- •Государственное бюджетное образовательное учреждние высшего профессионального образования
- •Методические указания к самостоятельной подготовке студента.
- •План практических занятий.
- •Основная литература
- •Дополнительная литература
- •Периодические издания
- •Электронное информационное обеспечение и Интернет-ресурсы.
- •Занятие 1
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Правила для студентов, работающих на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии.
- •Обязанности дежурного.
- •Дополнительный материал к занятию. Правила микроскопии с иммерсионной системой.
- •Приготовление фиксированных препаратов из культур микроорганизмов.
- •Техника окраска по Граму в модификации Синёва.
- •Отношение бактерий к окраске по Граму.
- •Окраска по Цилю-Нильсену.
- •Контрольные вопросы.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 2
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 3
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 4
- •Контрольные вопросы по разделу «Морфология микробов» (подробную расшифровку вопросов смотрите в занятиях 1-3).
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Методы выделения чистых культур бактерий
- •Техника посева микроорганизмов на питательные среды
- •Приборы, методы и среды для культивирования анаэробов
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 6
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Дополнительный материал к занятию. Методы стерилизации
- •Методы контроля стерильности.
- •Методы частичного обеспложивания.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 7
- •Дополнительный материал к занятию.
- •Методы проведения санитарно-микробиологических исследований
- •Допустимые уровни бактериальной обсеменённости воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их функционального назначения и класса чистоты
- •Контрольные вопросы.
- •Задание на самостоятельную работу.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 8
- •Контрольные вопросы.
- •Контрольные практические задания по разделу «Физиология микробов.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Запись в тетради
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 11
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 12
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Занятие 13
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 15
- •Применение бактериофагов.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 16
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 17
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 18
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Дополнительный материал к занятию Микробиологические методы идентификации микробов рода Staphylococcus
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 19
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 20
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 21
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Занятие 23
- •Методы определения вида и типа вирусов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Занятие 24
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 25
- •Задания для самостоятельной работы.
- •Задание для самостоятельной работы.
- •Задание для самостоятельной работы.
- •Задание для самостоятельной работы.
- •Задания для самостоятельной работы.
- •Работа студентов на практическом занятии.
- •Занятие 30
- •Занятие 31
- •Занятие 32
- •Работа студента на практическом занятии
Занятие 23
Морфология и физиология вирусов.
Методы культивирования и обнаружения вирусов.
Возбудители гриппа.
Цель самоподготовки
После самостоятельного изучения темы студенты должны знать: положение вирусов в системе живых организмов; особенности вирусов, присущие только им; строение вириона (схемы строения, типы симметрии); современную классификацию вирусов и её принципы; этапы взаимодействия вирусов с чувствительными клетками; методы культивирования вирусов, признаки репликации вирусов в клетке.
Исходный уровень знаний
Для усвоения материала темы необходимо знать структуру и функции нуклеиновых кислот, биосинтез белков (биохимия), строение клеток культуры тканей, строение куриного эмбриона (гистология), структуру, свойства и взаимодействие с клетками бактериофагов (микробиология).
Цель занятия
1. Изучить строение и культивирование вирусов.
2. Изучить принципы обнаружения и идентификации вирусов.
3.Изучить строение, антигенные свойства вируса гриппа.
4.Освоить принципы лабораторной диагностики гриппа.
5.Научить классифицировать препараты для диагностики, лечения и профилактики гриппа.
План изучения темы
1. Морфология, физиология и классификация вирусов.
2. Методы культивирования вирусов.
3. Методы обнаружения и идентификации вирусов.
4. Характеристика возбудителей гриппа.
5. Методы диагностики гриппа; лечение и специфическая профилактика гриппа.
После изучения темы студент должен уметь
1. Инерпретировать результаты реакции торможения (РТГА) при диагностике гриппа.
2. Классифицировать иммунобиологические препараты по теме занятия в соответствии с их значением.
Дополнительный материал к занятию
Методы культивирования вирусов
Для культивирования вирусов используют следующие методы:
1) заражение животных (внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, интраназально, заражение в мозг и другие);
2) на куриных эмбрионах после заражения их на хорион-аллантоисную оболочку, в аллантоисную полость, в амниотическую полость, в желточный мешок;
3) на культуре клеток различных тканей.
Культура ткани - это клетки ткани, выращенные вне организма на специальной питательной среде. Клетки ткани в искусственных условиях сохраняют присущий им обмен веществ и восприимчивость к определённым вирусам. Наиболее пригодными для культивирования вирусов являются клетки с быстрым ростом и высоким уровнем обмена веществ. По этой причине широко применяют эмбриональные ткани (фибробласты куриных эмбрионов, клетки амниона человека и др.), а также культуры тканей опухолей. Выращивание клеток культур тканей производят в специальных флаконах (колбы-матрацы, флаконы Карреля и др.) и в пробирках. Культура клеток для роста должна иметь какую-либо опору, например, пластинки стекла, стенку пробирки. В выросшую культуру ткани, которая покрывает стенку сосуда или пластинку стекла в виде однослойного клеточного пласта, засевают материал, содержащий вирус. Работу производят в стерильных условиях. Для подавления роста другой микрофлоры (кроме вирусов) вируссодержащий материал предварительно обрабатывают антибиотиками, чаще пенициллином и стрептомицином. Размножение вируса в клетках определяют по цитопатическому действию (ЦПД): в результате размножения вируса в клетках при микроскопии обнаруживаются включения, дегенеративные изменения и в конечном итоге клетки гибнут. Так как рост клеток прекращается, рН среды мало изменяется по сравнению с контролем (клетки без вируса). В связи с этим не изменяется и цвет среды. Питательной средой для культуры тканей могут быть различные растворы, состав которых приближается к составу жидкостей организма (синтетическая среда 199, солевой раствор Хенкса с сывороткой, гидролизат лактальбумина с сывороткой и другие). В настоящее время в вирусологической практике чаще всего применяют свежие культуры клеток (первичные или первично-трипсинизированные) и перевиваемые культуры (линии) клеток.
Первично-трипсинизированные культуры клеток готовят из органов взрослых животных (чаще из почек обезьян и других животных) и эмбрионов человека, куриных фибробластов путём трипсинизации кусочков тканей с последующим культивированием клеток в питательной среде. С этой целью кусочки тканей измельчают ножницами (или другим способом), а затем промывают буферным раствором Хенкса для удаления клеток крови и обрабатывают 0,25-0,3% раствором трипсина. Трипсин разрушает межклеточные мостики и разъединяет клетки. С помощью камеры Горяева подсчитывают количество клеток, разводят до концентрации 400000 клеток в 1 мл. Полученную взвесь клеток разливают в пробирки, плотно закрывают стерильными резиновыми пробками и помещают в термостат при 370С в почти горизонтальном положении (под углом 50) в специальных штативах. Через 3-4 дня на стенке пробирки образуется сплошной слой размножившихся клеток. Пробирки с хорошим ростом ткани отбирают для заражения вирусом.
Перевиваемые культуры клеток (растущие) – это стабильные линии клеток, пассируемые вне организма в течение многих лет. Их получают из злокачественных опухолей и из нормальных (эмбриональных) тканей человека и животных. К ним относятся: 1) линия Неlа - клетки карциномы шейки матки человека; 2) линия Нер-2 – клетки злокачественной опухоли гортани человека; 3) линия Детройт-6 – клетки, выделенные из костного мозга человека, больного раком лёгких; 4) линии А-0 и А-1 – клетки амниона человека; 5) линия СОЦ – клетки сердца обезьяны циномольгус и другие.
Полуперевиваемые или диплоидные культуры клеток – это клетки тканей человека, сохраняющие в процессе пассажей - до года - диплоидный набор хромосом. Диплоидные клетки человека не подвергаются злокачественному перерождению и этим выгодно отличаются от опухолевых.
Методы обнаружения вирусов в культуре ткани
Цитопатическое действие (ЦПД).
Реакция гемадсорбции.
Метод «цветных» проб.
Метод бляшек.
Иммунофлюоресцентный метод.
Реакция связывания комплемента.
Реакция гемагглютинации.
Реакция преципитации в агаре.
Заражение животных, восприимчивых к данному вирусу.