- •(Экспериментальное исследование)
- •Список сокращений и аббревиатур, использованных в работе
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы) 10
- •Глава 2. Материалы и методы исследования 25
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации 41
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма 55
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки 79
- •Введение
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы)
- •Проблема постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.1. Клинико-лабораторные проявления синдрома постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.2. Способы профилактики и коррекции гипоспленических послеоперационных расстройств
- •Ксенотрансплантация свиных органов и тканей
- •1.3. Технология получения материала для ксенотрансплантации
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика экспериментального материала
- •2.2. Характеристика методов исследования
- •2.2.1. Техника оперативных вмешательств
- •2.2.1.1. Ложная операция
- •2.2.1.2. Спленэктомия
- •2.2.1.3. Экстраперитонеальная аутотрансплантация селезенки
- •2.2.1.4. Ксенотрансплантация клеток селезенки
- •2.2.2.Приготовление препаратов для ксенотрансплантации
- •2.2.2.1. Получение взвеси клеток селезенки
- •2.2.2.2. Приготовление питательной среды для инъекции
- •2.2.2.3 Ранотензиометрия
- •2.2.3. Методы лабораторного контроля
- •2.2.3.1.Определение биохимических показателей сыворотки крови
- •2.2.3.3. Исследование показателей системы гемостаза
- •2.2.3.4 Иммунологические методы исследований
- •2.2.3.5 Общеклиническое исследование крови
- •2.2.3.6 Бактериологические методы исследований
- •2.2.4. Методы морфологического исследования
- •2.3.Методы статистической обработки
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации
- •3.1.Технология выделения клеток селезенки
- •3.1.1 Дезагрегация ткани селезенки
- •3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток
- •3.1.3 Культивирование клеток селезенки новорожденной свиньи
- •3.2.Консервация клеток
- •3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации
- •3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма
- •4.1 Развитие постспленэктомического гипоспленизма в ходе эксперимента
- •4.2 Летальность в экспериментальных группах
- •4.2.1. Патоморфологическое исследование погибших животных
- •4.3. Морфологическая оценка эффектов трансплантации ткани селезенки в условиях гипоспленизма
- •4.3.1 Исследование структуры печени
- •4.3.2.Исследование структуры легких
- •4.4. Морфологическое исследование зон трансплантации
- •4.5. Результаты ранотензиометрических исследований
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки
- •5.1. Лабораторная оценка раннего гепатопротекторного эффекта ксенотрансплантации культуры клеток селезенки
- •5.2. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на белково-синтетическую функцию печени в раннем послеоперационном периоде
- •5.3. Изменения неспецифической резистентности организма у аспленизизированных животных под воздействием ксенотрансплантации клеток селезенки в раннем послеоперационном периоде
- •5.4. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на систему гемостаза в раннем периоде после индукции гипоспленизма
- •Заключение
- •Практические рекомендации
- •Список использованной литературы
4.2 Летальность в экспериментальных группах
Данные по летальности у животных в экспериментальных группах представлены в табл. 4.1 и на рис. 4.1.
Как следует из представленных данных, максимальная летальность в ОГ-1 пришлась на 10 сутки (10,0±5,6%), всего в группе погибло 23,3±7,9%. Первые крысы в ОГ-1 погибли на 8-е сутки послеоперационного периода. После десятых суток погибших не было. В ОГ-2 пик летальности был на 7 сутки (30,0±8,5%), всего погибло 43,3±9,2%. Первая крыса погибла на 5-е сутки. После восьмых суток погибших не было. В КГ-1 наблюдали максимальную летальность на 6-е и 8-е сутки (13,3±6,3%), всего погибло 40,0±9,1 %. Первая крыса погибла на 5-е сутки. После десятых суток погибших не было. В КГ-2 наблюдалось 2 пика летальности: на 6-7-е сутки (40,0±9,1% животных) и 9-е сутки (33,3±8,8%), к пятнадцатым суткам погибли все животные (100%), при этом первая крыса погибла на 5 сутки. Отметим, что в КГ-3 гибели животных не было вовсе.
Таблица 4.1
Летальность в первой серии экспериментов
№ группы |
Число погибших животных в сутки |
Живы / Погибли К 21 сут. |
Леталь-ность (%±S%) |
|
|||||||||||
5 сут |
6 сут |
7сут |
8 сут |
рF |
9 сут |
рF |
10 сут |
13 сут |
14 сут |
15 сут |
рF |
||||
ОГ-1 КТ ККС (n=30) |
- |
- |
- |
2 |
Р2= 0,002 Р3= 0,02 Р4=0,0001 Р5=0,49 |
2 |
Р2=0,02 Р3=0,12 Р4<0,0001 Р5=0,11 |
3 |
- |
- |
- |
23/7 |
23,3±7,9 |
Р2=0,17 Р3=0,26 Р4<0,0001 Р5=0,01 |
|
ОГ-2 КТ ИКС (n=30) |
1 |
1 |
9 |
2 |
Р3= 0,59 Р4=0,60 Р5<0,0001 |
- |
Р3=0,59 Р4=0,0009 Р5<0,0001 |
- |
- |
- |
- |
17/13 |
43,3±9,2 |
Р3=1,0 Р4<0,0001 Р5=0,0001 |
|
КГ-1 ЭП АТС (n=30) |
1 |
4 |
1 |
4 |
Р4=0,19 Р5=0,008 |
- |
Р4<0,0001 Р5=0,008 |
2 |
- |
- |
- |
18/12 |
40,0±9,1 |
Р4<0,0001 Р5<0,0001 |
|
КГ-2 СЭ (n=30) |
1 |
5 |
7 |
3 |
Р5=<0,0001 |
10 |
Р5<0,0001 |
- |
1 |
2 |
1 |
0/30 |
100 |
Р5<0,0001 |
|
КГ-3 ЛО (n=30) |
- |
- |
- |
- |
|
- |
|
- |
- |
- |
- |
30/0 |
0 |
|
Примечания: значимость различий определена с помощью точного метода Фишера; Р1 – значимые различия при сравнении с ОГ-1; по точному методу Фишера; Р2 – по сравнению с ОГ-2; Р3 – по сравнению с КГ-1; Р4 – по сравнению с КГ-2; Р5- по сравнению с КГ-3.
Рис. 4.1. Летальность в первой серии экспериментов. В каждую группу было включено по 30 животных. Гибель крыс отмечена с пятых по десятые сутки (за исключением полностью аспленизированных крыс, КГ-2).
К восьмым суткам эксперимента летальность в ОГ-1 была существенно (pF<0,05) ниже, чем в других группах, за исключением КГ-3 (различия незначимы), а летальность в ОГ-2 не отличалась от КГ-1 и КГ-2, но была существенно (pF<0,05) выше. чем в КГ-3. На девятые сутки эксперимента летальность в ОГ-1 была существенно ниже, чем в ОГ-2 и КГ-2, и не отличалась от показателей КГ-1 и КГ-3. При этом летальность в ОГ-2 не имела статистически значимых различий с КГ-1 и была существенно (pF<0,05) ниже, чем в КГ-2.
Ко времени завершения первой серии эксперимента (21 сутки) сохранялись статистически значимые различия летальности в ОГ-1 и ОГ-2 по сравнению с КГ-2 и КГ-3, а межгрупповых различий при сравнении ОГ-1,ОГ-2 и КГ-1 не было.
Для выяснения причин смерти и контроля эффективности трансплантации селезеночного материала нами проведено патоморфологическое исследование.
Обратимся к его результатам.