- •(Экспериментальное исследование)
- •Список сокращений и аббревиатур, использованных в работе
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы) 10
- •Глава 2. Материалы и методы исследования 25
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации 41
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма 55
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки 79
- •Введение
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы)
- •Проблема постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.1. Клинико-лабораторные проявления синдрома постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.2. Способы профилактики и коррекции гипоспленических послеоперационных расстройств
- •Ксенотрансплантация свиных органов и тканей
- •1.3. Технология получения материала для ксенотрансплантации
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика экспериментального материала
- •2.2. Характеристика методов исследования
- •2.2.1. Техника оперативных вмешательств
- •2.2.1.1. Ложная операция
- •2.2.1.2. Спленэктомия
- •2.2.1.3. Экстраперитонеальная аутотрансплантация селезенки
- •2.2.1.4. Ксенотрансплантация клеток селезенки
- •2.2.2.Приготовление препаратов для ксенотрансплантации
- •2.2.2.1. Получение взвеси клеток селезенки
- •2.2.2.2. Приготовление питательной среды для инъекции
- •2.2.2.3 Ранотензиометрия
- •2.2.3. Методы лабораторного контроля
- •2.2.3.1.Определение биохимических показателей сыворотки крови
- •2.2.3.3. Исследование показателей системы гемостаза
- •2.2.3.4 Иммунологические методы исследований
- •2.2.3.5 Общеклиническое исследование крови
- •2.2.3.6 Бактериологические методы исследований
- •2.2.4. Методы морфологического исследования
- •2.3.Методы статистической обработки
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации
- •3.1.Технология выделения клеток селезенки
- •3.1.1 Дезагрегация ткани селезенки
- •3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток
- •3.1.3 Культивирование клеток селезенки новорожденной свиньи
- •3.2.Консервация клеток
- •3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации
- •3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма
- •4.1 Развитие постспленэктомического гипоспленизма в ходе эксперимента
- •4.2 Летальность в экспериментальных группах
- •4.2.1. Патоморфологическое исследование погибших животных
- •4.3. Морфологическая оценка эффектов трансплантации ткани селезенки в условиях гипоспленизма
- •4.3.1 Исследование структуры печени
- •4.3.2.Исследование структуры легких
- •4.4. Морфологическое исследование зон трансплантации
- •4.5. Результаты ранотензиометрических исследований
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки
- •5.1. Лабораторная оценка раннего гепатопротекторного эффекта ксенотрансплантации культуры клеток селезенки
- •5.2. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на белково-синтетическую функцию печени в раннем послеоперационном периоде
- •5.3. Изменения неспецифической резистентности организма у аспленизизированных животных под воздействием ксенотрансплантации клеток селезенки в раннем послеоперационном периоде
- •5.4. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на систему гемостаза в раннем периоде после индукции гипоспленизма
- •Заключение
- •Практические рекомендации
- •Список использованной литературы
3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
Количество пересаживаемых клеток, составившее 2х106 в 1 мл взвеси, определено на основе работ С.А. Лепеховой. Трансплантацию производили инъекционно под кожу передней брюшной стенки в гипогастральной области слева. Мы отказались от внутрибрюшинного, внутривенного и внутритимического введения материала, как описано в литературных источниках, чтобы избежать дополнительной травмы при манипуляции, а также для возможности наблюдать за местной реакцией тканей. Кроме того, проекционно зона размещения ксеногенных клеток селезенки совпадала с локализацией аутоспленотрансплантата в контрольной группе крыс.
Техника ведения клеточного материала предусматривала равномерное его распределение по траектории инъекционной иглы в виде «дорожки», что, предположительно, позволяло предотвратить скопление основной массы материала в ограниченном пространстве с развитием последующих некрозов трансплантата, вызванных недостаточным питанием из окружающих тканей.
Теперь обратимся к результатам ксенотрансплантации приготовленного материала животным с индуцированным гипоспленизмом в сравнении с контролем, в качестве которого выбраны аспленизированные животные с введением питательной среды для культивации (вычленение фармакологического эффекта компонентов культуральной среды), аутоспленотрансплантацией (сравнение морфо-функциональных результатов пересадки ксеногенной и аутологичной ткани селезенки) и ложнооперированные животные (изучение патогенных эффектов удаления ткани селезенки).
Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма
На основании классических представлений о регенерации ткани селезенки после аутоспленотрансплантации длительность исследования составила 21 сутки, в течение которых мы наблюдали за животными и контролировали летальность в экспериментальных группах. Рассмотрим результаты, полученные в этой части исследования.
4.1 Развитие постспленэктомического гипоспленизма в ходе эксперимента
Животные, перенесшие ложную операцию (КГ-3), в течение первых и вторых суток были малоподвижными, но cо вторых суток принимали пищу и воду. С третьих суток крысы КГ-3 становились активными и отличались от животных других групп ярко-красным цветом глаз, принимали пищу. С 5-6 суток – производили впечатление здоровых животных.
В течение первых суток после аспленизации животные других групп угнетены, малоподвижны, отмечается тахипноэ, отказ от пищи. На вторые сутки сохранялось ограничение активности, крысы принимали пищу и воду в небольших количествах. На четвертые и пятые сутки животные КГ-2 и, отчасти, ОГ-2 и КГ-1 отказывались от приема воды и пищи и были малоподвижными. Отмечали тахипноэ и взъерошенность шерстяного покрова, побледнение окраски глаз. Животные ОГ-1 и КГ-3 в это время отличались от животных других групп активностью поведения, принимали пищу, глаза оставались ярко-красного цвета.
На 6-9 сутки у животных КГ-2 отмечали истощение, гнойные выделения из носа, шерсть у носа склеенная, шумное дыхание, тахипноэ, у некоторых крыс шерсть приобретала желтоватый оттенок, глаза бледно-розового цвета.
Выжившие животные ОГ-1, ОГ-2 и КГ-1 экспериментальных групп к 10 суткам производили впечатление нормальных животных, с сохранением пониженной активности.
К 21 суткам у некоторых животных ОГ-2 и КГ-1 отмечали учащенное дыхание и полидипсию, у всех животных шерстяной покров обычного цвета, глаза ярко-красные.