Лабораторная работа № 6. Вычисление цветового показателя

Теоретическая часть. Зная число эритроцитов в крови и содержание в ней гемоглобина, можно высчитать, в какой мере им насыщен каждый эритроцит. Есть разные способы установления этой величины. Первый — вычисление цветового показателя (ЦП). Это условная величина, выводимая из соотношения гемоглоби­на и числа эритроцитов. В норме эта величина приближается к 1. Число меньшее единицы, указывает на недостаточное насыщение эритроцита гемоглобином; число, большее 1, встречается в тех случаях, когда эритроциты имеют объем больше нормального. Перенасыщения гемоглобином не бывает; нормальный эритро­цит насыщен им до предела.

В настоящее время в соответствии со стремлением выражать константы крови в абсолютных величинах вместо цветового показателя высчитывают весовое содержание гемоглобина в эритроцитах. В норме 1 эритроцит содержит 33 пг гемоглобина.

Цель работы. Определение степени насыщения эритроцитов гемоглобином.

Ход работы. Вычислите ЦП, разделив концентрацию гемоглобина, выраженную в г/л, на число из первых трех цифр количества эритроцитов в 1 мкл крови с последующим умножением полученного частного на 3:

Определите весовое содержание гемоглобина в эритроците, разделив содержание гемоглобина в 1 л на число эритроцитов в том же объеме.

Оформление отчета. Сравните полученные результаты с нормой.

Вывод. Оцените насыщение эритроцитов гемоглобином в исследуемой крови.

Лабораторная работа № 7. Изучение различных видов гемолиза

Теоретическая часть. Процесс разрушения эритроцитов, при котором гемогобин выходит их них в плазму, называют гемолизом. Различают: физио­логический гемолиз — постоянно протекающий в организме есте­ственный процесс разрушения старых эритроцитов (около 200 млрд эритроцитов в сутки); патологический гемолиз — возникает в организме при действии экзо- и эндогенных повреждающих факто­ров и сопровождается усиленным разрушением нормальных эрит­роцитов. Кровь после гемолиза эритроцитов представляет собой прозрачную жидкость красного цвета («лаковая кровь»). Гемолиз может возникать под влиянием ряда факторов разной природы. Механический гемолиз — вследствие деформации эритроцитов, например при прохождении эритроцитов по узким капиллярам, при интенсивном встряхивании или перемешивании крови. Тер­мический гемолиз — при действии высоких (более 50°С) или низ­ких температур, например, при замораживании и разморажива­нии крови. Химический гемолиз — при действии на мембраны эрит­роцитов химических веществ (например, при отравлении): нит­ратов и нитритов, анилиновых красителей, кислот (соляная, ук­сусная), эфира, бензина, этилового спирта и др. Биологический гемолиз — при действии токсинов змей, членистоногих, микро­организмов и др., а также под влиянием антител-гемолизинов (иммунный гемолиз), например при переливании несовместимой крови. Осмотический гемолиз наступает при помещении эритроцитов в раствор с низким осмотическим давлением, в результате разницы осмотического давления раствор поступает внутрь эритроцита, он набухает и происходит разрыв мембраны.

Эритроциты обладают определенной осмотической устойчивостью (резистентностью) по отношение к гипотоническим растворам NаС1. Резистентность эритроцитов одной и той же крови неодинакова. Молодые эритроциты значительно устойчивее старых. Поэтому различают максимальную и минимальную осмотическую резистентность эритроцитов. Минимальная резистентность определяется концентрацией NaС1, которая предшествует началу гемолиза наименее устойчивых эритроцитов (для эритроцитов крови человека 0,48 % NaС1). Максимальная резистентность - концентрация раствора NaС1, предшествующая полному гемолизу (0,32 % NаС1 )

Цель работы. Изучение влияния различных химических веществ на эритроциты. Определение осмотической резистентности эритроцитов исследуемой крови.

Оборудование и материалы. 14 пробирок, пипетка на 2 мл, глазная пипетка, спиртовка, цитратная кровь (2-3 мл), нашатырный спирт, этиловый спирт, 1 % р-р уксусной кислоты, NaCl разной концентрации от 0,9 до 0,1 %.

Задание № 1. Изучение влияния различных химических веществ на эритроциты (химический, осмотический и термический гемолиз)

Ход работы. Установите пробирки в штатив, пронумеруйте. В первые четыре пробирки налейте по 2 мл 0,9 % NaCl, затем в первую добавьте 2 капли уксусной кислоты, во вторую – 2 капли нашатырного спирта, в третью - 2 капли этилового спирта. В пятую пробирку налейте 2 мл дистиллированной воды. Далее в каждую из пяти пробирок добавьте по 1-2 капли крови, перемешайте содержимое. Результат в пробирках №1, 2, 3 и 5 наблюдайте через 30 мин. Для наблюдения термического гемолиза пробирку №4 нагрейте на спиртовке.

Оформление отчета. Данные наблюдения занесите в таблицу и проанализируйте механизмы наблюдаемого гемолиза:

№	Содержимое пробирки	Наличие гемолиза («+» или «-»)
1	Физ. р-р (2 мл) + 2 капли СН3ОН
2	Физ. р-р (2 мл) + 2 капли NH4OH
3	Физ. р-р (2 мл) + 2 капли C2H5OH
4	Физ. р-р (2 мл) + нагревание
5	Дистиллированная вода (2 мл)

Вывод. Перечислите основные факторы, приводящие к гемолизу эритроцитов.

Задание № 2. Определение осмотической резистентности эритроцитов

Ход работы. В пробирки с № 6 по № 14 наливаем по 2 мл NaCl различной концентрации (см. таблицу), после чего добавляем в каждую из них по 2 капли цитратной крови. Содержимое пробирок перемешиваем, результат наблюдаем через 40 мин. Если осадок эритроцитов достаточно большой, а слой жидкости слегка окрашен – произошел частичный гемолиз. Если же осадка нет, а жидкость прозрачна и интенсивно окрашена («лаковая кровь») – произошел полный гемолиз.

Оформление отчета. Результаты опыта занесите в таблицу. Постройте кривую осмотической резистентности.

№ пробирки	6	7	8	9	10	11	12	13	14
Концентрация NaCl	0,8	0,7	0,6	0,55	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1
Степень гемолиза

Степень гемолиза: «-» - отсутствует; «+» - частичный, выражен слабо; «++» - частичный, выражен хорошо; «+++» - полный.

Вывод. Сравните полученные результаты с нормой. Оцените степень осмотической резистентности исследуемой крови.