4.2. Теоретические вопросы к занятию.

1.Характеристика кампилобактеров: классификация, морфология, антигенный состав, биохимическая активность, культуральные свойства, патогенез кампилобактериозов, микробиологическая диагностика.

2. Характеристика геликобактеров: классификация, морфология, культуральные свойства, патогенез язвенной болезни желудка, методы диагностики заболеваний геликобактерной природы, лечения геликобактериозов.

3. Патогенные спириллы. Возбудитель лихорадки от укуса крыс (болезни Содоку). Микробиологическая диагностика заболевания.

4. Общая характеристика семейства спирохет. Классификация.

5. Исторические данные о возбудителях возвратного тифа, сифилиса, лептоспирозов.

6. Возбудитель сифилиса. Биологические свойства. Патогенез и иммунитет. Микробиологическая диагностика и специфическая терапия сифилиса .

7. Лептоспиры, их характеристика, классификация. Патогенез, иммунитет и микробиологическая диагностика лептоспирозов. Специфическая профилактика и терапия.

8. Боррелии, биологические свойства. Роль в патологии человека. Возбудители эпидемического и эндемического поворотных тифов, болезни Лайма. Патогенез, иммуногенез, микробиологическая диагностика возвратного тифа, болезни Лайма. Специфическая профилактика и терапия.

4.3.Практические работы, выполняемые на занятии:

• Создать схемы микробиологической диагностики сифилиса, возвратного тифа и лептоспирозов.

• Ознакомиться с методами бактериоскопической диагностики сифилиса и возвратного тифа.

• Овладеть методикой серологической диагностики сифилиса методом постановки реакции Вассермана.

• Изучить препараты, которые используют для диагностики, специфической профилактики и терапии спирохетозов.

5. Содержание темы:

На практическом занятии студенты изучают эволюцию и свойства представителей извитых форм бактерий; историю открытия и изучения кампилобактеров, геликобактеров, спирохет; биологические свойства кампилобактеров, геликобактеров, спирохет; закономерности патогенеза, особенности иммунитета, методы диагностики кампилобактериозов, геликобактериозов, сифилиса, возвратного тифа и лептоспироза; препараты для диагностики, специфической профилактики и терапии кампилобактериозов, геликобактериозов, спирохетозов. Выполненные задания студенты записывают в протокол и подписывают его у преподавателя.

Рекомендации по оформлению протокола

В протокол необходимо внести:

1. Классификацию извитых форм бактерий, патогенных для человека.

2. Классификацию патогенных представителей семейства Spirochetaceae

3. Особенности микробиологической диагностики кампилобактериозов, геликобактериозов и спирохетозов.

4. Рисунок микроскопического препарата, изготовленного из крови больного поворотным тифом с выводом о результатах микроскопии.

5. Рисунок микроскопического препарата, изготовленного из материала больного сифилисом (из твердого шанкра), с выводом о выявленном микробе.

6. Схемы микробиологической диагностики сифилиса, возвратного тифа и лептоспирозов.

7. Схему постановки основного опыта реакции Вассермана.

8. Таблицу дифференциации эпидемического и эндемического возвратного тифа.

9. Препараты, которые используются для диагностики, лечения и специфической профилактики сифилиса, возвратного тифа и лептоспирозов.

Таблица 1. Классификация извитых форм бактерий, патогенных для человека

• Вибрионы.

• Кампилобактеры.

• Геликобактеры.

• Спириллы.

• Спирохеты:

  • Трепонемы.

  • Боррелии.

  • Лептоспиры.

Таблица 2. Классификация патогенных представителей семейства Spirochetaceae

Род	Вид	Подвид	Заболевание
Treponema	pallidum pallidum carateum vincentii	pallidum pertenue	Сифилис Фрамбезия Пинта Ангина Венсана-Плаута
Borellia Borellia	recurrentis caucasica duttoni, persica и др.		Эпидемический (вшивый) возвратный тиф Эндемический (клещевой) возвратный тиф
Borellia	Burgdorferi		Болезнь Ругай
Leptospira	Icterohaemorrhagiae		Лептоспироз

Таблица 3. Мкробиологическая диагностика заболеваний, вызванных C. jejuni и родственными бактериями

Метод диагностики	Характеристика
1.Бактериоскопия (ориентировочная диагностика)	Грамотрицательные вибрионоподобные микроорганизмы. Монотрихи. Стремительная подвижность.
2.Бактериологическая диагностика (основная)	Определение биологических, биохимических, серологических свойств выделенной чистой культуры: оксидазоположительные; растут при 420 (кроме C.fetus, которая не растет при 420, но растет при 250С); учитывают чувствительность к налидиксовой кислоте.
3. Серологическая диагностика	Для подтверждения бактериологического диагноза, используют редко ИФА, РИФ, РНГА и др.
4. Генетическая диагностика	Полимеразная цепная реакция

Таблица 4. Методы диагностики заболеваний вызванных Helicobacter pylori

Бактериологический	Выделение возбудителя
Гистологический	Выявление возбудителя в гистологических срезах биоптатов
Уреазный	Выявление биохимической активности возбудителя в биоптатах
Дыхательный тест	Выявление уреазной активности возбудителя в желудке больного с помощью изотопов углерода (13С, 14С)
Иммунологический	ИФА антигенов возбудителя в фекальных массах
Генетический (полимеразная цепная реакция)	Материал из биоптатов

Особенности микробиологической диагностики спирохетозов (сифилиса, лептоспироза, возвратного тифа)

Микробиологическая диагностика сифилиса

1. Микроскопия (нативный и фиксированный материал)

• фазовый контраст

• темное поле

2. Серологическая диагностика

• Иммуноферментный анализ (ИФА)

• Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

• Реакция Вассермана

• Осадочные реакции (Кана и Закса-Витебского)

• Реакции иммобилизации бледной трепонемы (РИБТ)

• Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

3. Полимеразная цепная реакция (ПЛР)

Микробиологическая диагностика возвратного тифа : бактериоскопический и серологический принципы.

Таблица 5. Дифференциация эпидемического и эндемического возвратного тифа

Признаки	Эпидемический возвратный тиф	Эндемический( клещевой) возвратный тиф
Возбудитель	B.recurrentis	B.persica, B.caucasica
Переносчик	Pediculus vestimenti и реже P.capitis	Alectorobius Alectorobius papillipes verrucosus
Патогенность для морской свинки (биологический метод)	Не болеет	Заболевание наступает через 5-7 суток (введение 0,5 см3 крови подкожно или 1-2 капли в конъюнктиву глаза).
Наличие возбудителя в "толстой" капле крови во время лихорадочного периода	Обнаруживвается большое количество спирохет	Одиночные спирохеты, но их выявление возможно как во время приступа, так и в период между ними.
Темнопольная микроскопия	Наличие одного контура в спирохете	Наличие двух контуров в спирохете
Распространение	Практически отсутствует	Центральная, Средняя Азия и Средиземное море (B.persica); Кавказ, Украина (B.caucasica).

Микробиологическая диагностика лептоспироза: бактериоскопический (слабая чувствительность) бактериологический и серологический методы, ПЛР.

Задание 1. Осуществить бактериоскопическую диагностику сифилиса, исследовать морфологию микробов под микроскопом.

Схема выполнения задания

Материал (из шанкра, лимфатических узлов, элементов сыпи)

препарат Темнопольная микроскопия

Задание 2. Осуществить бактериоскопическую диагностику возвратного тифа, исследовать морфологию микробов в микроскопе.

Материал для исследования

препарат из "толстой" капли крови

Боррелия возвратного тифа в крови

окраска по методу

Романовского- Гимзы

Кровь больного

Задание 3. Осуществить учет результатов реакции Вассермана, с целью серологической диагностики сифилиса (по схеме).

Сыворотку крови больного инактивируют на водяном нагревателе при 56⁰С 30 мин. и разливают в 4 пробирки.

В качестве диагностикума в реакции Вассермана может использоваться: 1) специфический антиген, содержащий антигены возбудителя - разрушенные ультразвуком трепонемы; 2) неспецифический антиген - липоидный экстракт из бычьего сердца с лецитином и холестерином - кардиолипидный антиген; 3) неспецифический антиген - спиртовой экстракт липоидов из мышц сердца быка с холестерином.

Таблица №2

Схема постановки основного опыта реакции Вассермана

Ингредиенты	Пробирка №1	Пробирка №2	Пробирка №3	Пробирка №4
Сыворотка крови больного, инактивированная и разведенная 1:5	0,5см3	0,5 см3	0,5 см3	0,5 см3
Антиген №1(специфический)	0,5см3	-	-	-
Антиген №2(неспецифический)	-	0,5см3	-	-
Антиген №3(неспецифический)	-	-	0,5см3	-
Комплемент (рабочая доза)	0,5см3	0,5см3	0,5см3	0,5см3
Изотонический раствор NaCl (натрия хлорида)	-	-	-	0,5см3

Термостат при температуре 37⁰С на протяжении 45 мин.

Сенсибилизированная гемолитическая система

1,0 см3

1,0 см3

1,0 см3

1,0 см3

Термостат при температуре 37⁰С на протяжении 1 час.

Результат:	Пробирка №1	Пробирка №2	Пробирка №3	Пробирка №4
с сывороткой больного сифилисом	─Г	─Г	─Г	+Г
с нормальной сывороткой	+Г	+Г	+Г	+Г

Примечание: ─Г отсутствие гемолиза; +Г - гемолиз. Учет результатов проводится после наступления гемолиза во всех контролях.

У 50% больных реакция становится положительной после появления твердого шанкра. Во втором и третьем периодах сифилиса 75-90% положительных реакций. После лечения реакция Вассермана отрицательна.