- •Курск – 2013
- •Цель и задачи дисциплины
- •Место дисциплины в структуре основной образовательной программы (ооп)
- •Требования к результатам освоения дисциплины
- •Процесс изучения дисциплины направлен на формирование следующих компетенций:
- •Методические указания к самостоятельной подготовке студента к практическому занятию
- •План практических занятий по микробиологии, вирусологии
- •Основная литература
- •Дополнительная литература
- •Периодические издания (журналы)
- •Электронное информационное обеспечение и интернет-ресурсы
- •Раздел 1.
- •Занятие 1
- •Бактериологическая лаборатория. Морфология бактерий. Микроскопический метод исследования
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Правила для студентов, работающих на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии
- •Обязанности дежурного
- •Дополнительный материал к занятию Методы обеззараживания отработанного материала и контаминированных патогенными микробами объектов внешней среды
- •Мероприятия при возникновении аварии
- •Приготовление фиксированных препаратов из культур микроорганизмов
- •Правила работы с микроскопом при использовании иммерсионной системы
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •1. Ознакомление с правилами работы в микробиологической лаборатории.
- •Занятие 2
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 3
- •Структура бактериальной клетки
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 4
- •Морфология микроскопических грибов, спирохет, актиномицетов, микоплазм, риккетсий, хламидий
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 5
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Раздел 2.
- •Физиология микробов. Экология микробов (микроэкология). Симбиоз человека с микробами.
- •Темы практических занятий раздела «Физиология микробов. Экология микробов (микроэкология). Симбиоз человека с микробами».
- •Содержание компетенций и планируемый пороговый уровень развития компетенций в результате изучения раздела
- •«Физиология микробов. Экология микробов (микроэкология). Симбиоз человека с микробами».
- •Занятие 6
- •Методы выделения чистых культур бактерий
- •Техника посева микроорганизмов на питательные среды
- •Приборы, методы и среды для культивирования анаэробов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 7
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Методы стерилизации
- •Методы частичного обеспложивания
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 8
- •Выделение чистых культур бактерий (окончание). Изучение ферментативных свойств бактерий. Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха. Нормальная микрофлора организма человека
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Методы проведения санитарно-микробиологических исследований
- •Определение общего числа микроорганизмов
- •Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий
- •Микробиологические и паразитологические показатели питьевой воды (согласно СанПиНу 2.1.4.559–96)
- •Метод мембранных фильтров
- •Бродильный метод
- •Допустимые уровни бактериальной обсеменённости воздушной среды помещений лечебных учреждений в зависимости от их функционального назначения и класса чистоты
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 9
- •Санитарно-бактериологическое исследование воды и воздуха (окончание). Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы. Нормальная микрофлора организма человека
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Некоторые дезинфицируюшие вещества, применяемые в лпу
- •Режимы обеззараживания различных объектов, заражённых патогенными микроорганизмами
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие № 10
- •Контрольные практические
- •Задания по разделу «физиология микробов»
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 11
- •Химиотерапия и антибиотики. Бактериофагия
- •Цель самоподготовки
- •Метод серийных разведений
- •Количественные методы или методы титрования бактериофагов
- •Метод титрования бактериофага по Аппельману (на жидкой питательной среде)
- •Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде)
- •Фаготипирование бактерий
- •Применение бактериофагов
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 12
- •Антибиотики (окончание). Генетика микробов, генная инженерия, биотехнология
- •Цель самоподготовки
- •Техника пцр
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Раздел 4.
- •Учение об инфекции. Иммунологические основы диагностики лечения и профилактики заболеваний.
- •Темы практических занятий раздела «Учение об инфекции. Иммунологические основы диагностики лечения и профилактики заболеваний».
- •Содержание компетенций и планируемый пороговый уровень развития компетенций в результате изучения раздела
- •«Учение об инфекции. Иммунологические основы диагностики лечения и профилактики заболеваний».
- •Занятие 13
- •Заражение лабораторных животных проводят для:
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 14
- •Иммунитет. Факторы врождённого иммунитета. Антигены
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 15
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 16
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Реакция локального гемолиза в геле
- •Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Иммуноблоттинг
- •Радиоиммунный анализ (риа)
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 17
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Лечебно-профилактические препараты
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 18
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные практические
- •Задания по разделу «Инфекция и иммунитет»
- •Контрольные вопросы
- •Частная микробиология
- •Раздел 5.
- •Частная медицинская бактериология и микология.
- •Темы практических занятий раздела «Частная медицинская бактериология и микология».
- •Содержание компетенций и планируемый пороговый уровень развития компетенций в результате изучения раздела
- •«Частная медицинская бактериология и микология».
- •Занятие 19
- •Общая характеристика возбудителей кишечных инфекций. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и паратифов
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 20
- •Микробиологическая диагностика брюшного тифа, паратифов, бактериальной дизентерии, эшерихиозов
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 21
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 22
- •Микробиологический диагноз брюшного тифа, паратифов, коли-инфекции (окончание). Микробиологический диагноз холеры. Микробиологический диагноз кампилобактериозов и хеликобактерной инфекции
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Порядок взятия и доставки материала для исследования на холеру
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 23
- •Микробиологический диагноз холеры (окончание) итог по разделу «возбудители кишечных инфекций»
- •План изучения темы
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы по разделу
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 24
- •Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студентов на практическом занятии
- •Занятие 25
- •Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых гноеродными кокками (продолжение), грамотрицательными палочковидными микроорганизмами и анаэробными микроорганизмами
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию Ускоренные методы диагностики анаэробной газовой инфекции
- •Микробиологические методы идентификации микробов рода Staphylococcus
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 26 микробиологическая диагностика анаэробных инфекций, заболеваний, вызванных грамотрицательными палочковидными микроорганизмами (продолжение), дифтерии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 27
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •План изучения темы
- •После изучения раздела студент должен уметь
- •Контрольные вопросы для подготовки к итоговому занятию
- •Занятие 29 микробиологический диагноз зоонозных инфекций - чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы
- •Цель самоподготовки
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 30 микробиологическая диагностика чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы (окончание). Микробиологическая диагностика спирохетозов
- •Цель самоподготовки
- •Дополнительный материал к занятию Методы диагностики сифилиса Выявление возбудителя
- •Техника взятия крови для серологических реакций на сифилис
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 31 микробиологическая диагностика микозов, риккетсиозов, хламидиозов и микоплазмозов
- •Цель самоподготовки
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Раздел 6.
- •Медицинская вирусология.
- •Темы практических занятий раздела «Медицинская вирусология».
- •Содержание компетенций и планируемый пороговый уровень развития компетенций в результате изучения раздела
- •«Медицинская вирусология».
- •Занятие 32 морфология и физиология вирусов. Методы культивирования и обнаружения вирусов. Возбудители гриппа
- •Цель самоподготовки
- •Методы определения вида и типа вирусов
- •Контрольные вопросы
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 33 вирусы - возбудители острых респираторных заболеваний (орз), герпетической инфекции
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки.
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Серологический метод
- •Контрольные вопросы
- •Задания для выполнения в процессе самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Занятие 35 возбудители вирусных гепатитов. Возбудители геморрагической лихорадки с почечным синдромом, лихорадки марбург, лихорадки эбола
- •Цель самоподготовки
- •Исходный уровень знаний
- •Цель занятия
- •План изучения темы
- •После изучения темы студент должен уметь
- •Дополнительный материал к занятию
- •Контрольные вопросы
- •Самостоятельная работа студента на практическом занятии
- •Занятие 36 возбудители вич-инфекции. Онкогенные вирусы. Возбудители медленных вирусных инфекций. Прионы
- •Цель самоподготовки
- •Работа студента на практическом занятии
- •Работа студента на практическом занятии
- •Экзаменационные вопросы по микробиологии, вирусологии
- •I раздел
- •II раздел
- •III раздел
- •305041, Г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
- •305041, Г. Курск, ул. К. Маркса, 3.
Микробиологические методы идентификации микробов рода Staphylococcus
Целью идентификации является установление рода и вида выделенной чистой культуры. Род стафилококка относится к семейству Micrococcaceae, в которое входят также роды Micrococcus и Planococcus. Общими чертами представителей этого семейства являются: морфология, положительная окраска по Граму; наличие фермента – каталазы.
Род Staphylococcus состоит из нескольких видов, наиболее важными из которых являются S.аureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Представители последних двух видов являются коагулазоотрицательными и долгое время считались непатогенными. В настоящее время доказано, что эпидермальный стафилококк может вызвать такие заболевания, как эндокардит, сепсис, конъюнктивит, инфекция ран и мочевыводящих путей, послеродовые инфекции, а сапрофитический – острый уретрит, цистит и др. На первом этапе устанавливается принадлежность выделенной культуры к семейству Micrococcaceae и роду Staphylococcus. На принадлежность культуры к семейству микрококков указывает положительная проба на каталазу, так как другие кокки (в частности стрептококки), каталазу не образуют. Для установления принадлежности культуры к роду Staphylococcus основными методами являются культуральный и биохимический.
Культуральный метод. Основным отличием стафилококков от микрококков является окраска колоний на плотной среде. Для стафилококков характерна золотистая или белая окраска колоний. У микрококков колонии окрашены в желтый или розовый цвет.
Биохимический метод. Он основан на том, что стафилококки являются факультативными анаэробами, микрококки – облигатными аэробами. В связи с этим стафилококки способны расти и ферментировать глюкозу в анаэробных условиях, а микрококки лишены этой возможности. Для определения этого признака культуру засевают петлёй в столбик полужидкой среды, содержащей 1% глюкозы и индикатор на кислые продукты. Сверху среду заливают стерильным вазелиновым маслом и ставят в термостат при 370С на 5 суток. Рост культуры и изменение цвета среды указывает на принадлежность её к роду Staphylococcus.
Видовая идентификация стафилококков. S.aureus отличается от других видов наличием золотистого или палевого пигмента (в большинстве случаев), наличием ферментов: плазмокоагулазы, лецитиназы (лецитовителлазы) и ДНК-азы. Плазмокоагулазу определяют путём посева культуры в цитратную кроличью плазму, после чего посевы помещают в термостат при 370С и регистрируют результаты через 1, 2, 4, 6 и 18 часов. Появление на дне пробирки студнеобразного сгустка любого размера считается положительным результатом реакции. Лецитиназу определяют путём посева культуры на молочно-желточный солевой агар. В составе яичного желтка имеется лецитовителлин, а наличие молока стимулирует образование пигмента. Посевы выдерживают в термостате при 370С 18-24 часа. О наличии лецитиназы свидетельствует образование вокруг колоний радужного венчика.
Определение ДНК-азы. Принцип метода: под действием ДНК-азы добавленная в плотную среду высокополимерная ДНК распадается на низкополимерные фрагменты. При этом мутная среда, содержащая высокополимерную ДНК, становится прозрачной. Ход исследования: на питательную среду в чашке Петри, включающую от 50 до 200 мг ДНК и 0,5 мл 10% раствора хлористого кальция, штрихами засевают исследуемую культуру и помещают в термостат при 370С на 18-24 часа. После этого на поверхность агара заливают 5-7 мл 3 моль/л раствора соляной кислоты. Если через 2-3 минуты вокруг посевов появляются зоны просветления, то реакция считается положительной
Если культура имеет золотистый (палевый), пигмент, коагулирует плазму и обладает хотя бы одним из двух других ферментов (лецитиназа, ДНК–аза) – её относят к виду золотистого стафилококка. При отсутствии полного набора указанных признаков (основным является наличие плазмокоагулазы) проводят идентификацию видов эпидермального и сапрофитического стафилококков по трем основным признакам, отличающим эти два вида (см. таблицу).
Вид стафилококка |
Устойчивость к новобиоцину |
Фосфатаза |
Ферментация маннита |
эпидермальный |
- |
+ |
- |
сапрофитический |
+ |
- |
+ |
Устойчивость к новобиоцину определяют путём посева культуры на среду, содержащую 2 мкг/мл новобиоцина. Ферментацию маннита проводят в аэробных условиях путём посева культуры бляшкой на поверхность среды в чашке Петри, содержащей 1% маннита и индикатор на кислые продукты. Появление окрашенных колоний (в цвет индикатора) указывает на способность культуры ферментировать маннит. Таким образом, для эпидермального стафилококка характерны:
- чувствительность к новобиоцину;
- наличие фосфатазы и неспособность окислять маннит.
Для сапрофитического стафилококка характерны противоположные свойства.
Выделенные культуры S.aureus обычно подвергают фаготипированию с международным набором фагов (22 фага). Определение фаготипа стафилококка помогает установить источник инфекции и принадлежность выделенной культуры к госпитальным штаммам.