- •Государственное бюджетное образовательное учреждние высшего профессионального образования
- •Методические указания к самостоятельной подготовке студента.
- •План практических занятий.
- •Основная литература
- •Дополнительная литература
- •Периодические издания
- •Электронное информационное обеспечение и Интернет-ресурсы.
- •Занятие 1
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Правила для студентов, работающих на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии.
- •Обязанности дежурного.
- •Дополнительный материал к занятию. Правила микроскопии с иммерсионной системой.
- •Приготовление фиксированных препаратов из культур микроорганизмов.
- •Техника окраска по Граму в модификации Синёва.
- •Отношение бактерий к окраске по Граму.
- •Окраска по Цилю-Нильсену.
- •Контрольные вопросы.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 2
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 3
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 4
- •Контрольные вопросы по разделу «Морфология микробов» (подробную расшифровку вопросов смотрите в занятиях 1-3).
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Методы выделения чистых культур бактерий
- •Техника посева микроорганизмов на питательные среды
- •Приборы, методы и среды для культивирования анаэробов
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 6
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Дополнительный материал к занятию. Методы стерилизации
- •Методы контроля стерильности.
- •Методы частичного обеспложивания.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 7
- •Дополнительный материал к занятию.
- •Методы проведения санитарно-микробиологических исследований
- •Допустимые уровни бактериальной обсеменённости воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их функционального назначения и класса чистоты
- •Контрольные вопросы.
- •Задание на самостоятельную работу.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 8
- •Контрольные вопросы.
- •Контрольные практические задания по разделу «Физиология микробов.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Запись в тетради
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 11
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 12
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Занятие 13
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 15
- •Применение бактериофагов.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 16
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 17
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 18
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Дополнительный материал к занятию Микробиологические методы идентификации микробов рода Staphylococcus
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 19
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 20
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 21
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Занятие 23
- •Методы определения вида и типа вирусов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Занятие 24
- •План изучения темы.
- •После изучения темы студент должен уметь.
- •Контрольные вопросы.
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии.
- •Занятие 25
- •Задания для самостоятельной работы.
- •Задание для самостоятельной работы.
- •Задание для самостоятельной работы.
- •Задание для самостоятельной работы.
- •Задания для самостоятельной работы.
- •Работа студентов на практическом занятии.
- •Занятие 30
- •Занятие 31
- •Занятие 32
- •Работа студента на практическом занятии
План изучения темы.
1. Основные формы бактерий, факторы патогенности микроорганизмов, методика определения чувствительности микробов к антибиотикам.
2. Общая характеристика патогенных кокков.
3. Основные свойства патогенных кокков (стафилококков, стрептококков, гонококков, менингококков, пневмококков): таксономия, морфология и тинкториальные свойства, токсинообразование, устойчивость к действию физических и химических факторов, патогенность для животных, способы заражения и клинические проявления болезни у человека, иммунитет, лабораторная диагностика, препараты для специфической терапии и профилактики.
4. Характеристика аэробных грамотрицательных палочек (синегнойная палочка, протей, клебсиеллы, кишечная палочка) и лабораторная диагностика гнойных и раневых инфекций, вызываемых этими бактериями.
После изучения темы студент должен уметь.
1. Дифференцировать стафилококки, стрептококки и нейссерии в микропрепаратах.
2. Оценить результаты микроскопии препаратов гноя из уретры, взятого от больного с острой гонореей; спинно-мозговой жидкости, полученной от больного менингитом.
3. Идентифицировать синегнойную палочку и протей в микропрепаратах и по культуральным свойствам.
4. Классифицировать биологические препараты по теме занятия.
Дополнительный материал к занятию Микробиологические методы идентификации микробов рода Staphylococcus
Целью идентификации является установление рода и вида выделенной чистой культуры. Род стафилококка относится к семейству Micrococcaceae, в которое входят также роды Micrococcus и Planococcus. Общими чертами представителей этого семейства являются: морфология, положительная окраска по Граму; наличие фермента – каталазы.
Род Staphylococcus состоит из нескольких видов, наиболее важными из которых являются S.аureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Представители последних двух видов являются коагулазоотрицательными и долгое время считались непатогенными. В настоящее время доказано, что эпидермальный стафилококк может вызвать такие заболевания, как эндокардит, сепсис, конъюнктивит, инфекция ран и мочевыводящих путей, послеродовые инфекции, а сапрофитический – острый уретрит, цистит и др. На первом этапе устанавливается принадлежность выделенной культуры к семейству Micrococcaceae и роду Staphylococcus. На принадлежность культуры к семейству микрококков указывает положительная проба на каталазу, так как другие кокки (в частности стрептококки), каталазу не образуют. Для установления принадлежности культуры к роду Staphylococcus основными методами являются культуральный и биохимический.
Культуральный метод. Основным отличием стафилококков от микрококков является окраска колоний на плотной среде. Для стафилококков характерна золотистая или белая окраска колоний. У микрококков колонии окрашены в желтый или розовый цвет.
Биохимический метод. Он основан на том, что стафилококки являются факультативными анаэробами, микрококки – облигатными аэробами. В связи с этим стафилококки способны расти и ферментировать глюкозу в анаэробных условиях, а микрококки лишены этой возможности. Для определения этого признака культуру засевают петлёй в столбик полужидкой среды, содержащей 1% глюкозы и индикатор на кислые продукты. Сверху среду заливают стерильным вазелиновым маслом и ставят в термостат при 370С на 5 суток. Рост культуры и изменение цвета среды указывает на принадлежность её к роду Staphylococcus.
Видовая идентификация стафилококков. S.aureus отличается от других видов наличием золотистого или палевого пигмента (в большинстве случаев), наличием ферментов: плазмокоагулазы, лецитиназы (лецитовителлазы) и ДНК-азы. Плазмокоагулазу определяют путём посева культуры в цитратную кроличью плазму, после чего посевы помещают в термостат при 370С и регистрируют результаты через 1, 2, 4, 6 и 18 часов. Появление на дне пробирки студнеобразного сгустка любого размера считается положительным результатом реакции. Лецитиназу определяют путём посева культуры на молочно-желточный солевой агар. В составе яичного желтка имеется лецитовителлин, а наличие молока стимулирует образование пигмента. Посевы выдерживают в термостате при 370С 18-24 часа. О наличии лецитиназы свидетельствует образование вокруг колоний радужного венчика.
Определение ДНК-азы. Принцип метода: под действием ДНК-азы добавленная в плотную среду высокополимерная ДНК распадается на низкополимерные фрагменты. При этом мутная среда, содержащая высокополимерную ДНК, становится прозрачной. Ход исследования: на питательную среду в чашке Петри, включающую от 50 до 200 мг ДНК и 0,5 мл 10% раствора хлористого кальция, штрихами засевают исследуемую культуру и помещают в термостат при 370С на 18-24 часа. После этого на поверхность агара заливают 5-7 мл 3 моль/л раствора соляной кислоты. Если через 2-3 минуты вокруг посевов появляются зоны просветления, то реакция считается положительной
Если культура имеет золотистый (палевый), пигмент, коагулирует плазму и обладает хотя бы одним из двух других ферментов (лецитиназа, ДНК–аза) – её относят к виду золотистого стафилококка. При отсутствии полного набора указанных признаков (основным является наличие плазмокоагулазы) проводят идентификацию видов эпидермального и сапрофитического стафилококков по трем основным признакам, отличающим эти два вида (см. таблицу).
Вид стафилококка |
Устойчивость к новобиоцину |
Фосфатаза |
Ферментация маннита |
эпидермальный |
- |
+ |
- |
сапрофитический |
+ |
- |
+ |
Устойчивость к новобиоцину определяют путём посева культуры на среду, содержащую 2 мкг/мл новобиоцина. Ферментацию маннита проводят в аэробных условиях путём посева культуры бляшкой на поверхность среды в чашке Петри, содержащей 1% маннита и индикатор на кислые продукты. Появление окрашенных колоний (в цвет индикатора) указывает на способность культуры ферментировать маннит. Таким образом, для эпидермального стафилококка характерны:
- чувствительность к новобиоцину;
- наличие фосфатазы и неспособность окислять маннит.
Для сапрофитического стафилококка характерны противоположные свойства.
Выделенные культуры S.aureus обычно подвергают фаготипированию с международным набором фагов (22 фага). Определение фаготипа стафилококка помогает установить источник инфекции и принадлежность выделенной культуры к госпитальным штаммам.