,.

• За один и тот же промежуток времени при прочих равных условиях СО поступает в орга­низм тем больше, чем больше минутный объем дыхания.

• Соответствие между концентрацией НЬСО и тяжестью отравления имеется не всегда. Это особенно отчетливо проявляется при групповых отравлениях.

• Смертельная концентрация НbСО в крови составляет в среднем около 60%, но может коле­баться от 40 до 80% и более, что обусловлено влиянием внешних условий и особенностями организма.

• Тяжесть острого отравления СО усиливается при низком барометрическом давлении, повы­шенной влажности, высокой или низкой температуре воздуха, усиленной мышечной работе.

• При смертельном отравлении порог насыщения НbСО у пожилых людей ниже. У женщин отравление протекает легче, чем у мужчин. Беременные женщины более чувствительны, чем небеременные. Лица, подвергавшиеся хроническому воздействию СО, тяжелее переносят острое отравление.

• Острое отравление проходит тяжелее у лиц, страдающих заболеваниями легких, сердца, нарушениями кровообращения, неврастенией, ожирением, анемией, перенесших черепно-мозговую травму, во время инфекционных заболеваний.

• Данные о влиянии алкогольной интоксикации на тяжесть отравления СО противоречивы.

• При сочетанном отравлении СО и оксидами азота, СО,, парами бензина, НСN (например, в результате пожара или технологического процесса) к смертельному исходу может привести относительно невысокая концентрация НbСО.

• Необходимо учитывать очень разную чувствительность отдельных лиц к действию СО. При групповых отравлениях у некоторых лиц, находящихся в коматозном состоянии, содержа­ние НЬСО бывает гораздо ниже, чем у лиц, перенесших тяжелое отравление и при этом чувствующих себя удовлетворительно.

• Изредка встречаются атипичные формы отравления, протекающие с быстрой потерей созна­ния или тяжелыми расстройствами дыхания и сердечной деятельности (СО в крови 30%).

• Количественное содержание НbСО в крови, по-видимому, может зависеть от того, из како­го участка кровеносной системы взята для исследования кровь. При вскрытии трупа кровь для исследования надлежит брать из правого предсердия (при наличии в нем крови) или бедренной вены либо из другого магистрального сосуда, а также из грудной или брюшной полости (при наличии излившейся в нее крови).

• В некоторых случаях целесообразно измерять содержание НbСО в гематомах и кровоподте­ках, так как оно может служить одним из признаков определения времени их возникнове­ния. Считают, что гематомы, в которых содержание НbСО менее 10%. возникли до воздейс­твия СО. Если содержание НbСО в них превышает 20%, то образование гематом связано с отравлением СО.

• В воздухе промышленных городов постоянно содержится СО, вследствие чего в крови жи­телей обычно находится некоторое количество НbСО. Между концентрацией НbСО и степенью загрязнения воздушной среды СО отмечена прямая зависимость. Например, в крови регулировщиков уличного движения содержание НbСО может достигать 22%.

• При освидетельствовании лиц, перенесших отравление СО, нужно иметь в виду, что при интоксикации средней степени в течение первого часа выделяется около половины посту­пившего в организм СО. Полное освобождение организма от СО наступает спустя 10—12 ч, но может затягиваться и до 24 ч.

• При обнаружении в крови трупа менее 60% НbСО необходимо проанализировать патологоанатомические данные и обстоятельства отравления, чтобы обосновать заключение о причине смерти.

• При повышении поступления СО в организм соответственно увеличивается содержание СО в тканях.

• Необходимость в исследовании скелетных мышц трупа или его частей возникает в очень редких случаях (например, при гнилостных изменениях резко обескровленных частей тру­па) потому, что для определения НbСО спектрофотометрическим методом необходим всего 1 мл крови из свежего или хранившегося до 10 дней биологического материала.