- •По клинической лабораторной диагностике
- •По клинической лабораторной диагностике
- •Раздел 1. Организация лабораторной службы. Тема: Организационная структура клинико-диагностической лаборатории.
- •5.1.Организация лабораторной службы.
- •5.2. Приказы и постановления мз рб и нормативных документов, регулирующих деятельность клинической лабораторной службы.
- •Раздел 2. Общеклинические лабораторные исследования. Тема: Исследование физических и химических свойств мочи, микроскопия мочевого осадка.
- •5.1. Исследование физических свойств мочи.
- •5.2. Определение белка в моче
- •5.3. Определение глюкозы в моче.
- •5.4. Определение кетоновых тел в моче.
- •5.5.Определение билирубина в моче(проба Розина).
- •5.6. Качественное определение уробилиновых тел (реакция Флоранса).
- •5.7. Микроскопическое исследование мочи
- •Тема: Исследование мокроты, цереброспинальной жидкости, транссудатов и экссудатов.
- •5.1. Физические свойства мокроты.
- •5.2. Микроскопическое исследование нативных препаратов мокроты.
- •5.3. Исследование окрашенных препаратов мокроты.
- •5.4.Определение физических свойств ликвора
- •5.5.Определение химических свойств ликвора
- •6. Исследование транссудатов и экссудатов
- •Раздел 3. Лабораторные исследования периферической крови. Тема: Общий клинический анализ крови.
- •5.1.Определение концентрации гемоглобина гемиглобинцианидным методом.
- •5.2. Подсчет количества эритроцитов периферической крови.
- •5.3. Определение цветового показателя.
- •5.4. Определение количества лейкоцитов.
- •Тема: Костно-мозговое кроветворение. Морфология клеток крови.
- •5.1. Микроскопическое исследование клеток периферической крови.
- •Раздел 4. Лабораторные исследования системы иммунитета. Тема: Иммунологические лабораторные исследования.
- •5.1. Подготовка биологического материала для иммунологического исследования.
- •Определение количества т-лимфоцитов в реакции розеткообразования с эритроцитами барана (е-рок)
- •5.3. Определение количества в-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши.
- •5.4.Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов по поглощению зимозана.
- •5.5. Определение базальной и стимулированной метаболической активности нейтрофилов в реакции восстановления нитросинего тетразолия (нст-тест ).
- •Раздел 5. Лабораторные исследования системы гемостаза. Тема: Исследование первичного гемостаза.
- •5.1. Определение длительности кровотечения по Дюке.
- •5.2. Подсчет количества тромбоцитов.
- •Тема: Лабораторная оценка коагуляционного гемостаза.
- •5.1. Определение времени свертывания крови по Ли-Уайту.
- •5.2. Определение ачтв (активированного частичного тромбопластинового времени), кефалин-каолинового времени плазмы.
- •5.3. Протромбиновое время (пв), протромбиновый индекс (пи), протромбиновое отношение (по), международное нормализованное отношение (мно).
- •5.4. Тромбиновое время.
- •5.5. Определение концентрации фибриногена а в плазме.
- •5.6. Определение фибриногена в.
- •5.7. Этаноловый тест.
- •Раздел 6. Биохимические исследования сыворотки крови.
- •5.1. Определение общего белка в сыворотке (плазме) крови биуретовым методом (Кингслея—Вейксельбаума)
- •5.2.Определение содержания альбумина в сыворотке (плазме) крови по реакции с бромкрезоловым зеленым
- •5.3. Определение мочевины в сыворотке крови и моче ферментативным методом
- •5.4. Определение креатинина в сыворотке крови и моче по цветной реакции Яффе (метод Поппера и соавт.)
- •5.5. Кинетический вариант определения креатинина
- •5.1. Колориметрический динитрофенилгидразиновый метод исследования активности аминотрансфераз в сыворотке крови (по Райтману, Френкелю)
- •5.2. Кинетический метод определения активности АсАт
- •5.3. Кинетический метод определения активности АлАт
- •5.4. Определение активности щелочной фосфатазы
- •5.5.Определение активности а-амилазы методом Каравея (микрометод).
- •Тема: Лабораторные исследования углеводного обмена и липидов.
- •5.1. Определение общих липидов в сыворотке крови по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом.
- •5.2. Определение общего холестерина сыворотки крови, основанный на реакции Либермана—Бурхардта (метод Илька).
- •5.3. Определение уровня холестерина липопротеинов высокой плотности (α-холестерина).
- •5.4. Определение уровня триглицеридов.
- •5.5.Определение содержания глюкозы ферментативным методом
- •5.1. Определение содержания билирубина колориметрическим диазометодом Йендрашика—Клеггорна—Грофа
- •Раздел 7. Аналитическая надежность и контроль качества клинических лабораторных исследований. Тема: Внутрилабораторный контроль качества.
- •5.1. Внутрилабораторный контроль качества воспроизводимости результатов.
- •Тема: Коллоквиум. Составление аналитического лабораторного заключения.
- •Общие положения
- •Меры предосторожности при оказании медицинской помощи, обслуживании больных, работе с биоматериалом.
- •Мероприятия при ранениях, контактах с кровью, другими биологическими материалами пациентов.
- •Регистрация аварий и наблюдение за пострадавшими
- •Кирпиченок Людмила Николаевна,Скребло Елена Иосифовна, Шилин Владимир Евгеньевич, Тихон Татьяна Владимировна
- •Практикум по клинической лабораторной
- •Диагностике
- •Учебно-методическое пособие
5.3. Определение количества в-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши.
Принцип метода: на поверхности В-лимфоцитов находятся рецепторы, имеющие сродство к эритроцитам мыши. При смешивании эритроцитов мыши и лимфоцитов человека, имеющих соответствующие рецепторы, происходит «прилипание» эритроцитов к лимфоцитам и образование «розеток». Рецепторы к эритроцитам мыши несут преимущественно молодые формы В-клеток.
Реактивы:
• 0,9% раствор хлористого натрия;
• раствор Хенкса;
• 0,06% раствор глютарового альдегида на растворе Хенкса;
• свежие эритроциты беспородных мышей;
• азур-эозин по Романовскому;
• этанол 96°;
• 0,1% р-р трипанового синего с эозином,
• 0,84% водный раствор хлористого аммония.
Ход исследования.
1.Получение эритроцитов мыши.
Эритроциты мыши (ЭМ) берут накануне в сухую чистую пробирку с гепарином (хранение при 4°С в течение 1 недели). Мышиные эритроциты получают путем декапитации беспородных или линейных мышей. В последнем случае желательно взять мышей нескольких линий, так как они дают разный уровень ЭМ-розеток. 0,1-0,2 мл суспензии ЭМ переносят в пробирку, добавляют 5-10 мл физиологического раствора и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10-20 мин. Процедуру повторяют трижды, пока надосадочная жидкость не станет прозрачной.
После отмывания из осадка берут 0,035 мл отмытых ЭМ и разводят в 3,5мл раствора Хенкса. Проверяют суспензию клеток в камере Горяева на отсутствие конгломератов и концентрацию ЭМ. Для этого 0,1 мл готовой однородной суспензии ЭМ доводят до 1 мл раствором Хенкса и подсчитывают в камере Горяева (30-50 эритроцитов в 1 квадрате).
Постановка реакции.
Реакцию ставят в центрифужных пробирках. Смешивают в равных объёмах по 0,1 мл рабочей суспензии ЭМ и взвеси лейкоцитов. Соотношение ЭМ:лейкоциты должно составлять 30-50:1.
Смеси инкубируют в термостате при 37°С 15 мин, затем центрифугируют при 1000 об/ мин и инкубируют в холодильнике при 4°С в течение часа.
Надосадочную жидкость удаляют пипеткой, к осадку клеток добавляют 0,1 мл 0,06% раствора глютарового альдегида, осторожно ресуспензируют, без вспенивания; оставляют на 1 мин при комнатной температуре, а затем делают мазки на обезжиренных предметных стёклах,
Мазки высушивают, фиксируют 96° этанолом 10 минут, окрашивают азур-эозином по Романовскому. Подсчитывают под иммерсионным увеличением количество розеткообразующих клеток на 200 лимфоцитов, считая за розетку лимфоцит, прикрепивший 3 и более эритроцитов.
Норма для взрослых здоровых лиц среднего возраста - 2-7 %.
Клиническое значение.
Относительное количество ЭМ-розеткообразующих В-лимфоцитов в крови является достаточно стабильным показателем, мало изменяющимся в зависимости от физиологического состояния организма, а также при патологических процессах.
Повышение количества В-лимфоцитов с рецепторами к ЭМ до 15-20 % может наблюдаться при хронических, длительно текущих воспалительных заболеваниях и является свидетельством активной пролиферации В-клеток в ответ на антигенный стимул.