0. Теоретические вопросы к занятию.

• Таксономическое положение и основные биологические свойства риккетсий, микоплазм и хламидий, сближающие их с бактериями и вирусами.

• Методы культивирования риккетсий, хламидий, микоплазм.

• Роль риккетсий в патологии человека. Патогенез и иммуногенез при сыпном тифе. Болезнь Брилла. Особенности патогенеза Ку-лихорадки. Профилактика и лечение.

• Методы лабораторной диагностики сыпного тифа и Ку-лихорадки. Их оценка. Серологическая диагностика риккетсиозов.

• Классификация хламидий, вызываемые ими болезни. Патогенез, иммунитет и особенности лабораторной диагностики хламидиозов.

• Микоплазма- и уреаплазма-инфекции. Характеристика возбудителей. Патогенез, диагностика и лечение этих инфекций.

0. Практические работы, выполняемые на занятии.

• Определить таксономическое положение и основные биологические свойства риккетсий, хламидий и микоплазм. Ознакомиться с эпидемиологией и патогенезом вызванных ими заболеваний.

• Усвоить методы лабораторной диагностики риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов.

• Изучить морфологические и тинкториальные свойства риккетсий и хламидий в демонстрационных препаратах, окрашенных по методам Здродовского и Романовского-Гимзы.

• Усвоить методы серологической диагностики сыпного тифа и Ку-лихорадки. Осуществить учет РСК, РАР и РНГА, поставленных с целью серологической диагностики риккетсиозов.

• Ознакомиться с препаратами для диагностики, специфической профилактики и лечения риккетсиозов.

5. Содержание темы:

На практическом занятии студенты изучают классификацию и биологические свойства риккетсий, хламидий и микоплазм, знакомятся с патогенезом и иммуногенезом заболеваний, которые эти микроорганизмы вызывают; изучают под микроскопом препараты риккетсий, окрашенные по методу Здродовского, на препаратах, полученных от больного урогенитальным хламидиозом, учатся выявлять включения хламидий в клетках цилиндрического эпителия уретры. Студенты анализируют методы лабораторной диагностики риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов, осуществляют учет реакции агглютинации риккетсий (РАР), связывания комплемента (РСК), непрямой гемагглютинации (РНГА), поставленных с целью серодиагностики риккетсиозов, знакомятся с препаратами, используемыми для диагностики, специфической профилактики и лечения риккетсиозов.

Выполненные задания студенты записывают в протокол и подписывают его у преподавателя.

5.1. Рекомендации по оформлению протокола. Методы лабораторной диагностики хламидиозов.

Патологический материал: соскоб из слизистых оболочек уретры, конъюнктивы, центрифугат мочи, биоптат ткани, гной и др.

1. Микроскопический метод. Используется в клинических лабораториях при диагностике трахомы, урогенитального хламидиоза. Исследуются мазки-соскобы из уретры, конъюнктивы и т.п., окрашенные по методу Романовского-Гимзы. Диагностическое значение имеет выявление 5-10 типичных включений ретикулярных или элементарных телец в цитоплазме пораженных клеток.

2. Экспресс-метод. Выявление морфологических структур и антигенов в исследуемом материале с помощью прямой и непрямой РИФ, ИФА с использованием моноклональных хламидийных антител. Чувствительность ИФА по выявлению хламидий колеблется в пределах 50-70% у мужчин и 88-100% у женщин.

3. Методы выделения и идентификации хламидий. Выделяют хламидии путем заражения куриных эмбрионов или культуры клеток (L - 929, McCoy, HeLa). Это наиболее точный и доказательный метод диагностики хламидиоза (золотой стандарт). Через 48-96 часов инфицированные клетки окрашивают по методу Романовского-Гимзы, или обрабатывают флуоресцентными антителами и выявляют наличие цитоплазматических включений. Метод высокоспецифический (100%), чувствительный (75%), результат известен через 42-96 часов, но малодоступен для клинических лабораторий и высок риск заражения персонала.

4. Серологическая диагностика. Используют РНГА, непрямую РИФ (в основном для диагностики зоонозных хламидиозов), РСК (не используется для диагностики урогенитального хламидиоза), ИФА (высокоспецифический и доступный, используют диагностические тест-системы). Исследуют парные сыворотки, определяют нарастание титров антител в 4 и больше раз.

5. Аллергическая проба с орнитином (инактивированная аллантоисная культура C.psittaci) подходит как для ранней (2-9 день заболевания), так и для ретроспективной диагностики хламидийного орнитоза.

6. Биологический метод диагностики. Только при хламидийном орнитозе, заражают интрацеребрально, интраназально или в брюшную полость белых мышей-сосунков. В мазках-отпечатках выявляют включения хламидий в цитоплазме мононуклеарных клеток.