Выделение из молока казеина кислотой, альбумина и глобулин – нагреванием

Из молока при добавлении слабого раствора кислоты выделяется казеин, а из прозрачного фильтрата при кипячении – альбумин и глобулин.

Техника определения:

1. В колбу на 100-150 мл пипеткой отмерить 10 мл молока и 50 мл дистиллированной воды. Содержимое колбы размешать и из бюретки прилить по каплям 5 %-ную уксусную кислоту до появления заметных хлопьев казеина.

2. Отфильтровать выпавший осадок казеина.

3. В пробирке вскипятить 5-6 мл прозрачного фильтрата, наблюдать сначала появление мути, а затем выпадение хлопьев альбумина и глобулина.

Выделение из молока казеина сычужным ферментом

Техника определения:

1. В фарфоровую чашку отмерить 40-50 мл молока, нагретого до 35-40⁰С. Прилить к молоку при быстром помешивании 5 мл 2 %-ного раствора сычужного фермента.

2. Молоко оставить в покое на 2-3 мин, а затем наблюдать появление сгустка параказеина.

3. Шпателем разрезать сгусток во взаимно перпендикулярных направлениях; подогреть содержимое чашки до 45⁰С и наблюдать в местах разреза выделение сыворотки; сгусток попробовать на вкус.

Определение содержания общего белка и казеина в молоке формольным методом

Метод основан на том, что водный нейтральный раствор аминокислот в присутствии нейтрального формалина способен повышать кислотность с образованием соединений, в которых оба водорода аминогруппы замещаются метильной группой:

/ Н ^/

R-CH-COOH+О=С RCHCOOH+HO

| \ Н |

NH₂ N = CH₂

аминогруппа метильная группа

Свободную группу СООН оттитровывают щелочью:

R - СН - СООН RCHCOONa + H₂ О

| + NaOH |

N = СН₂ N = СН₂

Приготовление 1 %-ного спиртового раствора фенолфталеина.

1г фенолфталеина растворить в 70 мл этилового спирта и добавить 30 мл воды. Для приготовления нейтрализованного формалина к 50 мл 30-40 %-ного формалина добавить 0,5 мл 1 %-ного спиртового раствора фенолфталеина и при перемешивании оттитровать нормальным раствором NaOH до слабо-розового окрашивания.

Техника определения:

1. В колбу на 50-100 мл отмерить пипеткой 10 мл молока, добавить 10 капель 1 %-ного спиртового раствора фенолфталеина, все размешать и оттитровать 0,1 н. раствором щелочи до слабо-розового окрашивания, не исчезающего при взбалтывании.

2. В колбу добавить 2 мл нейтрализованного формалина, размешать. Слабо-розовое окрашивание исчезает.

3. В бюретке отметить уровень щелочи и содержимое колбы вновь оттитровать до такого же слабо-розового окрашивания, как и в первый раз, не исчезающего при помешивании.

4. Сделать отсчет по бюретке, показывающей количество 0,1 н. раствора щелочи, пошедшей на титрование смеси в колбе, и рассчитать содержание общего белка и казеина в молоке. Для установления содержания общего белка количество 0,1 н. раствора щелочи, пошедшее на титрование, после добавления формалина умножить на коэффициент 1,94, а для определения содержания казеина – на коэффициент 1,51.

Пример. После добавления формалина на титрование содержимого колбы пошло 1,7 мл 0,1 н. раствора NaOH. Сколько общего белка и казеина в молоке? Содержание общего белка в молоке: 1,7 × 1,94 =3,3 %. Содержание казеина: 1,7 × 1,51 =2,57 %.