Работа №2.

Определение холестерина в ЛПВП, ЛПНП и ЛПОНП. Расчет индекса атерогенности.

Клинико-диагностическое значение метода.

Для выявление атеросклероза или прогнозирования вероятности его развития чаще всего бывает недостаточно определения уровня холестерина -липопротеидов в крови пациентов. Особую диагностическую ценность здесь имеет расчет индекса атерогенности, который в норме у здоровых людей варьирует в пределах 2-4.

,

ПРИНЦИП МЕТОДАоснован на осаждении ЛПНП и ЛПОНП раствором МgСl₂на 4% фосфорно-вольфрамовой кислоте и определении содержания ХС в цельной сыворотке крови и фракции ЛПВП. По разности рассчитывают содержание ХС в объединенной фракции ЛПНП и ЛПОНП.

ХОД РАБОТЫ.

1. К 1,0 мл сыворотки крови прилить 0,1 мл 0,5 М МgCl₂на 4% водном растворе фосфорно-вольфрамовой кислоты.

2. Инкубировать в течение 30 мин при 4⁰С (в холодильнике) с целью полного выпадения в осадок ЛПНП и ЛПОНП.

3. Центрифугировать пробу в течение 15 мин при 3000 об/мин.

4. В полученном супернатанте определить ЛПВП-ХС, а в цельной сыворотке общий ХС. По разности рассчитать содержание ХС во фракции ЛПНП +ЛПОНП.

Клинико-диагностическое значение. Повышение коэффициента наблюдается при гипертонической болезни, даже в начальных стадиях, ишемической болезни сердца (ИБС), всех формах и стадиях атеросклероза.

Задания для контроля уровня сформированности компетенций в учебное время.

1. Молекула холестерола легко встраивается в бислой мембраны. Существует механизм защиты клеток от избытка ХС. Это реакция его этерификации. Образованный продукт не удерживается в мембране. Как изменится содержание ХС в бислое при снижении активности этого фермента? Для решения задачи:

а) напишите схему реакции этерификации ХС, укажите фермент;

б) укажите, какие изменения в структуре мембран наблюдаются при этом нарушении;

в) объясните, как повышение содержания ХС будет влиять на функционирование белков мембраны.

2.Выберите из перечисленных соединений субстраты и промежуточные продукты

синтеза холестерина и расположите их в порядке образования, соединив выбранные номера стрелками:

1)малонил-КоА

2)ацетил-КоА

3)гидроксиметилглутарил-КоА

4)мевалоновая к-та

5)сквален

6)ацетоацетил-КоА

7)прогестерон

8) ланостерин

9)холестерин

3. Напишите реакцию, лимитирующую скорость синтеза холестерина. Укажите фермент и класс фермента. Выберите механизмы, которые используются в организме для изменения его активности:

А. Аллостерическая регуляция.

Б. Диссоциация олигомера на регуляторные и каталитические протомеры.

В. Фосфорилирование и дефосфорилирование.

Г. Частичный протеолиз.

Д. Изменение количества фермента.

4. Фермент лецитин-холестеринацилтрансфераза (ЛХАТ) катализирует реакцию эстерификации ХС путём переноса на него остатка жирной кислоты с лецитина. Напишите химизм этой реакции. Как называются продукты этой реакции. Какие нарушения будут иметь место при снижении активности этого фермента.

Этапы проведения занятия:

• Вводная беседа – 5 мин

• Обсуждение теоретических вопросов - 45 мин

• Выполнение лабораторной работы и заданий аудиторной СДС – 30 мин

• Подведение итогов занятия - 5 мин

• Общие и индивидуальные задания на СДС во вне учебное время – 5 мин

Оценивание уровня сформированности компетенций обучающихся проводится по балльно – рейтинговой системе.

Модуль III: Метаболизм липидов

Практическое занятие №19

Тема: Регуляция и биохимические основы патологии обмена липидов.

Мотивация изучения темы. Атеросклероз – полифакториальное заболевание сосудов. Существуют несколько гипотез его этиологии и патогенеза (холестериновая, тромбогенная, аутоиммунная, перекисная). Все они связаны с внедрением липопротеинов и холестерина в сосудистую стенку. Изучение биохимических аспектов ожирения, атеросклероза, дислипопротеинемий играет существенную роль в профилактике и лечении этих страданий.

Цели занятия.

Общая цель:изучения темы направлено на формирование компетенций по ФГОС специальности060105 Медико-профилактическое(ПК-31) через формирование знаний об основных регуляторных механизмах липидного метаболизма, нарушениях обмена липидов и метаболических и фармакологических подходах к их профилактике.

Конкретные цели и задачи.

После изучения темы студент должен:

«Знать»:

1. Механизмы регуляции липидного обмена

2. Влияние на обмен липидов факторов образа жизни (питание, физическая нагрузка)

3. Биохимические основы патологии обмена липидов

«Уметь»:

Применять знания об обмене липидов для понимания основ рационального питания, профилактики нарушений липидного обмена.

«Владеть»:

Основными терминами и понятиями: хиломикронемии, β-липопротеидемии, абеталипопротеидемии, гиперхолестеринемия, гипохолестеринемия, дислипопротеинемия, липемия (гиперлипемия)

Вопросы, изученные на предшествующих дисциплинах и необходимые для освоения темы.

Органическая химия: ненасыщенные жирные кислоты, эндоперекиси жирных кислот, стероиды.

Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию: