- •Глава II полностью посвящена структуре генома человека, новой
- •Глава IV целиком посвящена описанию молекулярных методов де-
- •Глава VIII касается искусственного создания генетических мо-
- •Глава III
- •Раздел 3.1 Классификация генетических карт, оценка
- •Раздел 3.2 Соматическая гибридизация, цитогенетический
- •Раздел 3.3 Генетические индексные маркеры.
- •Раздел 3.4 Хромосом-специфические библиотеки генов,
- •Раздел 3.5 Позиционное клонирование, прогулка и прыжки
- •Раздел 3.6 Каталог генов и генных болезней МакКьюсика.
- •Глава X.
- •Раздел 10.1. Хромосомная локализация и принципы класси-
- •Раздел 8.1 Хромосомная локализация и принципы классифи-
- •Раздел 10.2. Метаболические дефекты лизосомных фермен-
- •Раздел 10.3. Болезни экспансии, вызванные "динамически-
- •Раздел 10.4. Моногенные наследственные болезни, диаг-
- •Глава I
- •Раздел 1.1 Общие представления, центральная догма, гене-
- •Глава VI.
- •Раздел 6.1 Дифференциальная активность генов, выбор
- •Раздел 6.2 Анализ регуляторных элементов гена, изоляция
- •Раздел 6.3 Анализ трансляции, днк-экспрессионные систе-
- •Глава II). После секвенирования кДнк можно, исходя из гене-
- •Глава II.
- •Раздел 2.1. Определение генома и его основных элемен-
- •Раздел 2.2. Повторяющиеся последовательности днк.
- •Раздел 2.3 Мультигенные семейства, псевдогены, онкоге-
- •Раздел 2.4 Современное определение понятия "ген",
- •Раздел 2.5 Изменчивость генома, полиморфные сайты рест-
- •Раздел 2.6 Вариабильные микро- и минисателлитные днк.
- •Раздел 2.7 Мобильность генома, облигатные и факульта-
- •Раздел 2.8 Изохоры, метилирование, гиперчувствительные
- •Глава II.
- •Раздел 2.1. Определение генома и его основных элемен-
- •Раздел 2.2. Повторяющиеся последовательности днк.
- •Раздел 2.3 Мультигенные семейства, псевдогены, онкоге-
- •Раздел 2.4 Современное определение понятия "ген",
- •Раздел 2.5 Изменчивость генома, полиморфные сайты рест-
- •Раздел 2.6 Вариабильные микро- и минисателлитные днк.
- •Раздел 2.7 Мобильность генома, облигатные и факульта-
- •Раздел 2.8 Изохоры, метилирование, гиперчувствительные
- •Раздел 8.1. Генетические линии животных.
- •Раздел 8.2. Трансгенные животные.
- •Раздел 8.3. Экспериментальное моделирование.
- •Раздел 8.4. Конструирование модельных генетических ли-
- •Раздел 8.5. Методы направленного переноса генов.
- •Глава iy.
- •Раздел 4.1 Мутантные аллели, характеристика и типы му-
- •Раздел 4.2. Генетическая гетерогенность наследственных
- •Раздел 4.3 Номенклатура мутаций.
- •Раздел 4.4. Идентификация структурных мутаций, изоляция му-
- •Раздел 4.5. Первичная идентификация точечных мутаций.
- •Раздел 4.6. Молекулярное сканирование известных мутаций.
- •Глава I. Структура и методы анализа днк.
- •Раздел 5.1 Полиморфизм, неравновесность по сцеплению.
- •Раздел 5.3 Частоты спонтанного мутагенеза.
- •Раздел 5.3. Эндогенные механизмы возникновения мутаций.
- •Раздел 5.4 Механизмы поддержания и распространения му-
- •Глава VII.
- •Раздел 7.1 Прямые и косвенные методы молекулярной диаг-
- •Раздел 7.2. Днк-диагностика при различных типах насле-
- •Раздел 7.3. Группы риска, поиск гетерозиготных носите-
- •Раздел 7.4 Особенности применения молекулярных методов
- •Раздел 7.5 Доимплантационная диагностика, точность прог-
- •Глава IX.
- •Раздел 9.1 Определение, историческая справка, програм-
- •Раздел 9.2. Типы генотерапевтических вмешательств, вы-
- •Раздел 9.3 Методы генетической трансфекции в генной те-
- •Раздел 9.4. Конструирование векторных систем и совер-
- •Раздел 9.5 Генотерапия моногенных наследственных забо-
- •Раздел 9.6. Генотерапия ненаследственных заболеваний:
- •Раздел 9.7. Некоторые этические и социальные проблемы
Раздел 8.3. Экспериментальное моделирование.
Другой вариант биологического моделирования основан на
получении животных с определенными очень специфичными, но
ненаследственными изменениями. Эти животные также могут быть
использованы для анализа молекулярных основ патогенеза и
разработки методов адекватного лечения. Рассмотрим несколько
примеров подобного экспериментального моделирования.
Описанная технология трансгеноза (введение генов в про-
нуклеус) может быть использована, в частности, для направ-
ленного получения животных с избирательными дефектами
(уродствами) тех или иных тканей и органов. Метод заключает-
ся в возможности селективной элиминации тех специфических
типов клеток, которые отсутствуют или дефектны у больных с
моделируемым типом заболевания. Такие животные могут быть
получены при иньекции в зародыш рекомбинантной ДНК, содержа-
щей какой-либо цитотоксический ген, например, ген дифтерий-
ного токсина, находящийся под контролем работающих в опреде-
ленных типах клеток регуляторных элементов ДНК. При актива-
ции этих контролирующих элементов на определеной стадии раз-
вития экспрессия токсического гена приводит к избирательной
гибели всей специфической популяции клеток, то есть такая
система действует как очень точный скальпель.
Дальнейшая модификация метода заключается в использова-
нии для трансгеноза условно летального гена, каким является,
например, ген тимидинкиназы вируса Герпеса. Клетки,
экспрессирующие этот ген, функционируют совершенно нормаль-
но. Однако, на любой стадии онтогенетического развития можно
вызвать их селективную гибель при введении животному ганцик-
ловира - противогерпесного препарата. Эта система дает боль-
ше возможностей для экспериментального анализа роли специфи-
ческих клонов клеток в процессе нормального развития, а так-
же для изучения патологичеких процессов, связанных с гибелью
этих клеток. Подобная методология используется также при
разработке генотерапевтических подходов для лечения некото-
рых ненаследственных, в частности онкологических заболева-
ний (см Главу IX).
Весьма многообещающим методом моделирования представля-
ется направленное выключение работы определенных генов путем
введения в доимплантационные зародыши антисмысловых мРНК.
Такой подход был применен, в частности, при попытке модели-
рования болезни Гоше - лизосомного заболевания, обусловлен-
ного дефицитом бета-глюкуронидазы (Bevilacqua et al., 1988).
Естественно, что в этом случае выключение экспрессии гена
носит транзиторный характер, то есть моделью, по-сути, явля-
ется само животное - реципиент антисмысловой мРНК матрицы.
Другой пример экспериментального моделирования основан
на пересадке тканей или клеток атимусным иммунодефицитным
мышам nu/nu. У мышей этой линии в связи с отсутствием тимуса
и выраженным врожденным иммунодефицитом не происходит оттор-
жение трансплантированных чужеродных тканей. Более того, у
таких животных может происходить дифференцировка трансплан-
тированных подкожно эмбриональных зачатков и регенерация пе-
ресаженных кусочков тканей из различных органов других видов
животных и человека. Так например, кусочки трахеи крысы с
нанесенными на них клетками бронхогенного эпителия человека,
имплантированные подкожно атимусным мышам, формируют струк-
туру поверхностного эпителия, сходную с той, которая имеется
в бронхах человека. Именно таким путем мыши nu/nu были ак-
тивно использованы для анализа экспрессии мутантных вариан-
тов гена муковисцидоза человека, а также для испытания эф-
фективности коррекции этого генетического дефекта с помощью
методов генотерапии. В последнем случае мутантные эпители-
альные клетки пациентов с муковисцидозом вначале подвергали
трансфекции ретровирусными или аденовирусными векторами, не-
сущими, наряду с геном - репортером, полноразмерную кДНК
нормального гена муковисцидоза. Относительная простота по-
добных моделей и возможность генетического манипулирования с
клетками человека до их трансплантации атимусным мышам дела-
ют этот подход весьма привлекательным для решения многих
экспериментальных вопросов. Основные недостатки таких моде-
лей связаны с трудностями содержания и разведения атимусных
мышей и их низкой жизнеспособностью. Генетические линии жи-
вотных в этом отношении имеют значительные преимущества.