6 курс / Судебная медицина / Актуальные_вопросы_судебно_медицинской_экспертизы_трупа_В_Клевно

Виды выполненных экспертиз

500

400

300

200

100

0

Рис. 2. Соотношение экспертиз при заданных вопросах (100%) и расширении объёма исследований (на 27,9%).

вещественных доказательствах половая принадлежность крови определена в

58,1%.

На результаты исследований большое влияние могут оказывать ряд факторов, воздействующих на вещественные доказательства до их доставки на экспертизу в отделение. Чаще всего такими факторами являются, например, изъятие биологических объектов после туалета половых органов; хранение вещественных доказательств в полиэтиленовых пакетах во влажном состоянии и проч. Все это приводит к отрицательным результатам исследования.

В нашем отделении проводится определение групповой принадлежности сперматозоидов реакцией иммунофлюоресценции (РИФ) – тонкой ювелирной реакции, требующей очень высокой квалификации эксперта-цитолога. В отделении этой реакцией в совершенстве владеют всего 4-5 экспертов.

Несмотря на все сложности и трудности исследования, удалось установить группу отдельных сперматозоидов в 69,1% экспертиз (табл. 6).

Учитывая, что, в целом, отделением выполняется ежегодно около 4000 экспертиз, комиссионные (комплексные) исследования с участием цитолога составляют примерно четвертую часть (табл. 7).

Таблица 7

Количество комиссионных судебно-биологических экспертиз

Таким образом, выполненный в судебно-биологическом отделении анализ судебно-цитологических экспертиз, позволяет заключить, что:

1)судебно-биологические экспертизы, проводящиеся совместно двумя или тремя экспертами, следует считать полноценными комиссионными;

2)такие экспертизы выполняются в 89,3% по постановлениям прокуратуры по категориям уголовных дел, связанных с наиболее тяжкими преступлениями;

3)их выполнение требует высокой квалификации экспертов, как биологов, так и цитологов;

4)проводимые только в нашем Бюро в судебно-биологическом отделении редкие исследования требуют особого учета объемов выполненной работы;

5)предлагается рассмотреть возможность создания в судебнобиологическом отделении самостоятельного подразделения (лаборатории), которое могло бы заниматься выполнением только сложных комиссионных экспертиз.

Сидоров В.Л.

АЛГОРИТМ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВ ПРИ УСТАНОВЛЕНИИ НАЛИЧИЯ СПЕРМЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИХ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ

Санкт-Петербург

При установлении наличия спермы в пятнах на вещественных доказательствах первостепенное значение имеют ориентировочные или предварительные методы. Данные методики помогают судебно-медицинскому эксперту ориентироваться при исследовании вещественных доказательств, то есть найти более подозрительные участки, где уже доказательными методами устанавливают присутствие спермы (Туманов А.К., 1961, 1975; Томилин В.В. и

др., 1989, Барсегянц Л.О., 1997; Чарный В.И., 1998).

В судебно-медицинской практике достаточно долгое время применялась реакция на кислую фосфатазу (Чарный В.И., 1965, 1966; Зарецкая Е.Ф., Ачеркан Н.Н., 1980; Стегнова Т.В. и соавт., 1990; Londquist F., 1946; Kind S.S., 1964; Divall G.B., 1985; Chiasson D.A. et al., 1994).

Зингерман М.Я. (1973), а также Steinman G. (1995) рекомендуют для установления наличия спермы исследовать изоферменты кислой фосфатазы. В настоящее время в судебно-медицинской практике применяются также тестирующие полоски «Фосфатест». Все вышеперечисленные методики направлены на выявление только общей кислой фосфатазы и носят сугубо субъективный характер.

Нами разработана и апробирована методика выявления общей кислой фосфатазы, а также отделения простатической кислой фосфатазы от общей в пятнах на вещественных доказательствах колориметрическим методом с помощью диагностического набора «ACID PHOSPHATASE Colorimetric Humazym test» для сыворотки крови (тест-наборы приобретены в фирме «ВЕКТОР-БЕСТ». Принцип метода заключается в том, что 1-Нафтил фосфат гидролизуется кислой фосфатазой (КФ) к фосфату и переходит в 1-Нафтол, который преобразуется с FRTR-СОЛЬЮ (Красная быстрая соль) и способен к окрашиванию. Увеличение абсорбционной способности при длине волны в 405 нанометров пропорционально активности общей кислой фосфатазы в образце. Простатическая кислая фосфатаза может быть блокирована тартратом и может быть определена косвенно (через непростатическую кислую фосфатазу) путем вычисления разности в активности общей кислой фосфатазы и активности фосфатазы, оставшейся после подавления простатической кислой фосфатазы ингибитором (тартратом).

Для исследования были использованы сухие образцы спермы, слюны, крови и влагалищных выделений, из которых готовили навески по 15 мг. Исследуемый материал помещали в пробирки и заливали по 0,2 мл дистиллированной воды с рН 7,2-7,6 для экстрагирования в течение 20 часов при 4ºС. Затем вытяжки из объектов, как неразведенные, так и в разведениях 1:10 -

разведениях от 1:10 до 1:10000 (оптическая плотность от 2,123 до 0,195). В разведении 1:100000 был получен отрицательный результат. Следовательно, разведение 1:10000 следует считать порогом чувствительности данной реакции. При реакции с тартратом, смешанным с субстратом, в разведениях 1:10 и 1:100 было отмечено достаточно выраженное, но далеко не полное ингибирование простатической кислой фосфатазы (оптическая плотность 1,316 и 0,231), а в разведениях 1:1000 и 1:10000 наблюдалось практически полное ее ингибирование (оптическая плотность 0,042 и 0,023), что указывает на простатичесое происхождение кислой фосфатазы. При реакции с субстратом с экстрактами из пятен сухой человеческой крови, цельным и в разведении от 1:10, было отмечено выявление кислой фосфатазы (оптическая плотность от 1,235 до 0,091), при этом в реакции с тартратом, смешанным с субстратом, в данных экстрактах был отмечен фактически такой же уровень кислой фосфатазы, без его снижения (оптическая плотность 1,035 и 0,098), что свидетельствует о том, что данная фосфатаза имеет не простатическое происхождение. В разведении 1:100 кислая фосфатаза не выявлялась. С цельными экстрактами из пятен сухого человеческого влагалищного секрета отмечалось выявление кислой фосфатазы (оптическая плотность от 0,257), при этом при реакции с тартратом, смешанным с субстратом, в цельном экстракте наблюдалось практически полное ее ингибирование (оптическая плотность 0,036), что указывает на простатическое происхождение фосфатазы. В разведении 1:100 кислая фосфатаза не выявлялась.

С цельным экстрактом из сухой человеческой слюны при реакции с субстратом наблюдалось незначительное выявление кислой фосфатазы (оптическая плотность 0,099), которая достаточно сильно ингибировалась при реакции с тартратом, смешанным с субстратом (оптическая плотность 0,022). В разведениях 1:10 и 1:100 выявления кислой фосфатазы не наблюдалось. С цельным экстрактом из стерильной марли при реакции с субстратом отмечалось очень низкое значение оптической плотности (0,002).

Из результатов проведенных исследований следует, что наиболее целесообразным является использование для экспертных целей водных экстрактов из тампонов с содержимым влагалища, либо из пятен на вещественных доказательствах в разведении 1:10, так как кислая фосфатаза хорошо выявляется в водных растворах пятен сухой спермы человека в разведениях 1:1000 и 1:10000, в экстрактах из сухих влагалищных выделений, сухой крови и сухой слюны человека при разведении 1:10 кислая фосфатаза практически не выявляется. Мы считаем, что экстракты из сухой слюны человека и экстракты из сухих влагалищных выделений человека, в разведении 1:10 целесообразно использовать в качестве отрицательных контролей. Это подтвердилось на практике, так как при низком значении оптической плотности в отрицательных контролях мы получаем большое количество ложноположительных результатов. При высокой концентрации спермы в исследуемом материале (разведения экстрактов из сухой спермы человека 1:10 и 1:100) наблюдается не полное, а лишь частичное ингибирование простатической фосфатазы тартратом. Следовательно, слишком концентрированные вытяжки из пятен на вещественных доказательствах, либо из тампонов с содержимым

влагалища, следует разводить в 5 или в 10 раз, а затем исследовать повторно как с ингибитором, так и без него, чтобы утверждать, что фосфатаза в исследуемых пятнах простатическая. При проведении практических экспертных исследований мы видим, что ингибирование хорошо наблюдается при значении оптической плотности в исследуемой вытяжке 0,4-0,5, а, значит, надо стараться подобрать такое разведение, которое привело бы значение оптической плотности к вышеуказанному значению. При проведении экспертизы вещественных доказательств в качестве положительного контроля целесообразно, по нашему мнению, использовать экстракты из сухой спермы человека в разведении 1:10 и 1:100.

Таким образом, метод выявления общей кислой фосфатазы, а также отделения простатической кислой фосфатазы от общей в пятнах на вещественных доказательствах колориметрическим методом с помощью диагностического набора «ACID PHOSPHATASE Colorimetric Humazym test» для сыворотки крови,

который применяется в клинической практике для диагностических целей, используемый нами для ориентировочного установления наличия спермы в тампонах и в пятнах на вещественных доказательствах, является специфичным и высокочувствительным методом с объективной регистрацией и компьютерной обработкой результатов. Данная методика отличается высокой производительностью и экономичностью (цена одного исследование в несколько раз меньше, чем при применении диагностических тест-полосок «Фосфатест»), а также, в отличие от других ранее применяемых методик, позволяет отделить общую кислую фосфатазу от простатической.

Вышеизложенное позволяет рекомендовать данный метод для внедрения и широкого использования в экспертной практике.

Мы пришли к выводу, что целесообразен следующий порядок исследования вещественных доказательств при установлении наличия на них спермы:

1.Вырезки и смывы с вещественных доказательств помещают в пробирки

изаливают с небольшим избытком дистиллированной водой с рН 7,2-7,6 и экстрагируют в течение 20 часов при 4ºС.

2.Устанавливают наличие общей кислой фосфатазы колориметрическим методом с помощью диагностического набора «ACID PHOSPHATASE Colorimetric Humazym test», а также с помощью термошейкера «ST-3» и ридера

«SUNRISE» фирмы «TECAN».

3.Отделяют простатическую кислую фосфатазу от непростатической с помощью вышеуказанного тест-набора и вышеперечисленного оборудования.

4.Вытяжку отсасывают и переносят в другие пробирки, при длительном хранении помещают в условия бытового холодильника.

5.Кусочки исследуемого материала заливают 10% раствором аммиака, а затем исследуют методом концентрированного извлечения сперматозоидов (по Серопяну А.К.).

6.В случае отрицательного результата исследуют сохраненную ранее вытяжку на наличие простатического антигена человека (ПСА) с помощью диагностического набора «ПСА общий-ИФА-БЕСТ Т-8458», а также с помощью

термошейкера «ST-3», автоматического вошера «COLUMBUS pro» и ридера

«SUNRISE» фирмы «TECAN».

При таком порядке исследования можно добиться наибольшей рациональности и эффективности при получении результатов, а также значительно сэкономить трудозатраты. В случае азооспермии и олигозооспермии проходящих по делу лиц, установление наличия ПСА в следах на вещественных доказательствах позволяет доказательно установить в них наличие спермы. Несколько таких случаев уже встречались в нашей экспертной практике.

Список литературы:

1. Барсегянц Л.О. Суд.-мед. экспертиза вещественных доказательств // В кн.: Судебная медицина. Под редакцией проф. Томилина В.В. – М., 1997. – С. 241-278.

2 Зарецкая Е.Ф., Ачеркан Н.Н. Установление наличия спермы в пятнах реакцией ингибиции кислой фосфатазы тартратом // Судебно-медицинская экспертиза. – 1980. –

Т. 23. – № 4. – С. 33-35.

3.Зингерман М.Я. Исследование изоферментов кислой фосфотазы в пятнах спермы // В кн.: Седьмая республиканская (расширенная) конференция научнопрактическая конференция СМ экспертов. – Карельская АССР, Петрозаводск, 1973. –

С. 112-114.

4.Стегнова Т.В., Иоанесян Л.С., Лозинский Т.Ф. Установление наличия и групповой принадлежности спермы в смешанных пятнах методом изоэлектрического фокусирования // Суд.-мед. экспертиза. – 1990. – Т. 33. – № 2. – С. 33-36.

5.Томилин В.В., Барсегянц Л.О., Гладких А.С. Судебно-медицинское исследование вещественных доказательств. – М.: Медицина. – 1989. – 303 с.

6.Туманов А.К. СМ исследование вещественных доказательств. – М., 1961. –576 с.

7.Туманов А.К. Основы судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств. – М.: Медицина. – 1975. – 407 с.

8.Чарный В.И. Об ориентировочном значении количественной реакции на кислую фосфатазу при установлении наличия спермы в пятнах // Судебно-медицинская экспертиза. – 1965. – Т. 8. – № 2. – С. 18-22.

9.Чарный В.И. О применении количественной реакции на кислую фосфатазу при исследовании семенных пятен // В кн.: Актуальные вопросы судебной медицины и криминалистики. – Л., 1966. – С. 141-142.

10.Чарный В.И. СМ экспертиза биологическими методами // В кн: Судебная медицина. Под редакцией проф. Матышева А.А. – СПб., 1998. – С. 435-468.

11.Chiasson D.A.; Vigorito R., Lee Y.S., Smialek J.E., Interpretation of postmortem vaginal acid phosphatase determinations // Am. J. Forensic Med. Pathol. – 1994. – Vol. 15. –

№3. – P. 242-246.

12.Divall G.B. The application of electrophoretic techniques in field of criminology // Electrophoresis. – 1985. – Vol. 6. – P. 249-250.

13.Kind S.S. in: Curry A.S. (Ed) Methods in Forensic Science // Interscience. – 1964. – Vol. 3. – P. 266-288.

14.Londquist F. Function of prostatic phosphotase // Nature. – 1946. – Vol. 158. – P.

710-711.

Сулейменова Г.М.

РАЦИОНАЛЬНЫЙ ПОДХОД К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ БИОЛОГИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ В ЭКСПЕРТИЗЕ ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВ

Санкт-Петербург

Основной вопрос, решаемый в судебно-медицинской экспертизе вещественных доказательств - идентификация обнаруженного биоматериала. Чаще всего объектами идентификации являются следы крови и выделений.

В настоящее время идентификационные исследования могут быть проведены по двум направлениям:

1)экспертами-биологами с помощью серологических и электрофоретических методов;

2)экспертами-генетиками путем молекулярно-генетического анализа (МГА) выделенной из объекта ДНК.

Несмотря на вероятностный характер выводов в обоих типах экспертиз, идентификационная значимость их различна.

Ценность выводов об идентификации следов в любом случае зависит от количества изученных признаков объекта. С увеличением их численности прогрессивно снижается частота встречаемости определенного набора маркеров, которая коррелирует с вероятностью случайного совпадения характеристик сравниваемых объектов. Соответственно этому возрастает вероятность происхождения изученных следов из одного источника. Типирование материала по одной системе как в биологической, так и в генетической экспертизе одинаково мало эффективно.

(выпускаемые иностранными фирмами). Достаточное количество примененных тест-систем позволяет установить некое множество генетических признаков, характеризующих объект. Полученные данные в обязательном порядке статистически обрабатывают, указывают в выводах результат – вероятность идентичности изученных объектов (при совпадении их характеристик), в той или иной степени приближающуюся к 1 (100%). Этим достигается высокая идентификационная значимость экспертизы.

Эксперты-биологи исследуют в объектах клеточные и секреторные групповые субстанции (антигены), типовые фракции белков организма, специфичность которых также генетически обусловлена. Однако ряд причин, в основном экономического порядка, привели к тому, что численность доступных для маркировки групповых свойств мала. В большинстве случаев эксперты повсеместно ограничиваются изучением одной системы АВО (используя самые дешевые диагностические сыворотки отечественного производства), что позволяет маркировать в высохшем материале всего четыре группы крови. Лишь при совпадении по этой системе групп крови проходящих по делу лиц ее