5.3. Изменения неспецифической резистентности организма у аспленизизированных животных под воздействием ксенотрансплантации клеток селезенки в раннем послеоперационном периоде

Результаты определения уровня лейкоцитов и лейкоцитарной формулы представлены в табл. 5.4.

На 7-е сутки исследования во всех экспериментальных группах закономерно наблюдался лейкоцитоз, при этом уровень лейкоцитов в КГ-2 был максимальным по сравнению с другими экспериментальными группами (p_U<0,006), а в КГ-3 количество лейкоцитов было наименьшим, но достоверно отличалось от нормы (p_U=0,01). На 14-е сутки лейкоцитоз существенно уменьшился в ОГ-1 (p_W=0,006) и в ОГ-2 (p_W=0,004), а в КГ-1 и КГ-3 статистически значимых изменений не произошло. После выхода из эксперимента КГ-2 наибольшие показатели лейкоцитоза оставались в КГ-1 по сравнению с ОГ-1, ОГ-2 и КГ-3 (p_U=0,004). На 21-е сутки в ОГ-1 лейкоцитоз продолжал уменьшаться (p_W=0,004), а в ОГ-2 и КГ-1 произошло некоторое увеличение количества лейкоцитов в периферической крови. На последнем сроке исследования у животных всех групп содержание лейкоцитов в крови было существенно выше, чем в норме (р_U£0,01). Изменения лейкоцитарной формулы у животных экспериментальных групп в наибольшей степени происходили на 7-е сутки послеоперационного периода. В этом сроке исследования отмечен сдвиг лейкоцитарной формулы вправо у животных КГ-2, в меньшей степени затронувший ОГ-2, на фоне левонаправленного сдвига в КГ-3.

 

 

Таблица 5.4

Динамика уровня лейкоцитов периферической крови и лейкоцитарной формулы под влиянием ксенотрансплантации клеток селезенки (медиана, нижний и верхний квартили)

 

	Сутки	Экспериментальные группы
		ОГ-1	ОГ-2	КГ-1	КГ-2	КГ-3
Лейко-циты, х 109	7	13,1¨¨ Ä · ·· (12,9-13,9)	14,2¨ Ä· ·· (13,0-14,5)	11,9 ¨¨ Ä ·· (11,3-12,5)	22,0 ** Ä (20,3-23,0)	3,7 (3,4-4,0)
	14	7,8¨ Ä · (7,6-7,9)	8,1¨ Ä (7,9-8,3)	11,3 Ä (11,0-12,0)	-	3,7 (3,6-3,9)
	21	5,9 ¨ Ä (5,6-6,0)	8,7 ¨ Ä (5,4 –9,2)	12,6 Ä (10,8-14,0)	-	3,7 (3,2-4,2)
	Норма	3,2 (3,2-3,3)
П (%)	7	2,0 ¨¨ (2,0-2,0)	1,0 Ä (1,0-2,0)	2,0 ¨¨ (1,0-2,0)	0 Ä (0-1,0)	3,0 ·· (2,0-3,0)
	14	1,5 (1,0-2,0)	1,0 ¨ (0-1,0)	2,0 (2,0-3,0)	-	2,0 (1,0-2,0)
	21	1,0 (0-2,0)	1,0 ¨ (1,0-1,0)	1,5 (1,0-2,0)	-	1,5 (1,0-2,0)
	Норма	2,0 (1,0-2,0)
С (%)	7	48,5 ** ¨ Ä · (46,0-50,0)	59,5 ¨¨ Ä · ·· (55,0-61,0)	60,0 ¨¨ Ä · ·· (59,0-61,0)	52,0 Ä (47,0-57,0)	37,5 ·· (36,0-39,0)
	14	43,5** (42,0-49,0)	40,0 · (39,0-41,0)	44,0 · (40,0-46,0)	-	42,5 (41,0-43,0)
	21	40,0** (37,0-46,0)	29,0 (27,0-37,0)	36,0 (35,0-40,0)	-	37,0 (35,0-38,0)
	Норма	39,0 (38,0-40,0)
Э (%)	7	1,5 (1,0-2,0)	2,0 ¨¨ ·· (2,0-3,0)	2,0 (0-3,0)	1,0 (1,0-1,0)	1,0 (1,0-2,0)
	14	1,0 Ä (0-1,0)	1,0 Ä (0-1,0)	1,0 (1,0-2,0)	-	2,0 (2,0-2,0)
	21	2,5 (1,0-3,0)	2,0 (1,0-2,0)	2,0 (2,0-3,0)	-	2,0 (1,0-2,0)
	Норма	2,0 (2,0-2,0)
М (%)	7	4,5** Ä · ·· (2,0-5,0)	2,0¨¨ Ä · ·· (1,0-2,0)	3,0 ¨¨ Ä · ·· (3,0-4,0)	6,0 (6,0-7,0)	7,0 (6,0-8,0)
	14	7,0 ** (7,0-7,0)	5,0 ¨ · (5,0-6,0)	6,0 · (6,0-7,0)	-	6,5 (6,0-8,0)
	21	7,0** (7,0-8,0)	12,5 ¨ Ä (10,0-13,0)	9,0 Ä (8,0-11,0)	-	6,5 (5,0-8,0)
	Норма	6,5 (6,0-7,0)
Л (%)	7	42,0 ** ¨ Ä · (41,0-45,0)	35,5 Ä · ·· (34,0-36,0)	33,0¨¨ Ä · ·· (32,0-35,0)	38,5 Ä (36,0-46,0)	51,5 ·· (51,0-54,0)
	14	47,0** (42,0-48,0)	52,5 ¨ Ä (52,0-55,0)	46,5 (45,0-49,0)	-	47,0 (45,0-50,0)
	21	50,0 (46,0-52,0)	56,5 (47,0-59,0)	50,0 (47,0-50,0)	-	52,5 (51,0-57,0)
	Норма	51,0 (50,0-52,0)

Примечания к табл. 5.4: П – палочкоядерные нейтрофильные лейкоциты; С – сегментоядерные нейтрофильные лейкоциты; Э – эозинофильные лейкоциты; М – моноциты; Л – лимфоциты. * - значимые различия по критерию Манна –Уитни по сравнению с показателем в ОГ-1 (p_U£0,05); ** - по сравнению с ОГ-2; ¨ - по сравнению с КГ-1; ¨¨ - по сравнению с КГ-2; Ä - по сравнению с КГ-3; · - значимые различия по критерию Вилкоксона по сравнению с показателем в группе на 21 сутки (p_W£0,05); ·· - по сравнению с показателем в группе на 14 сутки (p_W£0,05) .

 

Было относительное увеличение количества сегментоядерных нейтрофилов, статистически значимо отличающееся от нормы с максимумом в КГ-1 и ОГ-2. Некоторое увеличение количества эозинофилов (более всего в ОГ-2). Выраженная моноцитопения, особенно в ОГ-2 и лимфопения во всех группах, кроме КГ-3.

На 14-е сутки исследования происходило снижение относительного количества сегментоядерных нейтрофилов, статистически значимое в ОГ-2 (p_W=0,004) и КГ-1 (p_W=0,006) с одновременным повышением их количества в КГ-3 (p_W=0,04). Количество эозинофилов уменьшилось в периферической крови животных ОГ-2 (p_W=0,007). Со стороны моноцитов происходило повышение их количества в ОГ-1 (p_W=0,004), ОГ-2 и КГ-1 (p_W=0,003), а в КГ-3 наблюдали некоторое их снижение. При этом количество моноцитов достигало нормы в ОГ-1 и КГ-3, а в двух других группах было ниже. Количество лимфоцитов в мазке периферической крови повышалось в ОГ-1, ОГ-2, КГ-1 (p_W<0,008) и, наоборот, уменьшалось в КГ-3.

На 21-е сутки у всех животных происходило дальнейшее снижение относительного количества сегментоядерных нейтрофильных лейкоцитов (статистически значимое в ОГ-2; p_W<0,008 и КГ-1; p_W<0,02). При этом количество сегментоядерных нейтрофилов оказалось сниженным по сравнению с нормой в ОГ-2 (p_U<0,02) и не имело значимых различий по сравнению с нормой в других группах. Описанные сдвиги лейкоцитарной формулы сопровождались синхронным увеличением удельного веса моноцитов в формуле крови, количество которых существенно увеличивалось к 21-м суткам в ОГ-2 и КГ-1 по сравнению с предыдущим сроком исследования и нормой (p_W=0,004, p_U=0,004 и p_W=0,02, p_U=0,04 соответственно). При анализе количества лимфоцитов в мазке крови оказалось, что к 21-м суткам их процентное отношение не отличается от нормальных величин ни в одной группе.

Динамические изменения уровней лейкоцитов венозной крови и относительного количества сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов в мазке крови представлены на рис. 5.4

Рис. 5.4. Динамика уровней лейкоцитов венозной крови и относительного количества сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов (медиана, верхний и нижний квартили).

 

Результаты исследования некоторых показателей неспецифической резистентности организма, а именно- фагоцитоза, представлены в табл. 5.5.

Таблица 5.5.

Показатели фагоцитоза (медиана, верхний и нижний квартили)

 

	Сутки	Экспериментальные группы
		ОГ-1	ОГ-2	КГ-1	КГ-2	КГ-3
ФИ (%)	7	57,0**¨¨ Ä ·· (56,0-58,0)	70,5¨¨ Ä · (68,0-712,0)	55,0** Ä · ·· (53,0-57,0)	38,0 Ä (37,0-38,0)	50,0 ·· (49,0-51,0)
	14	60,5** ¨ Ä · (59,0-61,0)	71,0¨ Ä · (69,0-71,0)	66,0 Ä · (65,0-67,0)	-	57,0 · (56,0-58,0)
	21	55,5 ¨ (50,0-57,0)	54,5¨ (54,0-55,0)	48,0 Ä (48,0-49,0)	-	53,5 (50,0-56,0)
	Норма	53,0 (53,0-54,0)
ФЧ	7	1,9**¨¨·/·· (1,7-1,9)	1,6Ä·/·· (1,6-1,6)	1,6*Ä·/·· (1,5-1,6)	1,6Ä (1,5-1,6)	2,0 (1,9-2,0)
	14	2,2**Ä (2,1-2,2)	2,0¨· (1,9-2,0)	2,2Ä· (2,0-2,2)	-	2,0 (2,0-2,0)
	21	2,2 **Ä (2,1 –2,3)	1,9 (1,8-1,9)	1,8 Ä (1,7-1,9)	-	2,0 (1,9-2,0)
	Норма	1,9 (1,9-1,9)
НСТсп, (%)	7	3,5 ¨¨ (3,0-4,0)	4,0¨ (4,0-4,0)	3,0* ·/·· (2,0-3,0)	2,0**Ä (2,0-3,0)	5,0 (4,0-5,0)
	14	4,0 ¨Ä (3,0-4,0)	4,0¨ (4,0-4,0)	5,5 (5,0-6,0)	-	5,0 (4,0-5,0)
	21	4,0 (4,0-5,0)	4,0¨ (3,0-4,0)	5,0 (4,0-5,0)	-	5,0 (4,0-6,0)
	Норма	4,0 (4,0-5,0)
НСТинд. (%)	7	11,0¨¨Ä·/·· (9,0-11,0)	10,5 ¨Ä·· (9,0-11,0)	2,0*·/·· (2,0-3,0)	1,0**Ä (1,0-2,0)	17,5 (16,0-18,0)
	14	16,5**¨ (16,0-17,0)	7,0¨Ä· (6,0-7,0)	9,0Ä· (8,0-10,0)	-	14,5 (14,0-16,0)
	21	16,5¨ (16,0-18,0)	15,5 (11,0-15,0)	11,0Ä (10,0-12,0)	-	15,0 (14,0-17,0)
	Норма	15,0 (14,0-16,0)

Примечания: * - значимые различия по критерию Манна –Уитни по сравнению с показателем в ОГ-1 (p_U£0,05); ** - по сравнению с ОГ-2; ¨ - по сравнению с КГ-1; ¨¨ - по сравнению с КГ-2; Ä - по сравнению с КГ-3; · - значимые различия по критерию Вилкоксона по сравнению с показателем в группе на 21 сутки (p_W£0,05); ·· - по сравнению с показателем в группе на 14 сутки (p_W£0,05) .

 

Фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоцитов на 7-е сутки эксперимента существенно снижалась (p_U=0,004) у животных КГ-2, в то же время этот показатель был существенно повышен в ОГ-2 (p_U£0,008) по сравнению с другими группами. Фагоцитарное число у животных ОГ-2 и КГ-1 существенно снижалось по сравнению с КГ-3 и ОГ-1 (p_U£0,03). На 14-е сутки эксперимента происходило увеличение фагоцитарной активности нейтрофилов во всех группах (статистически значимое в ОГ-1, КГ-1 и КГ-3; p_W£0,05), что сопровождалось и существенным увеличением фагоцитарного числа по сравнению с предыдущим показателем в ОГ-1, ОГ-2 и КГ-1 (p_W£0,05). В КГ-3 повышение фагоцитарного числа не происходило, однако величины этого показателя в КГ-3, как и в ОГ-1 и КГ-1 были существенно выше нормы (p_U£0,04). На 21-е сутки наблюдали существенное снижение фагоцитарной активности во всех экспериментальных группах (p_W£0,02). При этом показатель ОГ-1 оставался существенно более высоким по сравнению с нормой (p_U=0,004), а в других группах таких различий не было. ФЧ в ОГ-1 не изменялось на 21-е сутки и было существенно выше нормы, как и в КГ-3, а в ОГ-2 и КГ-1 уменьшалось до нормальных величин.

При оценке величины спонтанного теста с НСТ на 7-е сутки выявлено существенное повышение в КГ-3 с выраженной депрессией в КГ-2 по сравнению с нормой и показателями других групп (p_U£0,04). В дальнейшем (21-е сутки) этот показатель оставался повышенным в КГ-3 по сравнению с ОГ-1 (p_U=0,02). Отметим существенное увеличение показателя в КГ-1 на 14-е сутки (p_W=0,003) при незначимых изменениях в ОГ-1, ОГ-2 и КГ-3. На 21-е сутки результаты спонтанного теста с НСТ не имели статистически значимых различий с нормальными величинами ни в одной группе.

Реакция активированного теста с НСТ на 7-е сутки выявила существенное снижение этого показателя у всех спленэктомированных животных по сравнению с нормой (p_U£0,03) при одновременном увеличении в КГ-3 (p_U=0,02). При этом в ОГ-1 и ОГ-2 результаты активированного НСТ теста были достоверно более высокими, чем в КГ-1 (p_U£0,004). На 14-е сутки результаты теста статистические значимо увеличивались в ОГ-1 и КГ-1 (p_W£0,009) и снижались в ОГ-2 и КГ-3 (в ОГ-2 значимо; p_W=0,003). На 21-е сутки показатели активированного теста с НСТ не имели статистически значимых различий с нормой в ОГ-1, ОГ-2 и КГ-3 и оставались существенно более низкими в КГ-1 (p_U£0,003).

Результаты динамической оценки показателей фагоцитоза представлены на рис. 5.5.

Рис.5.5. Динамика исследованных показателей фагоцитоза (медиана, верхний и нижний квартили)

 

При исследовании лейкоцитарной формулы крови мы обратили внимание на выраженное снижение уровня эритроцитов венозной крови у всех аспленизированных животных. В этой связи нами проанализировано количество эритроцитов, а также наличие их незрелых форм и патологических эритроцитарных включений в динамике эксперимента (табл. 5.6).

Таблица 5.6

Количество эритроцитов в периферической крови (медиана, верхний и нижний квартили), наличие их незрелых форм и патологических эритроцитарных включений

	Сутки	Экспериментальные группы
		ОГ-1, n=6	ОГ-2, n=6	КГ-1, n=6	КГ-2, n=6	КГ-3, n=6
Эр., х1012 в 1 л	7	2,6 ¨¨ Ä · ·· (1,3-2,8)	0,9* ¨ Ä · ·· (0,83-1,0)	1,5 Ä · ·· (1,3-1,7)	1,1 Ä (0,9-1,6)	6,1· (5,9-6,2)
	14	3,8 ** ¨ Ä · (3,6-3,9)	3,2 Ä · (3,2-3,3)	3,2 Ä · (3,2-3,3)	-	6,0 · (5,8-6,1)
	21	5,2 ** ¨ (5,1-5,3)	3,8 ¨ Ä (3,7-3,9)	4,9 Ä (4,7-4,9)	-	5,2 (5,2-5,5)
	норма	5,7 (5,6-5,7)
Нормоциты	7	6/0 ¨ ¨¨ Ä	6/0 ¨ ¨¨ Ä	0/6	0/6	0/6
	14	6/0 Ä	6/0 Ä	6/0 Ä	-	0/6
	21	0/6	0/6	0/6	-	0/6
Ретикулоциты	7	6/0¨ ¨¨ Ä	6/0¨ ¨¨ Ä	0/6	2/4	0/6
	14	6/0 Ä	6/0 Ä	6/0 Ä	-	0/6
	21	0/6	0/6	0/6	-	0/6
Тельца Жолли, кольца Кебота	7	0/6	0/6	0/6	0/6	0/6
	14	4/2	0/6	0/6	-	0/6
	21	0/6	0/6	0/6	-	0/6

Примечания: использованы критерий Манна-Уитни, критерий Вилкоксона для связанных выборок и точный метод Фишера для четырехпольной таблицы. * - значимые различия по критерию Манна –Уитни по сравнению с показателем в ОГ-1 (p_U£0,05); ** - по сравнению с ОГ-2; ¨ - по сравнению с КГ-1; ¨¨ - по сравнению с КГ-2; Ä - по сравнению с КГ-3; · - значимые различия по критерию Вилкоксона по сравнению с показателем в группе на 21 сутки (p_W£0,05); ·· - по сравнению с показателем в группе на 14 сутки (p_W£0,05) .

Оказалось, что после спленэктомии на 7-е сутки количество эритроцитов венозной крови резко снижается по сравнению с нормой (р_U= 0,003). Наибольшее снижение отмечено в ОГ-2 и КГ-2. В тоже время у ложнооперированных крыс уровень эритроцитов, напротив, увеличивался по сравнению с нормой (р_U= 0,006). На 14-е сутки анализируемый показатель существенно повышался у животных ОГ-1, ОГ-2, КГ-1 (р_W= 0,004) и не имел существенных различий с предыдущим значением в КГ-3. В это время наибольшее количество эритроцитов в крови у животных ОГ-1, по сравнению с ОГ-2 и КГ-1 (р_U= 0,004), но в названных группах сохранялась выраженная анемия. К 21-м суткам уровень эритроцитов у животных после аспленизации продолжал увеличиваться (р_W= 0,004) по сравнению с предыдущими значениями, но ни в одной группе не достигал нормы (р_U= 0,003). По-прежнему количество эритроцитов у крыс ОГ-1 было существенно выше, чем в ОГ-2 и КГ-1. Неожиданным явилось снижение показателя в КГ-3: он становился существенно более низким по сравнению с нормой. (р_U= 0,02) и не отличался от зарегистрированного в ОГ-1.

При качественном анализе нормо- и ретикулоцитоза обнаружено появление незрелых форм эритроцитов в венозной крови животных ОГ-1 и ОГ-2 уже на 7 сутки (до 14-х суток) эксперимента. В КГ-1 это явление отмечено лишь на 14-е сутки. В КГ-2 нормо- и ретикулоциты в венозной крови обнаруживали лишь в двух наблюдениях из шести на 7-е сутки эксперимента. К 21-м суткам незрелые формы эритроцитов совершенно исчезали из крови животных всех групп. Патологические эритроцитарные включения (тельца Хауэлла - Жолли, кольца Кебота) обнаружены лишь у животных ОГ-1 в четырех наблюдениях из шести на 14-е сутки эксперимента.

Динамические сдвиги количества эритроцитов представлены на рис. 5.6.

Рис. 5.6. Динамика уровня эритроцитов крови (медиана, верхний и нижний квартили).

Поскольку у животных, перенесших спленэктомию, развивалась анемия, в последней серии исследований мы провели сравнительный анализ некоторых показателей системы гемостаза. Этим результатам посвящен следующий раздел.