4.3. Морфологическая оценка эффектов трансплантации ткани селезенки в условиях гипоспленизма

Морфологию печени и легких оценивали на 7, 14 и 21 сутки эксперимента, выводя в каждой группе по 6 животных на срок исследования.

4.3.1 Исследование структуры печени

При микроскопическом исследовании печени на 7 сутки у животных всех экспериментальных групп, кроме КГ-3, отмечали следующую картину: центролобулярные, дольковые и балочные структуры сохранены, однако, присуствуют гепатоциты с нарушенной структурой и некротические процессы с лейкоцитарной инфильтрацией. Наиболее выраженные изменения были обнаружены на светооптическом уровне в зоне портальных трактов.

Так как морфологическая картина структуры печени у экспериментальных животных ОГ-1, ОГ-2, КГ-1 и КГ-2 не различалась, морфометрия с подсчетом гепатоцитов и непаренхиматозных клеточных элементов на 7-е сутки не проводилась.

В КГ-3 структура печени не изменена. Центролобулярные, дольковые и балочные структуры сохранены. Структура гепатоцитов сохранена, признаков их повреждения нет.

В ОГ-1 на 14-е сутки отсутствовали очаги некрозов гепатоцитов и лейкоцитарной инфильтрации, в отличие от картины печени у погибших крыс. Структура гепатоцитов, балочная и дольковая структуры печени сохранены, признаков их повреждения нет. Инфильтрация портальных трактов лимфоцитами незначительна. К 21-м суткам эксперимента при обзорной световой микроскопии картина оставалась прежней, отмечалось увеличение количества гепатоцитов по сравнению с другими экспериментальными группами

В ОГ-2 и КГ-1 на 14-е сутки наблюдали сохранение балочной и дольковой структур печени, встречали очаги гидропической дистрофии гепатоцитов. Присутствовала инфильтрация портальных трактов лимфоцитами. На 21-е сутки структура гепатоцитов и их ядер сохранена, балочные и дольковые структуры не нарушены, отмечается инфильтрация лимфоцитами портальных трактов более выраженная, чем в ОГ-1 и КГ-3. В ОГ-2 выявлено увеличение количества фагоцитирующих эритроциты Купферовских клеток по сравнению с ОГ-1 и КГ-1.

В КГ-3 на светооптическом уровне структура печени не изменена. Структура гепатоцитов сохранена, признаков их повреждения нет. Центролобулярные, дольковые и балочные структуры печени сохранены – рис. 4.4.

 

Рис.4.4. Структура печени на 21 сутки эксперимента. А - КГ-3 (ложная операция), Б - ОГ-1 (ксенотрансплантация ККС), В – ОГ-2 (ксенотрансплантация выделенных КС), Г – КГ-1 (экстраперитонеальная АТС). 1 - печеночная балка, 2 - портальный тракт с лимфоцитарной инфильтрацией. Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40^х, Ок. 10^х.

 

Данные морфометрии печени с подсчетом гепатоцитов и непаренхиматозных клеточных элементов во всех экспериментальных группах представлены в табл. 4.3. При статистической обработке результатов морфометрического исследования оказалось, что на 14-е сутки количество гепатоцитов в ОГ-1 не отличается от нормы (животные с ЛО, КГ-3), в то же время в ОГ-2 количество гепатоцитов существенно выше нормы (p_U=0,002), а также существенно выше, чем в других группах с трансплантацией ткани селезенки (p_U = 0,02-0,004). В КГ-1 количество гепатоцитов существенно ниже нормы (p_U=0,006). К 21 суткам количество гепатоцитов в ОГ-1 существенно (p_W=0,004) увеличивалось по сравнению с 14 сутками и их количество было достоверно больше, чем во всех других группах. (p_U=0,004). В ОГ-2 количество гепатоцитов существенно снижалось к 21 суткам (p_W=0,004) и было существенно ниже нормы (p_U=0,006). В КГ-1 также увеличивалось количество гепатоцитов (p_W=0,01) по сравнению с 14 сутками, но на 21 сутки их количество не отличалось от нормы.

Таблица 4.3

Морфометрия печени на 14 и 21 сутки эксперимента (медиана, нижний и верхний квартили)

 

Клеточные элементы	Сутки	Экспериментальные группы
		ОГ-1	ОГ-2	КГ-1	КГ-3
Гепатоциты	14	38,0 ** (36,6-39,0) ·	42,6 (40,4-45,6) ·	34,1** (33,8-35,3) ·	38,7** ¨ (38,2-40,0)
	21	55,0 **¨¨ (52,2-58,0)	32,6 ¨¨ (31,6-35,4)	40,5 * (39,4-41,8)	38,8 (38,2-40,0)
Клетки Купфера с эритрофагоцитозом	14	3,5 ** (3,4-3,8) ·	3,9 (3,6-4,2)	3,5 ** (3,4-3,6) ·	3,5 (3,4-3,6)
	21	2,0 ** (1,8-2,4)	4,5 ¨¨ (3,4-5,8)	2,8 ** (2,6-3,2)	3,5 ¨ (3,2-3,6)
Эндотелиоциты и клетки Купфера	14	11,1 **¨¨ (10,8-12,8)	9,7 ¨¨ (9,2-10,4)	11,7 ** (11,4-11,8)	7,0¨ (6,6-7,2)
	21	12,5 ¨¨ (11,4-14,4)	9,9 ¨¨ (9,6-10,5)	10,5 (9,0-12,0)	7,0 ¨ (6,6-7,4)
Сумма непаренхиматозных клеток печени	14	21,2**¨¨ (20,6-22,0) ·	20,5 (19,0-23,0)	22,8 * (22,4-23,2)	19,8¨¨ (18,8-20,4)
	21	27,4 ¨¨ (26,9-30,6)	26,1 ¨¨ (22,6-27,6)	26,9 (22,4-29,4)	19,8 ¨ (18,6-21,2)
Инфильтрация портальных трактов	14	0,4 ** (0,4-0,6)	0,8 ¨¨ (0,6-0,8)	0,8 * (0,6-1,0)	0,4 ¨ (0,2-0,6)
	21	1,0 ** ¨¨ (1,0-2,0) ·	4,0 ¨¨ (4,0-5,0) ·	4,5 * (4,0-5,0) ·	0,4 ¨ (0,2-0,6)

Примечания: * - значимые различия по критерию Манна –Уитни по сравнению с показателем в ОГ-1 (p_U£0,05); ** - по сравнению с ОГ-2; ¨ - по сравнению с КГ-1; ¨¨- по сравнению с КГ-3; · - значимые различия по критерию Вилкоксона по сравнению с показателем в группе на 21 сутки (p_W£0,05).

 

Количество фагоцитирующих эритроциты клеток Купфера при сравнительном морфометрическом анализе ни в одной группе не имело значимых отличий на 14-е сутки по сравнению с ложной операцией. К 21 суткам количество наблюдений эритрофагоцитоза в клетках Купфера существенно снижалось в ОГ-1 и КГ-1 (p_U=0,006 и 0,02 соответственно) и было статистически значимо ниже, чем в норме (p_U=0,005 и 0,02 соответственно). В ОГ-2, напротив, отмечено некоторое (статистически незначимое) повышение числа клеток Купфера, фагоцитирующих эритроциты, по сравнению с предыдущим показателем и с нормой.

Количество эндотелиоцитов и нефагоцитирующих КК было существенно выше нормы в ОГ-1, ОГ-2 и КГ-1 (p_U=0,02-0,004) на 14-е сутки. Ни в одной группе их количество их количество достоверно не изменилось к 21 суткам; этот показатель был существенно выше нормы в ОГ-1 (p_U=0,005).

На 14-е сутки суммарное количество непаренхиматозных клеток печени, рассчитанное при морфометрии, было существенно выше в ОГ-1 по сравнению с нормой и КГ-1 (p_U=0,003 и 0,004). В ОГ-2 статистически значимых различий с нормой не было. К 21 суткам этот показатель еще более повышался в ОГ-1, оставаясь существенно выше нормы (p_U=0,03) и не отличался от ОГ-2 и КГ-1, в которых сумма непаренхиматозных клеток также превосходила нормальные значения (p_U=0,01).

Лимфоцитарная инфильтрация портальных трактов у ложно-оперированных и в ОГ-1 встречалась не во всех наблюдениях и составила (медиана) 0,4 на 14-е сутки исследования. У животных КГ-2 и КГ-1 этот показатель был существенно выше по сравнению с ОГ-1 и КГ-3 (p_U=0,03 и 0,05). К 21 суткам количество лимфоцитов, инфильтрирующих портальные тракты существенно увеличивалось у животных всех групп, кроме КГ-3 (p_W=0,003-0,004) и было достоверно выше, чем у ложнооперированных (p_U=0,003-0,004). При этом в ОГ-1 инфильтрация портальных трактов оказалась существенно более низкой, по сравнению с ОГ-2 (p_U=0,005) и КГ-1 (p_U=0,003).

Таким образом, в ОГ-1 к 21 суткам зарегистрировано существенное увеличение количества гепатоцитов, по сравнению с 14 сутками и с другими группами, а также увеличение общего количества непаренхиматозных клеток на 21-е сутки по сравнению с нормой и (статистически незначимое) с другими экспериментальными группами при минимальной среди них лимфоцитарной инфильтрации портальных трактов.