- •По клинической лабораторной диагностике
- •По клинической лабораторной диагностике
- •Раздел 1. Организация лабораторной службы. Тема: Организационная структура клинико-диагностической лаборатории.
- •5.1.Организация лабораторной службы.
- •5.2. Приказы и постановления мз рб и нормативных документов, регулирующих деятельность клинической лабораторной службы.
- •Раздел 2. Общеклинические лабораторные исследования. Тема: Исследование физических и химических свойств мочи, микроскопия мочевого осадка.
- •5.1. Исследование физических свойств мочи.
- •5.2. Определение белка в моче
- •5.3. Определение глюкозы в моче.
- •5.4. Определение кетоновых тел в моче.
- •5.5.Определение билирубина в моче(проба Розина).
- •5.6. Качественное определение уробилиновых тел (реакция Флоранса).
- •5.7. Микроскопическое исследование мочи
- •Тема: Исследование мокроты, цереброспинальной жидкости, транссудатов и экссудатов.
- •5.1. Физические свойства мокроты.
- •5.2. Микроскопическое исследование нативных препаратов мокроты.
- •5.3. Исследование окрашенных препаратов мокроты.
- •5.4.Определение физических свойств ликвора
- •5.5.Определение химических свойств ликвора
- •6. Исследование транссудатов и экссудатов
- •Раздел 3. Лабораторные исследования периферической крови. Тема: Общий клинический анализ крови.
- •5.1.Определение концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом.
- •5.2. Подсчет количества эритроцитов периферической крови.
- •5.3. Определение цветового показателя.
- •5.4. Определение количества лейкоцитов.
- •Тема: Костно-мозговое кроветворение. Морфология клеток крови.
- •5.1. Микроскопическое исследование клеток периферической крови.
- •Раздел 4. Лабораторные исследования системы иммунитета. Тема: Иммунологические лабораторные исследования.
- •5.1. Подготовка биологического материала для иммунологического исследования.
- •Определение количества т-лимфоцитов в реакции розеткообразования с эритроцитами барана (е-рок)
- •5.3. Определение количества в-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши.
- •5.4.Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов по поглощению зимозана.
- •5.5. Определение базальной и стимулированной метаболической активности нейтрофилов в реакции восстановления нитросинего тетразолия (нст-тест ).
- •Раздел 5. Лабораторные исследования системы гемостаза. Тема: Исследование первичного гемостаза.
- •5.1. Определение длительности кровотечения по Дюке.
- •5.2. Подсчет количества тромбоцитов.
- •Тема: Лабораторная оценка коагуляционного гемостаза.
- •5.1. Определение времени свертывания крови по Ли-Уайту.
- •5.2. Определение ачтв (активированного частичного тромбопластинового времени), кефалин-каолинового времени плазмы.
- •5.3. Протромбиновое время (пв), протромбиновый индекс (пи), протромбиновое отношение (по), международное нормализованное отношение (мно).
- •5.4. Тромбиновое время.
- •5.5. Определение концентрации фибриногена а в плазме.
- •5.6. Определение фибриногена в.
- •5.7. Этаноловый тест.
- •Раздел 6. Биохимические исследования сыворотки крови.
- •5.1. Определение общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (Кингслея—Вейксельбаума)
- •5.2.Определение содержания альбумина в сыворотке (плазме) крови по реакции с бромкрезоловым зеленым
- •5.3. Определение мочевины в сыворотке крови и моче ферментативным методом
- •5.4. Определение креатинина в сыворотке крови и моче по цветной реакции Яффе (метод Поппера и соавт.)
- •5.5. Кинетический вариант определения креатинина
- •5.1. Колориметрический динитрофенилгидразиновый метод исследования активности аминотрансфераз в сыворотке крови (по Райтману, Френкелю)
- •5.2. Кинетический метод определения активности АсАт
- •5.3. Кинетический метод определения активности АлАт
- •5.4. Определение активности щелочной фосфатазы
- •5.5.Определение активности а-амилазы методом Каравея (микрометод).
- •Тема: Лабораторные исследования углеводного обмена и липидов.
- •5.1. Определение общих липидов в сыворотке крови по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом.
- •5.2. Определение общего холестерина сыворотки крови, основанный на реакции Либермана—Бурхардта (метод Илька).
- •5.3. Определение уровня холестерина липопротеинов высокой плотности (α-холестерина).
- •5.4. Определение уровня триглицеридов.
- •5.5.Определение содержания глюкозы ферментативным методом
- •5.1. Определение содержания билирубина колориметрическим диазометодом Йендрашика—Клеггорна—Грофа
- •Раздел 7. Аналитическая надежность и контроль качества клинических лабораторных исследований. Тема: Внутрилабораторный контроль качества.
- •5.1. Внутрилабораторный контроль качества воспроизводимости результатов.
- •Тема: Коллоквиум. Составление аналитического лабораторного заключения.
- •Общие положения
- •Меры предосторожности при оказании медицинской помощи, обслуживании больных, работе с биоматериалом.
- •Мероприятия при ранениях, контактах с кровью, другими биологическими материалами пациентов.
- •Регистрация аварий и наблюдение за пострадавшими
- •Кирпиченок Людмила Николаевна,Скребло Елена Иосифовна, Шилин Владимир Евгеньевич, Тихон Татьяна Владимировна
- •Практикум по клинической лабораторной
- •Диагностике
- •Учебно-методическое пособие
5.1. Определение содержания билирубина колориметрическим диазометодом Йендрашика—Клеггорна—Грофа
Принцип метода: при взаимодействии сульфаниловой кислоты с азотистокислым натрием образуется диазофенилсульфоновая кислота, которая, реагируя со связанным билирубином сыворотки, дает розово-фиолетовое окрашивание. По интенсивности его судят о концентрации билирубина, вступающего в прямую реакцию. При добавлении к сыворотке крови кофеинового реактива свободный билирубин переходит в растворимое диссоциированное состояние, благодаря чему он также вызывает розово-фиолетовое окрашивание раствора со смесью диазореактивов. По интенсивности последнего фотометрически определяют концентрацию общего билирубина. По разнице между содержанием общего и связанного билирубина находят количество свободного.
Реактивы:
кофеиновый реактив
диазосмесь
физиологический раствор (NаCl 0,9г/л)
Ход исследования:
В три пробирки (для определения уровня общего билирубина, связанного билирубина и постановки контрольной пробы на цвет сыворотки) вносят реактивы согласно таблице.
Допускается уменьшение объемов сыворотки и реагентов в 2,5 раза при работе с кюветами объемом 1 мл с шириной слоя 10 мм.
Отмерить, мл |
Общий билирубин |
Коньюгированный (связанный) билирубип |
Контрольная проба (для каждойсыворотки) |
Сыворотка |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Кофеиновый реактив |
1,75 |
— |
1,75 |
Физиологический раствор |
— |
1,75 |
0,25 |
Диазосмесь |
0,25 |
0,25 |
— |
Содержание конъюгированного (связанного) билирубина измеряют спустя 5—10 мин после добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии пробы в реакцию вступает свободный билирубин. При определении уровня общего билирубина пробу оставляют при комнатной температуре на 20 мин для развития окраски. В дальнейшем окраска пробы не изменяется. Колориметрируют пробы при длине волны 500—560 нм. В случае использования ФЭКа применяют кювету с шириной слоя 5 мм. Расчет содержания общего и связанного билирубина производят по калибровочному графику, построенному в соответствии с инструкцией к наборам реагентов «Билирубин-эталон». Для определения уровня несвязанного (свободного) билирубина из цифры общего его содержания вычитают показатель конъюгированного (связанного) билирубина (прямого).
В норме концентрация общего билирубина в плазме (сыворотке) у взрослых составляет 8,55—20,52 мкмоль/л; связанного — 3,1—5,4 мкмоль/л; свободного — 5,45—18,94 мкмоль/л. У новорожденных доношенных детей на 3—4 сутки жизни концентрация общего билирубина без угрозы развития ядерной желтухи составляет до 220,0 мкмоль/л; у недоношенных — до 170,0 мкмоль/л.
Клиническое значение.
Появление желтухи отмечается обычно при уровне билирубина в крови 27—34 мкмоль/л и более. Причинами гипербилирубинемии могут быть: повышенный гемолиз эритроцитов, нарушение функции печеночных клеток, задержка оттока желчи.
В первом случае говорят о так называемой гемолитической желтухе, во втором — о паренхиматозной, в третьем — о механической (или обтурационной, застойной) желтухе.
Принято считать, что желтуха легкой степени, если содержание билирубина в плазме (сыворотке) не превышает 85 мкмоль/л; средней степени — уровень его составляет 86—169 мкмоль/л; тяжелой степени — 170 мкмоль/л и более.
ЛИТЕРАТУРА:
Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. – Мн.: Беларусь, 2000. - в 2 т.
2.Камышников В.С. Техника лабораторных работ (учебник для фельдшеров-лаборантов), Минск, «Белорусская наука». 2001, 380 с.
3.Карпищенко А.И. Медицинские лабораторные технологии. – СПб.: Интер-Медика, 1999. - в 2 т.
5.Меньшиков В.В. Клиническая лабораторная аналитика. – М.: 8. Лабинформ, 1999-2001. - в 4 т.
Методы клинической лабораторной диагностики (учебник для фельдшеров лаборантов), 2001, 760 с, Авторы – преподавательский коллектив кафедры БелМАПО, под научной редакцией профессора В.С.Камышникова.
Горячковский А.М. Справочное пособие по клинической биохимии. – Одесса, ОКФА, 1994. - 416 с.
Долгов В.В., Киселевский Ю.В., Авдеева Н.А. и др. Лабораторная диагностика кислотно-основного состояния. – М.: РМАПО, 1997. -51 с.
Долгов В.В. Щетникович К.А. Методические аспекты определения индивидуальных белков. – СПб.: Лабсистемс, 1999. - 88 с.
Колб В.Г., Камышников В.С. Лабораторная диагностика хирургических заболеваний. – Мн.: Вышэйшая школа, 1993. - 188 с.