Работа 40. Определение содержания кальция в молоке и гомогенате мышечной ткани комплексонометрическим методом

Метод основан на непосредственном титровании двунатриевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА; трилон Б) ионов кальция, связанных с мурексидом (окрашен в розовый цвет), который, отделяясь от кальция вследствие титрования ЭДТА, окрашивает раствор в фиолетовый цвет. По расходу ЭДТА на титрование ведут расчет количества кальция.

Ход опыта

Налить в 1-ю колбу (опыт) 1 мл молока или гомогената мышечной ткани и 24 мл дистиллированной воды, а во 2-ю колбу (контроль) - 25 мл дистиллированной воды.

В обе колбы прилить по 2 мл 10% раствора КОН и внести по несколько кристалликов (на кончике скальпеля) мурексида. Раствор приобретает розовый цвет.

Содержимое колб оттитровать 0,01 н раствором ЭДТА до фиолетового окрашивания раствора. Расчет произвести по формуле:

Х = (а— в)  0,2  100,

где: X - количество мг кальция в 100 мл исследуемого материала;

а - количество мл ЭДТА, израсходованное на титрование пробы с исследуемым материалом;

в - количество мл ЭДТА, израсходованное на титрование контрольной пробы;

0,2 - количество мг кальция, эквивалентное 1 мл 0,01 н раствора ЭДТА;

100 - коэффициент пересчета в мг%.

Задание: смотреть работу №39.

Работа 41. Определение количества неорганического фосфора в молоке и гомогенате мышечной ткани

Содержание неорганического фосфора в молоке в норме колеблется:

Коровье – 11,6 % (85 мг %);

Козье – 13,7 %;

Кобылицы – 18,0 %;

Женское – 7,3 %.

Понижение его уровня наблюдается при гиповитаминозе Д, остеомаляции, недостатке в кормах и т. д.

Сущность метода заключается в образовании комплексной фосфорномолибденовой кислоты, восстанавливаемой с помощью витамина С, эйконогена и других веществ (восстановители) в продукты, придающие раствору синюю окраску (молибденовая синь). Ее интенсивность пропорциональна количеству фосфора.

Ход опыта

Налить в пробирку (опыт) 3 мл дистиллированной воды, 1 мл молока или гомогената мышечной ткани, 1 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты, встряхнуть и отфильтровать через обеззоленный фильтр.

Взять 1 мл фильтрата, добавить к нему 0,5 мл молибденового реактива, 0,5 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты и 3 мл дистиллированной воды. Встряхнуть содержимое. Образуется синяя окраска раствора.

Одновременно приготовить контроль, для чего налить в пробирку 0,2 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты, 0,5 мл молибденового реактива, 0,5 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты и 3,8 мл дистиллированной воды. Через 10 мин провести колориметрию растворов на ФЭКе при длине волны 630—690 нм (красный фильтр) в кюветах шириной 1 см.

Используя калибровочную кривую, построенную ранее со стандартным раствором фосфора, рассчитать, его количество в исследуемой пробе с молоком или гомогенатом мышечной ткани.

Построение калибровочной кривой

Из КН₂РО₄ приготовить стандартный раствор с содержанием фосфора 0,02 мг/мл. Налить его в 7 пробирок (соответственно 0,10; 0,15; 0,20; 0,25; 0,30; 0,35 и 0,40 мл) и довести дистиллированной водой до 0,8 мл. Затем в каждую пробирку влить 0,2 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты, 0,5 мл молибденового реактива, 0,5 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты и 3 мл дистиллированной воды. Встряхнуть содержимое пробирок и через 10 мин произвести их колориметрию против контроля (его приготовление см. выше!). Для построения графика отложить на оси абсцисс количество мг фосфора в пробе, а на оси ординат - ее оптическую плотность (Д).

Задание: 1. Выполнить опыт.

2. Определить количество мг фосфора в исследуемой пробе и сделать пересчет на 100 мл исследуемого биоматериала (в мг%).

3. Сравнить полученный результат с содержанием фосфора в норме и при отклонении, указать предполагаемые причины и последствия.