- •(Экспериментальное исследование)
- •Список сокращений и аббревиатур, использованных в работе
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы) 10
- •Глава 2. Материалы и методы исследования 25
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации 41
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма 55
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки 79
- •Введение
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы)
- •Проблема постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.1. Клинико-лабораторные проявления синдрома постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.2. Способы профилактики и коррекции гипоспленических послеоперационных расстройств
- •Ксенотрансплантация свиных органов и тканей
- •1.3. Технология получения материала для ксенотрансплантации
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика экспериментального материала
- •2.2. Характеристика методов исследования
- •2.2.1. Техника оперативных вмешательств
- •2.2.1.1. Ложная операция
- •2.2.1.2. Спленэктомия
- •2.2.1.3. Экстраперитонеальная аутотрансплантация селезенки
- •2.2.1.4. Ксенотрансплантация клеток селезенки
- •2.2.2.Приготовление препаратов для ксенотрансплантации
- •2.2.2.1. Получение взвеси клеток селезенки
- •2.2.2.2. Приготовление питательной среды для инъекции
- •2.2.2.3 Ранотензиометрия
- •2.2.3. Методы лабораторного контроля
- •2.2.3.1.Определение биохимических показателей сыворотки крови
- •2.2.3.3. Исследование показателей системы гемостаза
- •2.2.3.4 Иммунологические методы исследований
- •2.2.3.5 Общеклиническое исследование крови
- •2.2.3.6 Бактериологические методы исследований
- •2.2.4. Методы морфологического исследования
- •2.3.Методы статистической обработки
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации
- •3.1.Технология выделения клеток селезенки
- •3.1.1 Дезагрегация ткани селезенки
- •3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток
- •3.1.3 Культивирование клеток селезенки новорожденной свиньи
- •3.2.Консервация клеток
- •3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации
- •3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма
- •4.1 Развитие постспленэктомического гипоспленизма в ходе эксперимента
- •4.2 Летальность в экспериментальных группах
- •4.2.1. Патоморфологическое исследование погибших животных
- •4.3. Морфологическая оценка эффектов трансплантации ткани селезенки в условиях гипоспленизма
- •4.3.1 Исследование структуры печени
- •4.3.2.Исследование структуры легких
- •4.4. Морфологическое исследование зон трансплантации
- •4.5. Результаты ранотензиометрических исследований
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки
- •5.1. Лабораторная оценка раннего гепатопротекторного эффекта ксенотрансплантации культуры клеток селезенки
- •5.2. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на белково-синтетическую функцию печени в раннем послеоперационном периоде
- •5.3. Изменения неспецифической резистентности организма у аспленизизированных животных под воздействием ксенотрансплантации клеток селезенки в раннем послеоперационном периоде
- •5.4. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на систему гемостаза в раннем периоде после индукции гипоспленизма
- •Заключение
- •Практические рекомендации
- •Список использованной литературы
5.4. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на систему гемостаза в раннем периоде после индукции гипоспленизма
Полученные данные представлены в табл. 5.7.
Гематокрит, существенно сниженный в ОГ-1, ОГ-2, КГ-1 и КГ-2 по сравнению с КГ-3 (pU£0,004) на 7-е сутки, среди животных после спленэктомии был наибольшим в ОГ-1. В дальнейшем происходило его существенное увеличение (pW=0,004) в ОГ-1, ОГ-2, КГ-1, а у животных КГ-3 показатель не изменялся. К 21 суткам показатели гематокрита вполне нормализовались у крыс в ОГ-1 (существенное увеличение по сравнению с 14-ми сутками, pW=0,01) и КГ-3 (статистически незначимое уменьшение в сравнении с предыдущими сроками), а у животных ОГ-2 и КГ-1 увеличивался незначимо по сравнению с 14-ми сутками исследования и оставался достоверно сниженным по сравнению с нормой (pU£0,03).
Вязкость крови, изначально сниженная у всех животных после аспленизации, повышалась (в ОГ-1 и ОГ-2 достоверно; pW £0,03) к 21-м суткам, а в ложнооперированном контроле несущественно снижалась и не отличалась от нормы во всех группах, кроме ОГ-2, где показатель был существенно пониженным по сравнению с нормой (pU=0,003).
Уровень фибриногена на 7-е сутки исследования был максимальным в КГ-2 по сравнению с другими группами (pU£0,05). Отметим высокие значения показателя в ОГ-1 (pU=0,05) по сравнению с ОГ-2, КГ-1 и КГ-3. На 14-е сутки концентрация фибриногена в сыворотке крови снижалась (в ОГ-1 – существенно; pW=0,05) и на 21-е сутки в ОГ-1, КГ-1 и КГ-3 не отличалось от нормальных величин.
Интересна динамика протромбинового индекса: на 7-е сутки эксперимента его значения резко повышались в крови животных ОГ-1 и КГ-1, а в КГ-2 достоверно уменьшалось по сравнению с нормой и величиной, определенной для животных КГ-3 (pU=0,004). К 14-м суткам наблюдалось существенное снижение этого показателя в ОГ-1 (pW=0,004) и КГ-1, а в ОГ-2 он недостоверно увеличивался. На 21-е сутки величина протромбинового индекса у животных всех групп не имела статистически значимых отличий по сравнению с нормой и межгрупповых различий.
Таблица 5.7
Некоторые показатели системы гемостаза (медиана, верхний и нижний квартили)
|
Сутки |
Экспериментальные группы |
||||
ОГ-1 |
ОГ-2 |
КГ-1 |
КГ-2 |
КГ-3 |
||
Гематокрит, % |
7 |
29,0¨¨ Ä · ·· (23,0-31,0) |
17,0 * ¨¨ Ä · ·· (15,0-19,0) |
23,5* Ä · ·· (22,0-28,0) |
21,0 Ä (20,0-28,0) |
42,5 (41,0-45,0) |
14 |
34,5 ** Ä · (32,0-38,0) |
30,0 ¨ Ä (29,0-31,0) |
37,5 Ä (36,0-38,0) |
- |
42,0 (41,0-42,0) |
|
21 |
40,5** (39,0-42,0) |
32,0 ¨ Ä (30,0-34,0) |
37,0 Ä (36,0-40,0) |
- |
41,5 (40,0-43,0) |
|
Норма |
41 (40-41) |
|||||
Вязкость, ед. |
7 |
1,5 Ä · (1,4-1,6) |
1,4 ¨ Ä · (1,3-1,4) |
1,6 Ä ·· (15,-1,6) |
1,5 Ä (1,3-1,5) |
1,9 (1,8-2,0) |
14 |
1,6** ¨ Ä (1,6-1,7) |
1,4 Ä · (1,3-1,4) |
1,3 Ä (1,3-1,4) |
- |
1,8 (1,8-1,9) |
|
21 |
1,8 (1,7-1,8) |
1,5 ¨ Ä (1,5-1,5) |
1,8 (1,7-1,9) |
- |
1,8 (1,8-1,9) |
|
Норма |
1,8 (1,8-1,8) |
|||||
Фибриноген, г/л |
7 |
5,4 ¨¨ Ä · ·· (4,6-5,5) |
3,6 * ¨¨ (2,5-4,1) |
3,9¨¨ · (3,5-5,2) |
5,7 Ä (5,6-5,9) |
3,6 · (3,2-3,6) |
14 |
3,1 (2,9-3,1) |
3,5 (3,1-3,8) |
3,3 (3,2-3,7) |
- |
2,9 (2,6-3,4) |
|
21 |
3,2 (3,0-3,6) |
3,3 (3,2-3,6) |
3,3 Ä (3,2-3,7) |
- |
3,0 (2,9-3,2) |
|
Норма |
3,1 (2,5-3,2) |
|||||
ПИ, % |
7 |
147 ¨¨ Ä · ·· (120-150) |
107,0 * ¨¨ (100,0-121,0) |
122** ¨¨ Ä · (110-150) |
68 Ä (67-70) |
100 (98-102) |
14 |
105 ** Ä (103-108) |
119 Ä · (109-136) |
108 Ä (104-119) |
- |
99 (97-100) |
|
21 |
105 (100-110) |
101 (100-105) |
98 (96-103) |
- |
99,5 (98,0-100,0) |
|
Норма |
100 |
|||||
Агрегация тромбоцитов, % |
7 |
130,0 ¨¨ Ä · (109,0-130,0) |
126,0 ¨¨ Ä · (116,0-133,0) |
120¨¨ Ä · (116-120) |
163 Ä (156-200) |
100 (96-102) |
14 |
107 ¨ (100-109) |
118 Ä · (116-123) |
120 Ä (112-125) |
- |
100 (100-100) |
|
21 |
105 ** (100-110) |
89 ¨ Ä (80-100) |
110 Ä (108-110) |
- |
100 (100-100) |
|
Норма |
100 |
|||||
Время свертывания крови, с |
7 |
131** ¨¨ Ä ·· (110-140) |
69¨ Ä · ·· (65-70) |
87* ¨¨ Ä · ·· (79-89) |
53** (47-58) |
59,5 ·· (55,0-60,0) |
14 |
88 ** ¨ Ä · (85-92) |
72 ¨ Ä · (70-75) |
60 Ä (56-62) |
- |
50 (48-53) |
|
21 |
110 ** ¨ Ä (100-120 ) |
56¨ (55-58) |
46 Ä (42-48) |
- |
50 (49-55) |
|
Норма |
52 (52-52) |
Примечания к табл. 5.7: * - значимые различия по критерию Манна –Уитни по сравнению с показателем в ОГ-1 (pU£0,05); ** - по сравнению с ОГ-2; ¨ - по сравнению с КГ-1; ¨¨ - по сравнению с КГ-2; Ä - по сравнению с КГ-3; · - значимые различия по критерию Вилкоксона по сравнению с показателем в группе на 21-е сутки (pW£0,05); ·· - по сравнению с показателем в группе на 14-е сутки (pW£0,05).
Для общей характеристики тромбоцитарно-сосудистого гемостаза, изменения которого не были ожидаемыми, проведено сравнительное исследование относительной величины агрегационной способности тромбоцитов. Установлено, что исходно (7-е сутки) этот показатель существенно повышается у всех животных после аспленизации. В дальнейшем, к 21-м суткам происходит существенно снижение показателя агрегации тромбоцитов в ОГ-1, ОГ-2, КГ-1 (pW£0,009) по сравнению с исходными значениями. В КГ-1 агрегация тромбоцитов остается повышенной до конца исследования (pU=0,01), а в ОГ-1 и ОГ-2 приближается к норме и к величине показателя КГ-3, где отклонений не было зарегистрировано.
В связи с представленными данными при оценке интегрального показателя системы гемостаза, времени свертывания крови логичным было бы ожидать некоторую гиперкоагуляцию, более выраженную в ОГ-1. Однако полученные результаты были противоположными. Оказалось, что в ОГ-1 на 7-е сутки время свертывания существенно увеличилось, статистически значимо отличаясь от показателей других групп (pU=0,004), где также наблюдалась гипокоагуляция, но менее выраженная (за исключением животных КГ-2, где достоверных изменений по сравнению с нормой не происходило). В дальнейшем (на 14-е сутки) происходило существенное (pW <0,05) снижение времени свертывания в ОГ-1, КГ-1 и КГ-3, а в ОГ-2 этот показатель увеличивался, по сравнению с предыдущим (pW=0,04). Выраженная гипокоагуляция сохранялась в ОГ-1 и на 21-е сутки исследования (pU=0,003) по сравнению с нормой, и в меньшей степени - в ОГ-2 (pU=0,02). Напротив, в КГ-1 развивалась гиперкоагуляция (pU =0,005), а в ложнооперированном контроле показатель не отличался от нормы.
Динамика обсужденных показателей иллюстрирована рис. 5.7.
Рис.5.7. Динамика некоторых показателей гемостаза (медиана, верхний и нижний квартили).