- •(Экспериментальное исследование)
- •Список сокращений и аббревиатур, использованных в работе
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы) 10
- •Глава 2. Материалы и методы исследования 25
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации 41
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма 55
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки 79
- •Введение
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы)
- •Проблема постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.1. Клинико-лабораторные проявления синдрома постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.2. Способы профилактики и коррекции гипоспленических послеоперационных расстройств
- •Ксенотрансплантация свиных органов и тканей
- •1.3. Технология получения материала для ксенотрансплантации
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика экспериментального материала
- •2.2. Характеристика методов исследования
- •2.2.1. Техника оперативных вмешательств
- •2.2.1.1. Ложная операция
- •2.2.1.2. Спленэктомия
- •2.2.1.3. Экстраперитонеальная аутотрансплантация селезенки
- •2.2.1.4. Ксенотрансплантация клеток селезенки
- •2.2.2.Приготовление препаратов для ксенотрансплантации
- •2.2.2.1. Получение взвеси клеток селезенки
- •2.2.2.2. Приготовление питательной среды для инъекции
- •2.2.2.3 Ранотензиометрия
- •2.2.3. Методы лабораторного контроля
- •2.2.3.1.Определение биохимических показателей сыворотки крови
- •2.2.3.3. Исследование показателей системы гемостаза
- •2.2.3.4 Иммунологические методы исследований
- •2.2.3.5 Общеклиническое исследование крови
- •2.2.3.6 Бактериологические методы исследований
- •2.2.4. Методы морфологического исследования
- •2.3.Методы статистической обработки
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации
- •3.1.Технология выделения клеток селезенки
- •3.1.1 Дезагрегация ткани селезенки
- •3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток
- •3.1.3 Культивирование клеток селезенки новорожденной свиньи
- •3.2.Консервация клеток
- •3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации
- •3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма
- •4.1 Развитие постспленэктомического гипоспленизма в ходе эксперимента
- •4.2 Летальность в экспериментальных группах
- •4.2.1. Патоморфологическое исследование погибших животных
- •4.3. Морфологическая оценка эффектов трансплантации ткани селезенки в условиях гипоспленизма
- •4.3.1 Исследование структуры печени
- •4.3.2.Исследование структуры легких
- •4.4. Морфологическое исследование зон трансплантации
- •4.5. Результаты ранотензиометрических исследований
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки
- •5.1. Лабораторная оценка раннего гепатопротекторного эффекта ксенотрансплантации культуры клеток селезенки
- •5.2. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на белково-синтетическую функцию печени в раннем послеоперационном периоде
- •5.3. Изменения неспецифической резистентности организма у аспленизизированных животных под воздействием ксенотрансплантации клеток селезенки в раннем послеоперационном периоде
- •5.4. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на систему гемостаза в раннем периоде после индукции гипоспленизма
- •Заключение
- •Практические рекомендации
- •Список использованной литературы
Ксенотрансплантация свиных органов и тканей
Трансплантация- это замещение тканей или органов, отсутствующих или поврежденных патологическим процессом, собственными тканями или органами, либо взятыми из другого организма [141].
В последнее время нехватка донорских органов для пересадки привела к повышенному интересу к КТ [116,183,232,305,342].
Ни одно из препятствий, возникающих при обсуждении возможности КТ (иммунологические проблемы, философские и социальные факторы), не является абсолютным [138]. Комиссия по ксенотрансплантации при министерстве питания и лекарств США (FDA) и комиссия по ксенотраснплантации Великобритании (UKXIRA) готовы одобрить исследования по КТ человеку [138,185].
Более того, Всемирная организация здравоохранения и FDA рекомендовали всемерно поддерживать экспериментальные работы по ксенотрансплантации, но объявить мораторий на несколько лет на проведение клинических пересадок органов животных человеку [345].
Наиболее подходящим донором тканей и органов для пересадки является свинья [138,170,178,214,275,276,345,351,362].
Известно, что В-лимфоциты млекопитающих (человек, свинья, мышь, морская свинка) имеют структурную гомологию по аминокислотному составу на 73-83% [291,363].
Органы свиньи сходны с человеческими по размерам и физиологии, проблема их получения легко решаема [138].
В связи с возросшим в последнее время интересом к КТ, в литературе обсуждаются проблемы, связанные с возможной передачей реципиенту свиного ретровируса. До 1999 года не было ни одного сообщения о заражении свиным ретровирусом пациентов, которым была произведена КТ, даже через 12 лет после пересадки [345].
Зато обнаруживали микрохимеризм (присутствие свиных донорских клеток) у пациентов со сроками трансплантации до 8,5 лет [178,275].
Таким образом, реальная польза от КТ кажется большей, чем гипотетическая опасность заражения свиным ретровирусом [345].
Одним из преимуществ ксенотрансплантации перед аллотрансплантацией является возможность более детального обследования донора, так многие инфекции передаются при гемотрансфузии и аллотрансплантации: вирусы иммунодефицита человека, гепатита В и С, герпеса, а также туберкулез; всего этого можно избежать при использовании ксеногенных тканей [345].
В настоящее время широко внедрены в медицинскую практику КТ островков Лангерганса свиньи [112,271,285,286,308,344,356], разработана и нашла применение пересадка нервных клеток свиньи больным хроническими, резистентными к традиционным способам лечения, заболеваниями центральной нервной системы (например, болезнь Паркинсона, хорея Хантингтона, эпилепсия) [178]; проводят перфузию крови пациентов через культивированные свиные гепатоциты [97,345], для диализа используют свиные почки и селезенку [345].
Имеются сообщения о клинических испытаниях КТ гепатоцитов при острой печеночной недостаточности [138]. Клетки свиной печени и селезенки с хорошими клинико-лабораторными результатами апробированы при экстракорпоральной детоксикации у больных гепатоцеребральной дистрофией [97]. Подключение ксеноселезенки, широко распространенное в клинике для коррекции иммунных нарушений [28,29,111] и при тяжелой хирургической инфекции [26,53,82,99,118,126,130,137], можно рассматривать в качестве временной разовой КТ. При этом рассчитывают не только на лечебный эффект биологически активных веществ, но и на непосредственное воздействие живых ксеногенных клеток [29,111]. Гомогенаты селезенки свиньи с успехом применяют при лечении длительно не заживающих гнойных ран и трофических язв. Саногенный эффект объясняют антибактериальным, иммуностимулирующим и сорбционным действием ксеноматериала, нормализацией фагоцитарной активности, активацией иммунокомпетентных клеток грануляционной ткани и ее более быстрым развитием и созреванием, а также стимуляцией коллагеногенеза [6,108,109].
Клиническое применение свиной селезенки, безусловно, имеет разнообразное теоретическое обоснование. Так, на спленэктомированных собаках была показана эффективная элиминация микробов из циркулирующей крови, существенное повышение фагоцитарной активности лейкоцитов крови при ксеноспленоперфузии [111]. При этом улучшение показателей фагоцитоза было более выраженным при подключении селезенки свиньи, чем аллогенного органа [111].
Установлена стимуляция процессов пролиферации и внутриклеточной регенарации гепатоцитов крыс с токсическим гепатитом под воздействием сочетанного применения изолированных гепатоцитов и клеток селезенки свиньи [85,97].
Обратимся теперь к информации о выделении и консервации клеток селезенки.