Раздел 6. Биохимические исследования сыворотки крови.

Тема: Лабораторные исследования белков и небелковых азотистых соединений.

Концентрация общего белка в сыворотке зависит главным образом от синтеза и распада двух основных белковых фракций — альбумина и глобулинов. Синтез белков плазмы крови осуществляется в основном в клетках печени и ретикулоэндотелиальной системы.

Физиологическая роль белков:

- обеспечивают оптимальный объем циркулирующей крови, поддерживая коллоидно-онкотическое давление, не позволяя воде выходить из кровеносного русла;

- принимают участие в процессах свертывания крови;

- являются одной из буферных систем крови, поддерживающих постоянство рН;

- выполняют транспортную функцию, соединяясь с различными веществами (железо, кальций, витамины и др.), а также с лекарственными препаратами, доставляя их к тканям;

- поддерживают нормальный уровень катионов — кальция, железа, меди, магния в крови, образуя с ними недиализируемые соединения;

- играют важнейшую роль в иммунных процессах;

- служат резервом аминокислот;

- входят в состав гормонов, ферментов и других биологически активных веществ.

Мочевина является конечным продуктом метаболизма белков в организме. Она удаляется из организма посредством клубочковой фильтрации, 40—50 % ее реабсорбируется канальцевым эпителием почек и активно секретируется тубулярными клетками. При патологии сдвиги в уровне мочевины крови зависят от соотношения процессов мочевинообразования и ее выведения.

Выведение мочевины с мочой пропорционально содержанию белка в рационе питания, а также скорости метаболизма эндогенных белков. Выводимая с мочой мочевина составляет около 90 % выводимых из организма азотистых метаболитов. У взрослых в состоянии азотис­того равновесия выделение 500 ммоль мочевины (или 14 г азота мочевины) в течение суток соответствует потреблению около 100 г белка.

В клинической практике определение мочевины в моче используется для контроля за состоянием процессов анаболизма и катаболизма в организме. Это имеет большое значение, особенно у тяжелых реанимационных больных, получающих энтеральное (зондовое) и парентеральное питание. Зная, какие процессы преобладают у больного — повышенное выделение мочевины с мочой (отрицательный азотистый баланс) или уменьшение выделения мочевины с мочой (положительный азотистый баланс), можно рассчитать необходимое больному количество белковых препаратов.

Креатинин является конечным продуктом распада креатина, который играет важную роль в энергетическом обмене мышечной и других тканей. Креатин синтезируется в основном в печени, откуда он с током крови поступает в мышечную ткань. Здесь креатин, фосфорилируясь, превращается в креатинфосфат. Креатинфосфат является макроэргом и участвует в переносе энергии в клетке между митохондриями и миофибрилами. Концентрация креати­нина в крови зависит от его образования и выведения. Его образование непосредственно за­висит от состояния мышечной массы. Креатинин удаляется почками посредством клубочковой фильтрации, но, в отличие от мочевины, не реабсорбируется, что нашло применение в лабораторной диагностике (проба Реберга—Тареева).

Содержание креатинина в крови здоровых людей — величина довольно постоянная и мало зависящая от питания и других экстраренальных факторов.

Определение креатинина широко используется в диагностике заболеваний почек. Креатинин в меньшей степени зависит от уровня катаболизма, не реабсорбируется в почках, поэтому в большей мере отражает степень нарушения выделительной и фильтрационной функций почек. Уменьшение содержания креатинина в крови диагностического значения не имеет.

Фракции белков

Электрофоретическое разделение белков позволяет изучать их биологические и физические характеристики, являющиеся индикатором заболеваний печени и почек, иммунной системы, острых и хронических инфекций и многих других видов патологии. Используя ацетат целлюлозу, можно разделить сывороточные белки на 5 фракций: альбумин и 4 глобулиновых группы: альфа1, альфа2, бета (часто подразделяются на 2 группы - бета 1 и бета 2) и гамма.

Альбумин - низкомолекулярный сывороточный белок (м.в. около 70000 дальтон), образующий комплексы с многими протеинами, гормонами, билиарными пигментами, кальцием и другими субстанциями, играет ключевую роль в поддержании осмотического давления.

Все 4 группы глобулинов характеризуются гораздо более высоким молекулярным весом, чем альбумин. Альфа- и бета-глобулины также являются транспортными формами протеинов, образуя комплексы с пигментами, металлами, углеводами и липидами. Эти белки очень гетерогенны, разброс их молекулярного веса от 40000 до 1000000 дальтон. Гамма глобулины, или иммуноноглобулины характеризуются молекулярным весом от 15000 дальтон до более чем 1000000 дальтон (для IgM).

1.ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ.

1.1. Изучить правила подготовки пациента, забора и транспортировки материала для исследования лабораторных показателей, характеризующих белковый обмен их диагностическое значение.

1.2. Освоить методы исследования белкового обмена и дать аналитическую оценку методов.

2. СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ.

2.1.Тестовый контроль исходного уровня знаний.

2.2.Разбор теоретического материала по теме занятия.

2.3. Лабораторная работа: «Определение показателей белкового обмена».

3. ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ.

3.1. Биологические функции белков, диагностическое значение исследования белков крови.

3.2. Лабораторные показатели, характеризующие белковый обмен.

3.3. Определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом.

3.4. Белковые фракции. Лабораторные методы исследования белкового спектра крови (осаждение нейтральными солями, электрофоретическое фракционирование).

3.5. Остаточный азот и его компоненты.

3.6. Методы определения мочевины, креатинина, мочевой кислоты.

4. ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОГО ИЗУЧЕНИЯ.

4.1. Парапротеины. Понятие, методы определения.

4.2. Принцип электрофоретического фракционирования белков.

5. ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА.